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新型铕荧光探针的设计合成及其在时间分辨荧光分析中的应用

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新型铕荧光探针的设计合成及其在时间分辨荧光分析中的应用

作者：辛成龙大连理工大学

学位级别：硕士

基于稀土镧系荧光探针的时间分辨荧光分析法已成为在生化分析和临床诊断等方面常见的有力的研究工具。本工作设计、合成和表征了两种新型铕(Ⅲ)荧光配合物,并探讨了其荧光性质及其在时间分辨荧光测定中的应用。本研究设计合成了一种新型... 详细信息

基于稀土镧系荧光探针的时间分辨荧光分析法已成为在生化分析和临床诊断等方面常见的有力的研究工具。本工作设计、合成和表征了两种新型铕(Ⅲ)荧光配合物,并探讨了其荧光性质及其在时间分辨荧光测定中的应用。本研究设计合成了一种新型铕(Ⅲ)配合物pH荧光传感探针：4’-(4-羟基苯基)-2,2’,6’,2”-联三毗啶-6,6”-二甲胺四乙酸-铕(Ⅲ)配合物(简称HTTA-Eu3+)。同时采用时间分辨荧光模式对HTTA-Eu3+的荧光性质和其发光强度与溶液pH值的关系进行了测定。结果表明,HTTA-Eu3+荧光量子收率1.8%,具有长寿命荧光、水溶性好、高灵敏度等优点;在pH=5.0-7.5范围内,对pH变化表现出较灵敏的荧光强度响应,且在pH=5.6-7.0范围内荧光强度与溶液的pH值呈良好的线性关系。以上结果表明该Eu(Ⅲ)配合物可作为一种高灵敏的时间分辨荧光pH传感探针用于复杂样品pH值的时间分辨荧光测定,而且在时间分辨荧光显微分析领域具有很好的发展前景。本研究合成了另一种新型铕(Ⅲ)荧光配合物：4”-(4'-2,4二硝基苯磺酰氧基苯基)-2,2’,6’,2”-联三吡啶-6,6”-二甲胺四乙酸-铕(Ⅲ)配合物(简称NSTTA-Eu3+)。并利用质谱、核磁共振光谱、元素分析等方法对NSTTA及其中间体进行了结构表征。但是荧光性质测定结果表明该配合物的荧光强度太小,反应后的生成物的荧光强度很小,不是一种很好的荧光探针。

关键词：铕配合物联三吡啶 pH荧光传感探针时间分辨荧光分析

核酸杂交的二次酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

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国际放射医学核医学杂志 2007年第2期31卷 70-73页

作者：宋娜玲赵启仁李美佳褚丽萍庄湘莲颜廷东贺欣周伟玲张春明中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所、天津市分子核医学重点实验室天津300192

目的建立一种超灵敏的用于核酸杂交分析的方法。方法通过二次酶放大、PCR扩增、Tb螯合物和时间分辨测量技术,测定前列腺特异抗原（PSA）DNA。结果靶PSADNA测定的标准曲线线性范围大于两个数量级;灵敏度为10pmol/L（0.5fmol/孔）;当靶PSA... 详细信息

目的建立一种超灵敏的用于核酸杂交分析的方法。方法通过二次酶放大、PCR扩增、Tb螯合物和时间分辨测量技术,测定前列腺特异抗原（PSA）DNA。结果靶PSADNA测定的标准曲线线性范围大于两个数量级;灵敏度为10pmol/L（0.5fmol/孔）;当靶PSADNA为10、30和60pmol/L时,准确度和精密度分别为77%～95%和12.9%～15.3%。结论本法是一种超灵敏的、简捷和快速的全新分析方法,有很好的应用前景。

关键词：核酸杂交铽酶放大时间分辨荧光分析

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核酸杂交的镧系元素发光时间分辨荧光分析

核酸杂交的镧系元素发光时间分辨荧光分析

核酸杂交的二次酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

第四届中国核学会省市区“三核”论坛

作者：宋娜玲赵启仁李美佳褚丽萍庄湘莲颜延东贺欣周伟玲张春明中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所天津分子核医学重点实验室

目的 DNA 探针技术学已在基础研究中获得很大进展,而且在传染病、遗传病和肿瘤等疾病的诊断应用中有重要意义。目前,核酸杂交的分析测定系统的研究主要集中在提高分析灵敏度和非同位素两方面,为了提高灵敏度而建立一种超灵敏的非同位素... 详细信息

