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普通白菜PRR5的克隆、表达及功能验证

生物技术通报 2023年第10期39卷 128-135页

作者：侯瑞泽鲍悦陈启亮毛桂玲韦博霖侯雷平李梅兰山西农业大学园艺学院晋中030800

克隆BrcPRR5,并研究其在不同组织和不同发育时期的表达模式及功能,为了解PRR5对普通白菜成花转变的影响奠定基础。运用RT-PCR方法克隆PRR5的同源基因BrcPRR5,并对其进行生物信息学分析,利用荧光定量PCR测定该基因在不同组织部位和不同... 详细信息

克隆BrcPRR5,并研究其在不同组织和不同发育时期的表达模式及功能,为了解PRR5对普通白菜成花转变的影响奠定基础。运用RT-PCR方法克隆PRR5的同源基因BrcPRR5,并对其进行生物信息学分析,利用荧光定量PCR测定该基因在不同组织部位和不同发育时期的相对表达量,构建过表达载体并转化拟南芥进行基因的功能验证。结果表明,BrcPRR5的CDS全长为1 701 bp,编码566个氨基酸,通过与其他物种的同源蛋白进行氨基酸序列多重比对,确定得到的序列属于普通白菜PRR5同源基因。BrcPRR5在茎和花中的表达量高于叶和果荚中的表达量;在S0茎尖中表达量最高,说明其在普通白菜成花转变过程中表达量上调可能促进成花转变。超表达转基因植株开花期提前,株高和茎粗明显优于野生型。BrcPRR5可以促进植株提早抽薹开花。

关键词：普通白菜 BrcPRR5 成花转变基因克隆功能验证

普通白菜PGIP基因BcPGIP分子特征研究

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核农学报 2010年第2期24卷 281-286页

作者：刘颖吴剑锋卢海宇曹家树余小林浙江大学蔬菜研究所浙江杭州310029

根据甘蓝型油菜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因PGIP3的全长序列设计引物,从普通白菜核隐性不育两用系‘Bajh97-01A/B'可育株中成功克隆了多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因BcPGIP,对其DNA和cDNA全长序列进行分析,结果表明,该基因包含2... 详细信息

根据甘蓝型油菜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因PGIP3的全长序列设计引物,从普通白菜核隐性不育两用系‘Bajh97-01A/B'可育株中成功克隆了多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因BcPGIP,对其DNA和cDNA全长序列进行分析,结果表明,该基因包含2个外显子和1个内含子,最大开放阅读框为996bp,编码331个氨基酸,共有10个LRR(Leucine-rich repeat,高氨酸富集)重复序列。将BcPGIP与其他植物的49个PGIPs蛋白进行同源序列比对后,发现PGIP蛋白特征序列非常保守。由重建的进化树可知,该基因与十字花科芸薹属的甘蓝型油菜的同源性最高。通过实时荧光定量PCR分析发现,BcPGIP基因可能与花粉的发育相关。

关键词：普通白菜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP) 花粉发育实时荧光定量PCR

普通白菜CYP79B2同源基因的克隆与表达

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生物技术通报 2022年第12期38卷 168-174页

作者：胡琪侯玉翔李璿李梅兰山西农业大学园艺学院晋中030800

CYP79B是拟南芥参与生长素合成的关键基因,克隆白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-2,并分析该基因的组织表达情况,为研究普通白菜开花调控的基因功能验证提供理论依据。采用RT-PCR方法克隆普通白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-2,并对其... 详细信息

CYP79B是拟南芥参与生长素合成的关键基因,克隆白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-2,并分析该基因的组织表达情况,为研究普通白菜开花调控的基因功能验证提供理论依据。采用RT-PCR方法克隆普通白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-2,并对其进行生物信息学分析,利用RT-qPCR方法研究BrcCYP79B2-2在普通白菜不同组织中的表达情况。结果表明,BrcCYP79B2-2的CDS全长为1 554 bp,编码517个氨基酸。经氨基酸序列多重比对发现,BrcCYP79B2-2氨基酸序列与大白菜的同源性为99.42%,BrcCYP79B2-2在白菜不同变种中高度保守。RT-qPCR分析表明,该基因在不同组织中均有表达,在根中表达量最高,花蕾中较低,而在茎中的表达量最低。经低温处理后,BrcCYP79B2-2在茎尖的表达量降低。另外,BrcCYP79B2-2在不同时期的表达量也不同,在营养生长期表达量较高,但是在花芽即将分化时表达量降低。BrcCYP79B2-2对低温处理有响应,且在不同组织中的表达差异显著,推测该基因的表达可能影响花芽分化。

