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荧光原位杂交检测哺乳动物细胞特异染色体不分离的研究

荧光原位杂交检测哺乳动物细胞特异染色体不分离的研究

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作者：丁银润云南师范大学

学位级别：硕士

非整倍体(aneuploidy)指染色体分离异常所导致的染色体数目非整倍性改变所得到的细胞与个体。非整倍体的产生是由于有丝分裂中的姐妹染色单体或减数分裂中配对的染色体在移向两极时发生错误而造成的，即细胞分裂过程中染色体分离异常而... 详细信息

非整倍体(aneuploidy)指染色体分离异常所导致的染色体数目非整倍性改变所得到的细胞与个体。非整倍体的产生是由于有丝分裂中的姐妹染色单体或减数分裂中配对的染色体在移向两极时发生错误而造成的，即细胞分裂过程中染色体分离异常而导致非整倍体。环境中能够导致非整倍体发生的各种因素称非整倍体诱发剂(aneugen)。这些因素在体细胞诱发非整倍体可导致癌症的发生(许多类型的肺癌、胃癌和白血病都与非整倍体发生有关);在生殖细胞诱发非整倍体则使得自发流产、后代遗传病发生率提高(一种人类“先天愚型”就是非整倍体)。所以鉴定环境中的非整倍体诱发因素即建立并完善非整倍体诱发剂检测系统是保护人类生存环境的重要环节，明确非整倍体诱发剂的作用机制可以为保护人类遗传物质提供科学的实验依据。本研究在课题组已建立的哺乳动物体细胞/生殖细胞(分裂或非分裂状态)非整倍体诱发剂检测系统的基础上，以细胞分子生物学技术——荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)进行体细胞/生殖细胞非分裂状态特异染色体分离异常形成非整倍体的研究，实验以非整倍体诱发剂——秋水仙素(colchicine，COL)，以及哺乳动物体细胞非整倍体诱发剂、可疑的哺乳动物生殖细胞非整倍体诱发剂——昆明山海棠[Tripterygium hypoglaucum (Levl)Hutch，THH]水抽提物腹腔注射昆明种雄性小鼠，(1)根据小鼠体细胞周期，给药24小时后，取小鼠骨髓细胞滴片，以荧光物质— 云南师范大学硕士研究生学位论文dUTP标记的8号染色体着丝粒探针进行FISH;（2）根据小鼠精子发育周期，给药22天后，取小鼠附睾精子涂片，以荧光物质一dUTP标记的8号染色体着丝粒探针进行阿m;（3）体外培养人外周血淋巴细胞，24。时后，加入相应剂量的 THH和 COL，处理 48小时后，常规制片，用商业探针 18号染色体及X染色体着丝粒探针进行多色FISH;荧光染色，荧光显微镜下分析受试物处理动物和人外周血后骨髓间期白细胞、精于和人间期淋巴细胞中特异染色体分离的情况，从而探索哺乳动物体细胞、生殖细胞以及人淋巴细胞中特异染色体对各类非整倍体诱发剂的敏感性，达到进一步完善非整倍体诱发剂检测系统的目的。研究结果发现：（）在小鼠骨髓细胞中，阳性对照物 COL （．sing八g）极显著诱发骨髓间期白细胞8号染色体单体和三体的产生k的．001入THH在三个受试的剂量组（120ms／ks，240ms／ks，480ms／ks）中，所诱发 8号染色体单体频率均显著高于溶剂对照b州．001）;但在120mg八g剂量组，诱发8号染色体三体频率与对照无显著差异（P＞0．05），而在 240mg／kg，480mg＊g剂量组，三体频率显著高于对照…m．001人Q）在小鼠精子中，THH在中间剂量组O40mg／kg讨高剂量组O80m叭g）诱发精子双体频率均显著高于溶剂对照0刃刀of人低剂量组（120mg／k）的双体精子频率与溶剂对照无显著差异（P＞0刀5）。m在人类外周血淋巴细胞中，mH 在最低剂量组 ①．078mg加人 18号染色体非整倍体频率和 X染色体非整倍体频率与溶剂对照无显著差异k川．05人而在中间剂量组＊．156mg加）和最高剂量组门．312mg砌l），18号染色体非整倍体频率和X染色体非整倍体频率均显著高于溶剂对照k0．01人研究结果证实了：昆明山海棠根部水抽提物（THH）在哺乳动物体细胞／生殖细胞和人类外周血淋巴细胞中均显著诱发特异染色体异常分离，该结果进一步证实了THH在哺乳动物体细胞中的非整倍体诱发效应，另一方面为THH在哺乳动物生殖细胞中的非整倍体诱发效应提供了完善的资料，将THH非整倍体诱发效应与 4 云南师范大学硕士研究生学位论文特异染色体的异常分离直接衔接，更为精确地分析了THH的

关键词：昆明山海棠根部水抽提物小鼠骨髓细胞小鼠精子人外周血淋巴细胞非整倍体荧光原位杂交

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