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显微介导的远缘基因渐渗技术在鲤育种中的应用

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中国水产科学 2011年第2期18卷 275-282页

作者：闫学春张晓峰刘翠孙效文梁利群曹顶臣李超葛彦龙农业部水产生物技术重点开放实验室中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨师范大学生命科学与技术学院

以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外源DNA供体,运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpioL.)受精卵内,创建鲤外源DNA导入系,并利用AFLP分子标记技术和肌肉营养成分分析,对显微介导中国明对虾... 详细信息

以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外源DNA供体,运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpioL.)受精卵内,创建鲤外源DNA导入系,并利用AFLP分子标记技术和肌肉营养成分分析,对显微介导中国明对虾基因鲤进行外源DNA检测与蛋白质和氨基酸含量进行测定,结果表明:(1)在30对AFLP引物中,有8对所扩增带,其显微介导中国明对虾基因鲤亲本和子代中都有和中国明对虾基因相同而对照鲤没有的带。说明受体鱼中,肯定有一段序列与目的基因序列一致,研究证明了亲缘关系甚远的异源DNA片段的超远缘杂交的可行性。(2)导入中国明对虾总DNA片段的显微介导中国明对虾基因鲤的蛋白质含量分别为18.37%、18.47%、17.99%,均高于对照组(17.06%);而氨基酸的总量分别为17.16%、17.56%、16.92%,也高于对照组(16.13%),其中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸等4种鲜味氨基酸含量明显超过对照组,经数理统计分析,均有显著差异(P显微介导中国明对虾基因鲤的营养成分和氨基酸含量均产生影响,这可对鲤的品质改进,丰富鲤的遗传基础,为显微介导的超远缘杂交技术的应用提供思路。

关键词：显微介导远缘基因总DNA 渐渗杂交中国明对虾鲤

显微介导中国对虾基因鲤体内22种金属含量的测定及初步分析

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东北农业大学学报 2015年第12期46卷 65-71页

作者：闫学春覃东立栾培贤曹顶臣何立川中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070 淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室哈尔滨150070 淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室哈尔滨150070

通过微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定显微介导中国对虾基因鲤和普通鲤(Common carp)肌肉中Ga、Cu、Zn、Fe、Se、Mn、Cr、Mo、Co、Ni、V、Sn、Sr、Al、Ti、Ag、W、Tl、Bi、Hg、Cd、Pb等22种金属元素的含量,比较分析显微介导中国对... 详细信息

通过微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定显微介导中国对虾基因鲤和普通鲤(Common carp)肌肉中Ga、Cu、Zn、Fe、Se、Mn、Cr、Mo、Co、Ni、V、Sn、Sr、Al、Ti、Ag、W、Tl、Bi、Hg、Cd、Pb等22种金属元素的含量,比较分析显微介导中国对虾基因鲤和普通鲤肌肉中金属元素富集情况。结果表明,除显微介导中国对虾基因鲤家系C中Zn元素含量略高于普通鲤外,其他金属元素含量均低于普通鲤。统计分析表明显微介导中国对虾基因鲤对金属元素富集能力与普通鲤相比无显著差异(P>0.05)。同时,本研究中显微介导中国对虾基因鲤和普通鲤重金属Cu、Zn、Cr、Hg、Cd、Pb含量均符合相关食品安全标准要求。

关键词：显微介导中国对虾鲤金属含量

显微介导远缘基因鲤家系的建立及遗传多样性分析

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安徽农业大学学报 2013年第1期40卷 100-106页

作者：杜科闫学春李超曹顶臣周丹马吉敏孙效文赵元凤大连海洋大学水产与生命学院大连116023 淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070

运用显微介导远缘杂交技术,将未经遗传修饰的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入受体鲤(Cyprinus carpio L·)内,以期通过这种基因组水平的远缘杂交技术改善受体鲤的品质。创建的远缘基因鲤提高了鲤的品质,丰富了鲤的遗... 详细信息

运用显微介导远缘杂交技术,将未经遗传修饰的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入受体鲤(Cyprinus carpio L·)内,以期通过这种基因组水平的远缘杂交技术改善受体鲤的品质。创建的远缘基因鲤提高了鲤的品质,丰富了鲤的遗传基础。本研究对48尾显微介导远缘基因鲤亲鱼进行标记取样,通过20个具有多态的鲤微卫星引物分析,选出在中度遗传距离(0.5～0.6)的亲本进行繁殖,从子代群体中选出品质性状优良的3个家系为研究对象。利用微卫星标记,分别对3个家系进行了遗传背景分析。结果表明,3个家系的平均有效等位基因数(Ne)分别为2.153 5、2.384 0和2.411 0;平均观测杂合度(Ho)分别为0.482 5、0.430 0和0.445 0;平均期望杂合度(He)分别为0.519 5、0.572 0和0.570 0;平均多态信息含量(PIC)分别为0.430 0、0.471 5和0.494 5。其遗传多样性处于中度多态(0.25