关键词：普通白菜生长素 BrcCYP79B2-2 基因克隆表达分析

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普通白菜遗传转化研究进展

中国蔬菜 2012年第12X期 1-6页

作者：陈泠先崔丽洁钱忠英潘静娴开国银上海师范大学植物种质资源研发中心生命与环境科学学院上海200234

普通白菜〔Brassica campestris ***(L.)Makino *** Tsen et Lee〕属十字花科芸薹属,是我国长江流域及南方各省普遍栽培的重要绿叶蔬菜之一,生产中迫切需要培育抗病、抗虫、抗逆和具有优良农艺性状的新品种。遗传转化技术为普通白菜抗... 详细信息

普通白菜〔Brassica campestris ***(L.)Makino *** Tsen et Lee〕属十字花科芸薹属,是我国长江流域及南方各省普遍栽培的重要绿叶蔬菜之一,生产中迫切需要培育抗病、抗虫、抗逆和具有优良农艺性状的新品种。遗传转化技术为普通白菜抗虫、抗病、耐热等难题提供了新的解决途径。本文对普通白菜的再生体系、遗传转化方法及外源基因表达等研究进展进行了概述;农杆菌介导法由于成本低、简便易行、转化效率较高,成为白菜类作物遗传转化中最常用的办法。

关键词：普通白菜再生体系遗传转化基因表达综述

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普通白菜品种资源数据库系统的应用

中国蔬菜 2013年第11X期 81-87页

作者：宋韵琼吴嘉慧潘静娴上海师范大学生命与环境科学学院上海师范大学植物种质资源开发中心上海200234 上海交通大学农业与生物学院上海200240

在深入调查与文献查阅的基础上,对国内外普通白菜品种资源信息进行了收集和整理,运用数据库与网络技术,以Visual Studio 2010和SQL Server 2005为开发工具,采用VB语言编程,构建了普通白菜品种资源数据库。本数据库已收录600种普通白菜品... 详细信息

在深入调查与文献查阅的基础上,对国内外普通白菜品种资源信息进行了收集和整理,运用数据库与网络技术,以Visual Studio 2010和SQL Server 2005为开发工具,采用VB语言编程,构建了普通白菜品种资源数据库。本数据库已收录600种普通白菜品种,可实现网站前台的种质图文信息浏览与多样化查询功能,以及后台品种和用户管理功能。

关键词：普通白菜品种资源数据库

普通白菜薹茎亮绿性状遗传规律研究及基因定位

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中国蔬菜 2021年第8期 39-45页

作者：胡阳宋莉萍汪爱华梁红艳邱文兵蔡美仲崔晓培高长斌周国林李平荆州农业科学院湖北荆州434007 武汉市农业科学院湖北武汉430070

利用薹茎亮绿的自交系Q161和常规有蜡质的自交系Q195为亲本构建F_(1)、F_(2)、BC_(1)P_(1)、BC_(1)P_(2)群体,对普通白菜薹茎亮绿性状的遗传规律进行分析。结果表明,普通白菜薹茎亮绿性状由1对隐性基因控制。利用BSA-seq对F_(2)群体的2... 详细信息

利用薹茎亮绿的自交系Q161和常规有蜡质的自交系Q195为亲本构建F_(1)、F_(2)、BC_(1)P_(1)、BC_(1)P_(2)群体,对普通白菜薹茎亮绿性状的遗传规律进行分析。结果表明,普通白菜薹茎亮绿性状由1对隐性基因控制。利用BSA-seq对F_(2)群体的2个极端混池进行基因组30×重测序分析,同时对双亲进行基因组20×重测序分析,初步将薹茎亮绿基因定位在A09染色体的44.1~45.0 Mb区间内。通过双亲的基因组重测序数据开发与薹茎亮绿性状连锁的InDel标记,将薹茎亮绿基因定位在A09染色体的标记Br119和Br116之间,2个标记间的物理距离为380 kb。

关键词：普通白菜薹茎亮绿 BSA-seq InDel标记基因定位

普通白菜1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因Bcrbc S的克隆及表达分析

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中国蔬菜 2019年第1期 20-25页

作者：刘东让侯喜林肖栋南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室江苏南京210095 中国农业科学院蔬菜花卉研究所农业农村部园艺作物生物学与种质创制重点实验室北京100081 江苏现代园艺工程技术中心江苏南京210095

利用RACE技术,从普通白菜抗霜霉病品种苏州青叶片克隆到1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit,Bcrbc S)基因的全长c DNA序列。采用q RT-PCR分析该基因在普通白菜不同组织... 详细信息

