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日本医蛭循环水养殖技术

科学养鱼 2024年第3期 49-50页

作者：胡彬李国敬王裕玉鱼台县渔业发展服务中心山东济宁272300 日照职业技术学院海洋技术系山东日照276826

近年来受农耕制度的改变和化肥、农药的大量施用影响,导致日本医蛭野生资源越来越少,而市场需求大,因此日本医蛭的养殖具有良好的市场前景。为此,笔者于2022年5-10月在济宁市鱼台昊宇水蛭养殖有限公司跟踪了解日本医蛭循环水养殖情况,... 详细信息

近年来受农耕制度的改变和化肥、农药的大量施用影响,导致日本医蛭野生资源越来越少,而市场需求大,因此日本医蛭的养殖具有良好的市场前景。为此,笔者于2022年5-10月在济宁市鱼台昊宇水蛭养殖有限公司跟踪了解日本医蛭循环水养殖情况,养殖效益显著。现将日本医蛭循环水养殖技术总结如下。一、材料与方法1.养殖条件养殖厂房面积600米2。养殖方式为PVC养殖箱(200厘米×90厘米×50厘米),水深2~5厘米,根据养殖密度适当调节水深。

关键词：循环水养殖养殖条件日本医蛭养殖密度厂房面积养殖方式养殖效益市场需求

日本医蛭摄食前后不同组织中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式

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西南农业学报 2023年第7期36卷 1400-1405页

作者：石萍游华建邓小书陈仕江鲁增辉重庆市中药研究院重庆400065 重庆中医药学院重庆402760 中国中医科学院中药资源中心重庆分中心重庆400065

【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织(唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢)中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式,为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基... 详细信息

【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织(唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢)中水蛭素基因(hirudin)的时空表达模式,为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基因序列信息,利用实时荧光定量PCR方法,对水蛭关键活性成分的编码基因hirudin在不同摄食阶段、不同组织中的表达量进行检测分析,研究该基因的时空表达模式。【结果】水蛭素基因(hirudin)在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精/卵巢组织中均有表达,且在唾液腺中的表达量显著高于其他组织;Hirudin基因在不同摄食阶段的唾液腺组织中表达结果显示,摄食后第2天表达量显著升高,之后随着摄食时间的推延而呈下降趋势;Hirudin基因在嗉囊、肠中的表达量呈先升高后下降趋势,分别于摄食后第1、第2天达到最高,之后会随着停食时间延长呈下降趋势,尤其是在摄食后第7、第8天的表达量呈显著性降低;Hirudin基因在皮肤组织中也有表达,并随着停食时间的延长呈先升后降趋势,最高峰出现在摄食后第2天;在精/卵巢组织中,摄食期间hirudin基因的表达量最高,与其他摄食阶段的表达呈显著性差异。【结论】水蛭素基因(hirudin)在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤和精/卵巢组织中均有不同程度的表达,在唾液腺中的表达量显著高于其他组织。摄食行为及食物刺激可能影响水蛭素基因(hirudin)的表达,在不同摄食阶段的表达量存在显著差异。研究结果可为水蛭药材的科学采收加工、提取部位的科学选取、合理入药提供理论依据和技术支撑,对未来水蛭药材资源的可持续利用具有重要的参考价值。

关键词：日本医蛭水蛭素基因(hirudin) 摄食时空表达模式

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日本医蛭进食前后唾液腺的形态学变化

中国细胞生物学学报 2022年第7期44卷 1258-1266页

作者：鲍亮王泽冲蔡美香邢月婷罗媛媛中国计量大学生命科学学院杭州310018 浙江大学医学院杭州310058

为研究日本医蛭(Hirudo nipponica)进食前后唾液腺的形态和超微结构特征,该文通过光学显微镜和电子显微镜对日本医蛭唾液腺进行观察。基于光学显微镜成像,观察到日本医蛭咽部具有三角形肌肉颚,唾液腺呈葡萄状依附在颚上,腺体呈乳白色且... 详细信息