关键词：显微介导远缘基因鲤微卫星标记遗传多样性

显微介导鳜基因镜鲤F_(1)代肌肉中蛋白质和氨基酸组成与含量

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水产学杂志 2022年第3期35卷 15-21页

作者：闫学春栾培贤吴学工中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150070

本研究利用显微介导远缘杂交技术,将鳜(Siniperca chuatsi)基因组DNA直接导入镜鲤(Cyprinus carpio L)受精卵内并获得F1代,测定1龄显微介导F1代鳜基因镜鲤和普通镜鲤肌肉中蛋白质和氨基酸组成与含量。结果发现,显微介导鳜基因镜鲤F1代... 详细信息

本研究利用显微介导远缘杂交技术,将鳜(Siniperca chuatsi)基因组DNA直接导入镜鲤(Cyprinus carpio L)受精卵内并获得F1代,测定1龄显微介导F1代鳜基因镜鲤和普通镜鲤肌肉中蛋白质和氨基酸组成与含量。结果发现,显微介导鳜基因镜鲤F1代肌肉中粗蛋白质含量为18.69%,高于对照镜鲤的17.45%;氨基酸总量为79.77%,高于对照镜鲤的74.53%,其中4种鲜味氨基酸总含量和必需氨基酸总量分别为30.07%、28.12%和32.71%、30.48%,均高于对照镜鲤。显微介导鳜基因镜鲤F1代肌肉中必需氨基酸含量(WEAA)和总氨基酸含量(WTAA)的比值为41.01%,必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量的比值(WEAA/WNEAA)为69.54%。结果表明,显微介导鳜基因镜鲤F1代肌肉中氨基酸的组成符合FAO/WHO标准的要求,且第一限制性氨基酸含量丰富,显著高于普通镜鲤,可在蛋白质营养上对人体起到补缺作用。本研究结果为显微介导鳜基因镜鲤的商品化提供理论依据。

关键词：显微介导鳜总DNA 镜鲤F_(1)代肌肉营养成分

显微介导中国对虾基因鲤转录组测序及差异表达基因分析

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水产学杂志 2022年第5期35卷 1-7页

作者：闫学春栾培贤何立川中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150070

运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导人鲤(Cyprinus carpio)受精卵内,创建鲤外源DNA导入系。利用Illumina高通量测序平台,对未进行显微介导和显微介导中国明对虾基因的2种鲤的肌肉组织进行... 详细信息

运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导人鲤(Cyprinus carpio)受精卵内,创建鲤外源DNA导入系。利用Illumina高通量测序平台,对未进行显微介导和显微介导中国明对虾基因的2种鲤的肌肉组织进行转录组测序分析,结果获得差异表达基因417个,并对其进行GO(Gene Ontology)功能注释和KEGG代谢通路注释,得到18个与氨基酸相关的差异表达基因,其中14个下调基因,4个上调基因。分析发现,其中有2个基因在氨基酸代谢通路中能引起氨基酸含量的升高,即氨甲酰-磷酸合成酶(CPS2)基因和脯氨酰4-羟化酶(P4H)基因。对这2个基因进行实时荧光定量PCR验证发现,其基因的表达趋势与转录组结果一致,从而证实了转录组的分析结果。

关键词：显微介导中国对虾总DNA 转录组测序差异表达基因

显微介导中国对虾基因鲤肌肉蛋白差异表达分析

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水产学杂志 2023年第3期36卷 10-16页

作者：闫学春张颖栾培贤中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150070

本文通过显微注射方法,将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpio L.)受精卵内,获得显微介导中国对虾基因鲤。为了研究显微介导中国对虾基因鲤蛋白质的表达变化,利用iTRAQ技术定量蛋白质测序分析了未进... 详细信息

本文通过显微注射方法,将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpio L.)受精卵内,获得显微介导中国对虾基因鲤。为了研究显微介导中国对虾基因鲤蛋白质的表达变化,利用iTRAQ技术定量蛋白质测序分析了未进行显微介导和显微介导中国明对虾基因的2种鲤的肌肉组织,寻找与氨基酸和脂肪酸相关的差异表达蛋白,并分析了差异表达蛋白GO功能注释和KEGG代谢通路。结果共鉴定蛋白质999个,表达差异蛋白92个,其中上调蛋白58个,下调蛋白34个。差异蛋白Pathway富集分析表明,显著富集于脂肪酸和氨基酸等代谢通路上的差异蛋白有13个,其中在精氨酸和脯氨酸代谢通路中发现的上调7.51倍的肌酸激酶(creatine kinase)有促进鱼类肌肉发育的作用;而在脂肪酸代谢通路中发现的下调0.59倍的线粒体三功能蛋白(mitochondrial trifunctional protein),有提高鱼体内多种饱和与不饱和脂肪酸含量的作用。同时对筛选到的两个蛋白进行实时荧光定量PCR验证,证实了蛋白质组的分析结果。