利用RACE技术,从普通白菜抗霜霉病品种苏州青叶片克隆到1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit,Bcrbc S)基因的全长c DNA序列。采用q RT-PCR分析该基因在普通白菜不同组织的表达模式。利用SDS-PAGE技术分析了该基因的原核表达特征。序列分析结果表明,Bcrbc S基因的c DNA序列全长为733 bp,其中开放阅读框长度为543 bp,共编码181个氨基酸,分子质量为20.3×10~3 Da,理论等电点为8.23。氨基酸同源系统进化分析表明,普通白菜Bcrbc S基因与同科植物的进化关系相近。实时定量分析结果表明,Bcrbc S基因在普通白菜叶中表达最强;在SA和Na Cl处理下,Bcrbc S基因表达量均在处理24 h后达到峰值。原核表达载体经IPTG诱导表达出分子质量约为20×10~3 Da的融合蛋白。

关键词：普通白菜 1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因序列分析 qRT-PCR 原核表达

普通白菜种质资源耐抽薹性评价及耐抽薹种质的筛选

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中国蔬菜 2019年第9期 37-43页

作者：刘娟黎黎陆柄辰邓朴艾辛湖南农业大学园艺园林学院

以64份普通白菜种质为试材进行露地栽培试验,通过对耐抽薹指标和主要农艺性状进行主成分分析、相关性分析以及隶属函数、聚类分析,综合评价普通白菜种质的耐抽薹性。结果表明:利用主成分分析法将普通白菜9个指标转化为抽薹时间、植株生... 详细信息

以64份普通白菜种质为试材进行露地栽培试验,通过对耐抽薹指标和主要农艺性状进行主成分分析、相关性分析以及隶属函数、聚类分析,综合评价普通白菜种质的耐抽薹性。结果表明:利用主成分分析法将普通白菜9个指标转化为抽薹时间、植株生长状态和生长量3个主成分因子,累积贡献率达79.147%。相关性分析结果表明,抽薹期、现蕾期、开花期之间呈极显著正相关,其中现蕾期的观测最为简单可靠,可快速评价普通白菜的耐抽薹性。运用隶属函数法将64份材料分为5个耐抽薹等级,并筛选出4份极耐抽薹种质和6份耐抽薹种质。聚类分析将隶属函数法筛选出的极耐抽薹种质和耐抽薹种质均划分到第Ⅱ类群,说明隶属函数法和聚类分析法均能有效鉴定普通白菜的耐抽薹性,其中隶属函数法更为简便直观。

关键词：普通白菜耐抽薹性现蕾期聚类分析隶属函数法

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普通白菜CYP同源基因克隆与表达分析

华北农学报 2022年第5期37卷 45-51页

作者：侯瑞泽侯玉翔许小勇李璿李梅兰山西农业大学园艺学院山西太谷030801

CYP79B2是拟南芥中调控生长素合成的有关基因,通过克隆普通白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-1,分析其在不同组织及时期的表达情况,研究其对普通白菜春化开花的调控作用机理,旨在为后续普通白菜生长素编码基因的功能验证奠定理论基础。... 详细信息

CYP79B2是拟南芥中调控生长素合成的有关基因,通过克隆普通白菜CYP79B2的同源基因BrcCYP79B2-1,分析其在不同组织及时期的表达情况,研究其对普通白菜春化开花的调控作用机理,旨在为后续普通白菜生长素编码基因的功能验证奠定理论基础。通过qRT-PCR方法从普通白菜中克隆到CYP79B2的同源基因,命名为BrcCYP79B2-1,利用生物信息学方法对其蛋白的结构、理化性质和亲缘关系进行分析,并利用qRT-PCR方法分析其在普通白菜中不同组织和生育期的表达量。结果表明,BrcCYP79B2-1基因编码序列全长为1623 bp,编码540个氨基酸;对其蛋白质的理化分析结果表明,蛋白质分子质量为60.84973 ku,理论等电点为8.71。与其他物种的氨基酸序列进行比对发现,BrcCYP79B2-1在十字花科植物中高度保守,且与芜菁同源性最高,达99.52%;采用qRT-PCR分析普通白菜不同器官的表达量发现,BrcCYP79B2-1在根中的表达量最高,在叶中次之,而在花蕾中的表达量最低;分析幼苗在低温处理0,10,15,16 d的表达发现,BrcCYP79B2-1在低温处理第10天,即营养生长期的表达量达到峰值,而在花芽分化期的表达量有所降低,说明该基因的表达与低温春化有关,可以影响花芽分化。

关键词：普通白菜 BrcCYP79B2-1 生物信息学基因克隆表达分析开花