为研究日本医蛭(Hirudo nipponica)进食前后唾液腺的形态和超微结构特征,该文通过光学显微镜和电子显微镜对日本医蛭唾液腺进行观察。基于光学显微镜成像,观察到日本医蛭咽部具有三角形肌肉颚,唾液腺呈葡萄状依附在颚上,腺体呈乳白色且对称分布在颚周围。HE染色结果表明,唾液腺细胞是由卵球形的体细胞和细长的导管组成的,且细胞核位于细胞底部或边缘。未进食的日本医蛭唾液腺细胞染色浅,细胞质饱满;进食后的日本医蛭唾液腺细胞染色深,细胞质结构疏松。基于透射电子显微镜成像,观察到唾液腺细胞中存在球形分泌颗粒,且分泌颗粒内部存在高电子密度的致密成分。未进食的日本医蛭唾液腺细胞结构紧致,分泌颗粒相互挤压,且大量分泌颗粒内含有致密成分;进食后的日本医蛭唾液腺细胞结构疏松,分泌颗粒之间存在空隙,且分泌颗粒内致密成分消失。基于扫描电子显微镜成像,观察到唾液腺细胞呈葡萄状排列。未进食的日本医蛭唾液腺细胞表面光滑,细胞圆润;进食后的日本医蛭唾液腺细胞表面存在大量颗粒物质,细胞凹陷。以上结果表明,日本医蛭进食后,唾液腺细胞分泌出的多种分泌蛋白是分泌颗粒中的致密成分,而大部分分泌颗粒还存在于唾液腺细胞内。

关键词：日本医蛭唾液腺细胞超微结构分泌颗粒致密成分

日本医蛭血餐后消化道生理特性和消化周期的初步研究

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中药材 2022年第4期45卷 789-793页

作者：缪一休史红专郭巧生王嘉郭丽媛常淮阳南京农业大学中药材研究所江苏南京210095

目的:研究日本医蛭吸食血液后消化道生理特性和食物消化周期,探讨其长期消化食物机制。方法:测定日本医蛭进食后0 h、12 h、24 h、10 d、30 d、90 d和150 d体重、消化道内容物中无机离子、蛋白质和葡萄糖浓度以及消化酶比活力变化。结果... 详细信息

目的:研究日本医蛭吸食血液后消化道生理特性和食物消化周期,探讨其长期消化食物机制。方法:测定日本医蛭进食后0 h、12 h、24 h、10 d、30 d、90 d和150 d体重、消化道内容物中无机离子、蛋白质和葡萄糖浓度以及消化酶比活力变化。结果:日本医蛭进食后体重先增加后降低;消化道内容物红细胞进食24 h后出现破裂,10 d后完全消失;无机离子浓度进食后0 h时最高,24 h内降低到稳定水平,蛋白质和葡萄糖浓度缓慢增高,在90 d达到稳定;消化道蛋白酶和淀粉酶比活力先增高后降低,30~90 d达到最高,脂肪酶比活力无明显变化趋势。结论:日本医蛭吸食血液后主要通过降低Na^(+)、Cl^(-)等无机离子浓度来降低渗透压引起溶血,释放营养物质,但由于消化酶活性低,消化周期可达90 d。

关键词：日本医蛭渗透压溶血反应消化酶

幼虫、青年和成年日本医蛭不同生长阶段差异表达基因比较分析

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南方农业学报 2022年第10期53卷 2714-2724页

作者：闫秀营任可马晓聪单会荃郑雅琳刘庆友周维官郑景辉广西大学动物科学技术学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西南宁530004 广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011 泰国天然水蛭素股份有限公司泰国曼谷10700

【目的】筛选出调控日本医蛭生长发育的相关基因,揭示其生长发育、繁殖和抗凝分子机制,为后期开展日本医蛭养殖、生长发育及相关功能基因研究提供科学依据。【方法】以幼虫期(孵化10 d以内,HNL)、青年虫期(孵化后2个月左右,HNY)和成年虫... 详细信息

【目的】筛选出调控日本医蛭生长发育的相关基因,揭示其生长发育、繁殖和抗凝分子机制,为后期开展日本医蛭养殖、生长发育及相关功能基因研究提供科学依据。【方法】以幼虫期(孵化10 d以内,HNL)、青年虫期(孵化后2个月左右,HNY)和成年虫期(孵化后2年左右,HNA)的日本医蛭为研究对象,利用Illumina HiSeq 4000平台对构建的cDNA文库进行转录组测序,按错误发现率(FDR)1的原则筛选差异表达基因(DEGs),并进行GO功能注释分析和KEGG信号通路富集分析。【结果】使用3个时期的样本构建24个cDNA文库,共产生541124257条原始序列(Raw reads),经Fastp质量控制及RNA-Seq组装,共获得20430个mRNAs转录本,并注释出88个新的mRNAs转录本。通过对日本医蛭不同生长阶段进行两两对比,共获得1348个差异表达基因,其中,在幼虫期—青年虫期(HNL vs HNY)中获得238个差异表达基因,在幼虫期—成虫期(HNL vs HNA)中获得976个差异表达基因,在青年虫期—成虫期(HNY vs HNA)中获得763个差异表达基因。幼虫期—成虫期的差异表达基因主要富集蛋白水解、肌球蛋白复合体、细胞骨架、几丁质代谢过程及对伤害的反应等GO功能条目上,以及苯丙氨酸/酪氨酸/色氨酸生物合成、丙烯酰胺转移酶等KEGG信号通路上。说明日本医蛭幼虫在生长过程中大量摄食并通过消化、代谢和合成物质为自身发育提供能量,而成年日本医蛭发育成熟后与其生长发育相关的代谢过程下调,且已适应环境,对于环境刺激的敏感度也有所降低。【结论】在幼虫期—成虫期(HNL vs HNA)获得的976个差异表达基因中,上调差异表达基因主要与肌肉发育相关,而与性腺发育或产卵调节及神经发育相关的差异表达基因具有明显周期特异性,其表达变化均与日本医蛭的生长发育有关。水蛭素和抗凝相关基因在青年期高表达,因此开展水蛭抗凝血能力研究时宜选用青年日本医蛭。

