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带绿色荧光蛋白标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白的真核表达及其生物学功能研究

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生物技术通讯 2012年第2期23卷 162-165页

作者：吕锦晶范忠义徐小洁张浩丁丽华程龙蒋凯杜楠宋良文徐天昊叶棋浓安徽医科大学安徽合肥230032 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 军事医学科学院放射与辐射研究所北京100850 解放军总医院第一附属医院北京100048

目的:构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cdc25c)基因的真核表达载体pEGFP-cdc25c,并检测其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况及生物学功能。方法:采用PCR技术从实验室已有质粒中扩增人cdc25c基因,并... 详细信息

目的:构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cdc25c)基因的真核表达载体pEGFP-cdc25c,并检测其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况及生物学功能。方法:采用PCR技术从实验室已有质粒中扩增人cdc25c基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体中;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测转染细胞的表达情况,荧光显微镜观察cdc25c蛋白在细胞中的定位,并利用cdc2 Tyr15位特异性抗体验证EGFP-cdc25c作为磷酸酯酶的生物学功能。结果:双酶切和测序鉴定表明,pEGFP-cdc25c真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后获得表达,在荧光显微镜下,表达阳性的细胞呈绿色,并定位于细胞质;Western印迹结果表明,EGFP-cdc25c能增加cdc2 Tyr15位的磷酸化水平,起到拮抗内源性cdc25c的功能。结论:构建了带EGFP标签的人cdc25c基因真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞293T中表达,表达产物定位于细胞质;EGFP-cdc25c能够发挥显性负性作用,为深入研究cdc25c的生物学功能奠定了重要基础。

关键词：人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C 真核表达显性负性作用细胞周期

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Wnt信号通路与抗纤维化策略

国际内科学杂志 2009年第4期36卷 230-233页

作者：江鸣（综述）熊伍军（审校）刘菲（审校）同济大学附属东方医院消化内科上海200120

Wnt信号通路包括经典通路和非经典通路,参与人体各种生理病理过程。Wnt途径的异常与多种纤维增生紊乱性疾病相关,Wnt拮抗剂可以拮抗该途径。Wnt拮抗剂根据作用方式分为sFRP(Secre-ted frizzled related protein)和DKK(Dickkopf)两类家... 详细信息

Wnt信号通路包括经典通路和非经典通路,参与人体各种生理病理过程。Wnt途径的异常与多种纤维增生紊乱性疾病相关,Wnt拮抗剂可以拮抗该途径。Wnt拮抗剂根据作用方式分为sFRP(Secre-ted frizzled related protein)和DKK(Dickkopf)两类家族。另外,显性负性作用以及转化生长因子(TGF)-β等均能调控Wnt信号途径,因此深入研究Wnt信号通路及其调控方式,可为将来抗纤维化治疗提供可行性的途径。

关键词： Wnt Wnt拮抗剂纤维化显性负性作用转化生长因子-β

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遗传性对称性色素异常症

中国麻风皮肤病杂志 2007年第1期23卷 41-43页

作者：刘红张福仁山东省皮肤病性病防治研究所济南250022

遗传性对称性色素异常症是一种少见的常染色体显性遗传性皮肤病,皮损以肢端色素异常为主要表现。该病的致病基因已经明确,为DSRAD/ADAR1基因。近年来国内外陆续有新的突变位点报道,但尚未发现突变热点。目前发病机制的研究主要有两种观... 详细信息

遗传性对称性色素异常症是一种少见的常染色体显性遗传性皮肤病,皮损以肢端色素异常为主要表现。该病的致病基因已经明确,为DSRAD/ADAR1基因。近年来国内外陆续有新的突变位点报道,但尚未发现突变热点。目前发病机制的研究主要有两种观点:单倍体不足、显性负性作用。

关键词：遗传性对称性色素异常症 DSRAD/ADAR1基因突变位点单倍体不足显性负性作用

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-DNFGFR1在小鼠BMSCs中的表达及意义

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实用骨科杂志 2012年第12期18卷 1091-1094页

作者：李霞徐永清李福兵庞荣清杨杜明刘华成都军区昆明总医院骨科全军创伤骨科研究所云南昆明650032 成都军区昆明总医院干细胞与组织器官工程研究中心云南昆明650032

目的探讨含有基因成纤维细胞生长因子受体1显性负性分子(DN FGFR1)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-DNFGFR1转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后的表达及意义。方法体外分离培养C57/BL小鼠BMSCs,应用综合贴壁... 详细信息

目的探讨含有基因成纤维细胞生长因子受体1显性负性分子(DN FGFR1)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-DNFGFR1转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后的表达及意义。方法体外分离培养C57/BL小鼠BMSCs,应用综合贴壁的方法纯化BMSCs。由阳离子脂质体介导将pcDNA3.1(+)-DNFGFR1转入BMSCs中,用RT-PCR法检测DNFGFR1mRNA的表达。结果小鼠BMSCs原代培养24h后见细胞贴壁伴有伸展现象,细胞核清晰,10d左右细胞密度明显增加,细胞形成单层,融合率达80%,综合贴壁培养使BMSCs更纯。转染组条带灰度值与β-actin比值(3.8)明显高于未转染组(0.5)。结论 pcDNA3.1(+)-DNFGFR1质粒能被导入BMSCs并得到表达,为研究FGFR1的功能奠定了实验基础。

关键词：骨髓间充质干细胞显性负性作用成纤维细胞生长因子受体1 基因表达小鼠