目的 DNA 探针技术学已在基础研究中获得很大进展,而且在传染病、遗传病和肿瘤等疾病的诊断应用中有重要意义。目前,核酸杂交的分析测定系统的研究主要集中在提高分析灵敏度和非同位素两方面,为了提高灵敏度而建立一种超灵敏的非同位素的核酸杂交测定方法楋缦翟胤9．馐奔浞直嬗夥治龇ā? 方法先用抗体包被微滴定孔,加入靶 PSA DNA 与该抗体反应。用生物素化探针与靶 PSA DNA 杂交,再通过生物素(B)与链霉亲和素(SA)的反应,将链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(HRP-SA)连接到杂化物上当加入含有 HO和生物素化酪胺(B-T)的 HRP 的底物溶液,二聚体形成反应,于是 B-T 就共价地结合到固相上,再加入碱性磷酸酶标记链霉亲和素(ALP-SA),经 B 与 SA 的反应,ALP 结合到固相上。至此,实现了杂交和建立了杂交的定量关系。洗涤后,加入 ALP 的底物5-氟水杨酸磷酸酯(5-FSAP),ALP 作用于5-FSAP, 产物为5-氟水杨酸(5-FSA),再加发展溶液,5-FSA 与发展溶液中的 Tb 和 EDTA 形成发射高产额、长荧光寿命的5-FSA：Tb：EDTA 三元复合物,用时间分辨荧光仪直接测量荧光强度,确定待测 DNA 的量。结果靶 PSA DNA 测定的标准曲线线性范围大,大于两个数量级;灵敏度为10pmot/L(0．5fmol/孔);当靶 DNA 为10、30和60pmol/L 时,准确度和精密度分别为77%～95%和12．9%～15．3% 结论本法是一种超灵敏的、简捷和快速的全新分析方法,有很好的应用前景。

关键词：核酸杂交分析酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

来源： cnki会议评论

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核酸杂交的二次酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

第四届中国核学会省市区“三核”论坛

作者：宋娜玲赵启仁褚丽萍颜廷东贺欣周伟玲张春明中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所天津分子核医学重点实验室

目的建立一种超灵敏的核酸杂交测定方法。方法通过二次酶放大、PCR 扩增、Tb 螯合物和时间分辨测量技术,测定靶 PSA DNA。结果靶 PSA DNA 测定的标准曲线线性大于两个数量级;灵敏度为10pmol/ L(0．5fmol/孔);当靶 PSA DNA 为10、30和60p... 详细信息

目的建立一种超灵敏的核酸杂交测定方法。方法通过二次酶放大、PCR 扩增、Tb 螯合物和时间分辨测量技术,测定靶 PSA DNA。结果靶 PSA DNA 测定的标准曲线线性大于两个数量级;灵敏度为10pmol/ L(0．5fmol/孔);当靶 PSA DNA 为10、30和60pmol/L时,准确度和精密度分别为77%～95%和12．9%～15． 3%。结论本法是一种超灵敏的、简捷和快速的全新分析方法,有很好的应用前景。

关键词：核酸杂交分析酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

来源： cnki会议评论

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酶放大时间分辨荧光分析

酶放大时间分辨荧光分析

中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议

作者：赵启仁宋娜玲褚丽萍张春明王德芝贺欣中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室

酶放大镧系元素发光（enzymemplified lanthanide luminescence,EALL）分析是把酶标记放大作用、BAS 系统亲和力放大作用和 TRFIA 优点结合起来,建立新的灵敏的、不用增强液的分析方法。此法的优点是:环境改变和淬灭体对荧光发射特征影... 详细信息

酶放大镧系元素发光（enzymemplified lanthanide luminescence,EALL）分析是把酶标记放大作用、BAS 系统亲和力放大作用和 TRFIA 优点结合起来,建立新的灵敏的、不用增强液的分析方法。此法的优点是:环境改变和淬灭体对荧光发射特征影响极小,外源镧系元素污染影响也较小。本课题组将 EALL 分析应用于测定碱性磷酸酶,核酸杂交的 EALL 分析和核酸杂交的二次 EALL 分析,建立了全新的超灵敏的酶放大镧系元素发光分析法。

关键词：碱性磷酸酶核酸杂交酶放大时间分辨荧光分析生物素化镧系元素链霉亲和素

来源： cnki会议评论

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时间分辨荧光免疫分析在环境中的应用进展

环境科学与技术 2019年第8期42卷 95-102页

作者：吕梦雨牛晓君彭志芳胡蹦荣天悦华南理工大学环境与能源学院工业聚集区污染控制与生态修复教育部重点实验室

时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)作为一种新型的超微量分析技术,不断应用于环境痕量分析领域,在检测环境中的有机污染物、生物毒素等方面发挥了重大作用。该文论述了近年来开发的TRFIA新系统,阐述了TRFIA在检测环境中的药物残留、生物... 详细信息

时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)作为一种新型的超微量分析技术,不断应用于环境痕量分析领域,在检测环境中的有机污染物、生物毒素等方面发挥了重大作用。该文论述了近年来开发的TRFIA新系统,阐述了TRFIA在检测环境中的药物残留、生物毒素及化工试剂等方面的研究进展,并在此基础上对其应用前景进行了分析,展望了其在检测新兴有机污染物方面的巨大潜力。

关键词：时间分辨荧光分析环境污染物痕量分析

时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展及在食品安全领域中的应用

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食品科学 2006年第12期27卷 886-889页

作者：金晶赖卫华涂祖新李鹏南昌大学食品科学教育部重点实验室江西南昌330047

时间分辨荧光免疫分析技术是一种建立在免疫吸附分离和时间分辨荧光技术基础上的超灵敏检测方法。这项技术发展迅速,已广泛地应用于诸如临床检测、食品安全快速检测等领域。本文旨在全面地介绍时间分辨免疫荧光分析技术的原理和优点,并... 详细信息