关键词：日本医蛭生长阶段差异表达基因转录组测序

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基于COI基因序列的日本医蛭疑似种鉴定

西南大学学报（自然科学版） 2022年第10期44卷 74-80页

作者：余米苏胜齐周梦曹敏封孝兰重庆市药物种植研究所重庆南川408435 西南大学水产学院重庆400715 特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室重庆南川408435

采用线粒体COI(细胞色素氧化酶Ⅰ亚基,tochrome oxidasesubunit Ⅰ)基因序列鉴别日本医蛭及其常见疑似种,并分析其遗传多样性和亲缘关系.以日本医蛭及其疑似种为材料,提取线粒体DNA,扩增其COI基因后进行测序,并计算遗传距离和聚类分析.... 详细信息

采用线粒体COI(细胞色素氧化酶Ⅰ亚基,tochrome oxidasesubunit Ⅰ)基因序列鉴别日本医蛭及其常见疑似种,并分析其遗传多样性和亲缘关系.以日本医蛭及其疑似种为材料,提取线粒体DNA,扩增其COI基因后进行测序,并计算遗传距离和聚类分析.结果显示,日本医蛭COI序列长度为680 bp,碱基A,T,C,G质量分数分别为35.1%,28.7%,16.2%和20.0%,碱基AT质量分数为63.8%;疑似种YS1~YS10的碱基A,T,C,G平均质量分数分别为39.8%,29.4%,15.2%和14.9%,碱基AT质量分数为69.2%. 11种蛭类COI序列中有569个一致位点,84个变异位点,其中,40个位点发生了碱基转换,44个位点发生了碱基颠换,转换与颠换的比值为0.90.日本医蛭与疑似种的遗传距离在0.159~0.166之间.基于COI序列的DNA条形码技术可以很好地鉴定正品日本医蛭与其疑似种,本试验鉴定的疑似种均不是日本医蛭.

关键词：日本医蛭细胞色素氧化酶Ⅰ亚基物种鉴定

宽体金线蛭和日本医蛭对急性血瘀大鼠血液流变学及凝血系统的影响

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时珍国医国药 2022年第10期33卷 2384-2386页

作者：王红王常瞵刘国飞董萍萍李华健王少平代龙山东中医药大学药学院山东济南250300 滨州医学院药学院山东烟台264003

目的研究水蛭不同品种急性血瘀模型大鼠血液流变学及凝血指标的影响。方法SD大鼠随机分为9组,空白对照组,模型组,阿司匹林组,宽体金线蛭组(低、中、高剂量),日本医蛭组(低、中、高剂量)。除空白组外,其余各组大鼠以皮下注射盐酸肾上腺... 详细信息

目的研究水蛭不同品种急性血瘀模型大鼠血液流变学及凝血指标的影响。方法SD大鼠随机分为9组,空白对照组,模型组,阿司匹林组,宽体金线蛭组(低、中、高剂量),日本医蛭组(低、中、高剂量)。除空白组外,其余各组大鼠以皮下注射盐酸肾上腺素加冰水浴复制急性血瘀模型,造模时间15 d。从造模的第8天起,阿司匹林组大鼠灌胃阿司匹林0.2 g/kg,水蛭不同品种各剂量组大鼠灌胃相应药物(0.35、1.4、3.5 g/kg),空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续8天。测定各组大鼠的全血黏度(低、中、高切变率)、血浆黏度、红细胞变形指数、红细胞聚集指数、红细胞压积等血液流变学指标以及凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)等凝血指标。结果与模型组相比,阿司匹林组,宽体金线蛭和日本医蛭高剂量组均能显著降低高、中、低切变率下全血粘度和血浆粘度,日本医蛭中剂量组能够显著降低全血高切粘度,宽体金线蛭中剂量组能够显著降低全血中、低切粘度;阿司匹林组,宽体金线蛭和日本医蛭高剂量组均能显著升高变形指数、降低聚集指数和压积,日本医蛭中剂量组能够显著升高变形指数,宽体金线蛭中剂量组能够显著降低聚集指数;阿司匹林组,宽体金线蛭高剂量组,日本医蛭中、高剂量组均能显著延长TT;阿司匹林组,日本医蛭高剂量组能够显著延长APTT(P蛭和日本医蛭各剂量组对PT均没有很好的延长效果。结论宽体金线蛭和日本医蛭均能够有效改善急性血瘀模型大鼠的血液流变学指标,一定程度上延长凝血时间。