关键词：显微介导中国明对虾鲤 iTRAQ 差异蛋白质表达

显微介导河蟹基因的镜鲤F1代肌肉营养成分分析

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水产学杂志 2019年第5期32卷 13-17,37页

作者：闫学春栾培贤何立川中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室

用常规方法测定饲养在相同条件下平均体质量为234g和227g的显微介导河蟹基因的镜鲤Cyprinus carpio var. specularis F1代和普通镜鲤(对照鱼)肌肉中的营养成分,以研究河蟹总DNA直接导入镜鲤后子代的氨基酸和蛋白质含量的变化。结果发现... 详细信息

用常规方法测定饲养在相同条件下平均体质量为234g和227g的显微介导河蟹基因的镜鲤Cyprinus carpio var. specularis F1代和普通镜鲤(对照鱼)肌肉中的营养成分,以研究河蟹总DNA直接导入镜鲤后子代的氨基酸和蛋白质含量的变化。结果发现:显微介导河蟹基因的F1代镜鲤与对照鲤肌肉中粗蛋白质含量、氨基酸总量、4种鲜味氨基酸总含量和必需氨基酸总量分别为20.71%和18.32%、78.94%和67.89%、30.12%和25.86%、32.22%和27.85%,均高于普通镜鲤,两种镜鲤的第一限制性氨基酸都是缬氨酸。与普通镜鲤相比较,显微介导河蟹基因的镜鲤具有一定的营养优势。本研究结果为显微介导河蟹基因镜鲤的商品化提供理论依据。

关键词：显微介导河蟹总DNA 镜鲤F1代肌肉营养成分

通过显微介导将鳜总DNA片段导入镜鲤基因组的分子验证

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水产学杂志 2020年第4期33卷 1-6页

作者：闫学春栾培贤何立川中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150070

利用外源基因导入技术,将1nL左右未经遗传修饰的鳜Siniperca chuatsi基因组DNA导入2500余粒镜鲤Cyprinus carpio受精卵核区附近,孵出仔鱼1500余尾,放入池塘300尾正常饲养。利用引物(E-AGG,M-CTA)对显微介导鳜基因镜鲤进行扩增片段长度... 详细信息

利用外源基因导入技术,将1nL左右未经遗传修饰的鳜Siniperca chuatsi基因组DNA导入2500余粒镜鲤Cyprinus carpio受精卵核区附近,孵出仔鱼1500余尾,放入池塘300尾正常饲养。利用引物(E-AGG,M-CTA)对显微介导鳜基因镜鲤进行扩增片段长度多态性(AFLP)检测,研究显微介导外源总DNA转化当代的分子生物学结果。结果表明:在AFLP的15对引物中,显微介导鳜基因镜鲤中有3对引物扩增出了供体鳜基因片段,从DNA水平上验证了在受体鱼的基因组中整合了供体基因片段。将6尾阳性显微介导鳜基因镜鲤与供体鳜相同的AFLP条带进行切下、回收、克隆、测序,发现供体鳜片段序列与阳性显微介导鳜基因镜鲤片段序列完全一致,找到了精确的遗传证据。本研究结果为构建转全鳜基因镜鲤AFLP检测体系,从基因角度研究供体大片段在受体鱼中的导入情况提供了理论依据。

关键词：显微介导鳜总DNA 镜鲤 AFLP 分子验证

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显微介导河蟹总DNA导入镜鲤的检测与分析

水产学杂志 2017年第3期30卷 19-23页

利用显微介导远缘杂交技术将河蟹总DNA直接导入镜鲤受精卵内,再利用AFLP分子标记技术检测显微介导河蟹基因镜鲤的外源DNA。在30对AFLP引物中,有3对引物扩增出供体基因片段,即在显微介导河蟹基因镜鲤中均有和河蟹基因相同而对照镜鲤没有... 详细信息

利用显微介导远缘杂交技术将河蟹总DNA直接导入镜鲤受精卵内,再利用AFLP分子标记技术检测显微介导河蟹基因镜鲤的外源DNA。在30对AFLP引物中,有3对引物扩增出供体基因片段,即在显微介导河蟹基因镜鲤中均有和河蟹基因相同而对照镜鲤没有的条带。对6尾阳性显微介导河蟹基因镜鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证。结果表明:阳性显微介导河蟹基因在镜鲤中均含有供体基因目的片段。本研究在分子和基因水平上验证了河蟹总DNA可通过显微介导方式整合到镜鲤基因组中,为显微介导外源总DNA转化技术的应用提供新的思路。

关键词：显微介导河蟹总DNA 镜鲤