时间分辨荧光免疫分析技术是一种建立在免疫吸附分离和时间分辨荧光技术基础上的超灵敏检测方法。这项技术发展迅速,已广泛地应用于诸如临床检测、食品安全快速检测等领域。本文旨在全面地介绍时间分辨免疫荧光分析技术的原理和优点,并对这项技术的研究进展和在食品安全领域的应用作一综述。

关键词：时间分辨荧光分析研究进展食品安全

电化学发光法和酶联免疫法检测低水平HBsAg

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中国输血杂志 2011年第9期24卷 767-768页

作者：王利杰许东亚河南省人民医院检验科河南郑州450000 平顶山市红十字中心血站

目的比较电化学发光免疫分析(electro-chemiluminescence immunoassay,ECLIA)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测低值乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的结果,为选择最佳临床检测策略提供依据。方法先以时间分辨免疫荧光(time resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)试剂盒进行血清标本HBsAg定量,再分别用ECLIA进口试剂盒、ELISA国产试剂盒做定性检测,并对结果进行统计分析。结果在348例TRFIA法检测乙肝病毒表面抗原浓度介于(0.5～1.0)ng/ml的临床标本中,ECLIA和ELISA 2种方法检测HB-sAg皆为阳性的有310例;电化学发光检测阳性有340例,ELISA检测阳性有312例,二者阳性符合率90.8%。对32例二者不符合的标本用时间分辨免疫荧光分析复查,ECLIA(+)ELISA(-)的30例TRFIA复检仍为阳性;ECLIA(-)ELISA(+)的2例TRFIA复检亦为阳性。ECLIA与ELISA在对低水平HBsAg的检出差异有统计学意义(χ2=22.781,P<0.01)。结论 ECLIA比ELISA的特异性好和敏感度高。在临床诊治与检测低水平的乙肝病毒携带者建议用具有更高灵敏度和特异性的方法。

关键词：乙型肝炎病毒乙肝病毒表面抗原电化学发光免疫分析酶联免疫吸附试验时间分辨荧光分析

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肿瘤标志物免疫分析新方法与临床应用研究

肿瘤标志物免疫分析新方法与临床应用研究

作者：严枫扬州大学

学位级别：硕士

肿瘤标志物(Tumor markers,TM),在恶性肿瘤的辅助诊断、疗效监测、预后判断等方面具有非常重要的应用价值。因此,不断探索新的TM及其检测方法研究已经成为肿瘤防治的热点课题之一。流动注射分析(Flow iniection analysis,FIA)能在非平... 详细信息

肿瘤标志物(Tumor markers,TM),在恶性肿瘤的辅助诊断、疗效监测、预后判断等方面具有非常重要的应用价值。因此,不断探索新的TM及其检测方法研究已经成为肿瘤防治的热点课题之一。流动注射分析(Flow iniection analysis,FIA)能在非平衡状态下高效率地完成试样的在线处理与测定,因而分析速度快、重现性好、易于自动化,已被广泛地应用于临床诊断、药物分析、环境和食品质量监控与处理等方面。电化学与化学发光免疫传感器(Electrochemical and chemiluminescent immunosensors)和时间分辨荧光免疫检测技术(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)以其高灵敏度、高特异性、高准确度等优点而倍受关注。这些检测技术与分析方法的结合,为肿瘤标志物的高效检测奠定了基础。本文围绕肿瘤标志物的临床应用、流动注射-时间分辨荧光免疫分析新方法的建立和电化学与化学发光免疫传感器的研制等方面,开展了以下工作: 1.肿瘤标志物一胃泌素前体释放肽在肺癌诊断中的应用价值 ProGRP(Progastrin-releasing peptide)是脑肠激素的一种,是胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的前体。前人已建立检测ProGRP的酶免疫测定方法(Enzyme immunoassay,EIA)并用于小细胞肺癌(Small cell carcinoma,SCLC)的免疫珍断。本文利用该方法,对78例SCLC患者、15例肺良性疾病(肺结核、肺气肿、气胸)患者,15例健康人血清中ProGRP含量进行测定并对比分析,探讨了ProGRP在肺癌诊断中的应用价值。结果显示,SCLC患者血清ProGRP水平显著高于对照组(P<0.01);以大于46pg/ml为临界值,ProGRP对SCLC的阳性率高达64.6%;患者血清ProGRP与神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)水平呈高度正相关,r=0.9,P<0.01。肺癌患者血清中ProGRP水平检测可望成为小细胞肺癌的辅助诊断指标。

关键词：抗原抗体肿瘤标志物免疫分析流动注射分析时间分辨荧光分析技术传感器生物传感器免疫传感器非竞争免疫分析夹心免疫反应 CA19-9 CEA 肺癌小细胞肺癌 ProGRP