关键词：宽体金线蛭日本医蛭急性血瘀血液流变学凝血系统

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日本医蛭唾液腺对饥饿胁迫响应的转录组比较

水产学报 2020年第5期44卷 754-766页

作者：邢月婷管峰李诗语张世雄罗媛媛中国计量大学生命科学学院浙江大学医学院

为了探究饥饿胁迫对日本医蛭唾液腺基因表达水平的影响,本实验通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台分别对饥饿30 d处理组(D30)和饥饿0 d (D0)对照组的日本医蛭的唾液腺组织进行双端测序,对获得的原始数据进行质量控制及从头组装,获得... 详细信息

为了探究饥饿胁迫对日本医蛭唾液腺基因表达水平的影响,本实验通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台分别对饥饿30 d处理组(D30)和饥饿0 d (D0)对照组的日本医蛭的唾液腺组织进行双端测序,对获得的原始数据进行质量控制及从头组装,获得145 981个unigenes,平均长度为675 bp,N50为1 127 bp。针对CDD、KOG、COG、NR、NT、PFAM、Swissprot、TrEMBL、GO和KEGG等数据库的序列比对分析,145 981个unigenes均能得到注释。通过引入TPM(transcripts per million)来估算基因表达水平,并通过DEGseq进行基因表达差异分析。以饥饿0 d为对照组,显著差异基因筛选条件设置为Q value2,获得2 650个差异基因,其中667个基因显著上调,1 983个基因显著下调。选取日本医蛭唾液腺4个重要功能基因进行荧光定量PCR(qRT-PCR)验证,结果证明转录组测序分析可靠。将所有差异表达基因进行GO功能富集分析,显著富集到175条途径,其中胞质核糖体途径富集程度最为显著,核糖体途径次之,且参与这些途径的差异基因基本均下调。KEGG通路富集分析进一步证明,差异基因在核糖体通路中富集程度最为显著。此外,差异基因中4个基因被预测参与抗凝、抗血栓、抗菌、抗炎和抗肿瘤过程,这可能在各种疾病的治疗中发挥重要作用。参与核糖体通路的基因表达量显著降低,表明日本医蛭唾液腺通过降低蛋白质代谢以应对饥饿环境。该实验结果为深入研究日本医蛭唾液腺饥饿胁迫适应的分泌调控机制以及药用价值基因的发掘提供了重要的参考材料,并为其他医学蛭类研究提供参考依据。

关键词：日本医蛭唾液腺饥饿胁迫转录组测序从头组装差异表达分析

基于三代高通量测序技术的不同养殖环境下日本医蛭微生物多样性研究

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中国现代中药 2022年第1期24卷 53-58页

作者：柴晓昕甘奇超赵瑞亭史景彦郭平牯袁渊马莉首都医科大学中医药学院北京100069 重庆多普泰制药股份有限公司重庆400800

目的:研究不同水源养殖的日本医蛭Hirudonipponica Whitman肌肉、肠道组织样本的细菌群落结构,分析除氯自来水养殖的可行性及日本医蛭相关的重要有益微生物。方法:分别在地下水和除氯自来水的循环养殖系统中进行日本医蛭养殖,采用PacBi... 详细信息

目的:研究不同水源养殖的日本医蛭Hirudonipponica Whitman肌肉、肠道组织样本的细菌群落结构,分析除氯自来水养殖的可行性及日本医蛭相关的重要有益微生物。方法:分别在地下水和除氯自来水的循环养殖系统中进行日本医蛭养殖,采用PacBio三代高通量测序技术对不同水源养殖水蛭的肌肉和肠道组织样品进行菌种初步分类鉴定及微生物群落组成分析。结果:与地下水养殖的水蛭相比,除氯自来水养殖的水蛭样本表现出更简单的微生物群落结构,且黏液菌属(Mucinivorans)、梭杆菌属(Fusobacterium)、拟杆菌属(Bacteroides)等有潜在致病风险的菌属相对丰度明显低于地下水养殖组。结论:采用除氯自来水开展水蛭养殖工作是可行的。与日本医蛭相关的共生菌(Aeromonas和Rikenella)及有益微生物在水蛭的生长发育过程中起着重要的作用,提示可以利用环境或饵料中的有益微生物来提高日本医蛭的产量。

关键词：日本医蛭三代高通量测序技术菌群结构自来水养殖共生菌有益微生物