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荞麦无菌苗培养条件优化及离体再生体系研究

荞麦无菌苗培养条件优化及离体再生体系研究

作者：陈佳西北农林科技大学

学位级别：硕士

荞麦是我国高寒山区人民主要的粮食作物，它营养丰富，还具有降血糖﹑降血脂以及降血压的保健功效，是不可多得的既可食用又可保健用的粮食作物，因此荞麦产业的发展在我国具有十分广泛的前景和潜力。甜荞属于异花授粉作物，授粉困... 详细信息

荞麦是我国高寒山区人民主要的粮食作物，它营养丰富，还具有降血糖﹑降血脂以及降血压的保健功效，是不可多得的既可食用又可保健用的粮食作物，因此荞麦产业的发展在我国具有十分广泛的前景和潜力。甜荞属于异花授粉作物，授粉困难导致结实和产量较低，因此，利用一些技术手段来改良其品质就成为必不可少的条件。一方面，可以尝试用种间杂交的方法结合不同种荞麦的有利性状，希望能够发挥其杂种优势，得到新品种;另一方面，通过组织培养和转基因技术等现代生物技术改良荞麦品质和产量也是一个重要的手段。本论文就荞麦再生体系的建立进行剖析，揭示打破荞麦种子休眠的方法和植物激素对荞麦组织培养的影响，探索荞麦再生体系建立的技术路线，为荞麦的组织培养及植株再生提供更为全面、深入的理论依据，也为转基因荞麦的研究提供理论基础。试验得出如下主要结论：（1）采用5种不同的破除种子休眠的方法和设置3种不同的培养条件，对组织培养中荞麦无菌苗的培养进行优化，研究筛选出了荞麦无菌苗培养的最佳方法，为荞麦再生体系的建立和转基因研究奠定基础。试验结果表明，经过人工去皮的种子发芽率78%，长势等明显好于其他四种处理的种子;光培养条件下的无菌苗成苗率高于暗培养下无菌苗，且健壮程度也远远大于暗培养的无菌苗;1/2MS培养基里培养的无菌苗成苗率大于MS培养基，且在发芽的个体中，93.8%的个体成苗。即人工去皮种子培养于1/2MS培养基，25℃恒温光照培养可以得到大量健壮的无菌苗供试验后续使用。（2）以无菌苗的子叶和胚轴为外植体，研究荞麦愈伤诱导的培养基设计，研究结果表明，子叶和胚轴在附加2mg/L2,4-D、1mg/L6-BA的MS培养基中愈伤组织生长状态最好，最适合后期的分化再生，且诱导率都在90%以上，其中胚轴诱导率全为100%。（3）以诱导得到的子叶和胚轴愈伤组织来研究荞麦的分化再生，进行最佳培养基筛选，结果表明，子叶来源的愈伤在2mg/L6-BA、1.5mg/L KT培养基中分化效率为64.0±6.9且产生不定芽的数量最多长势最好，胚轴来源的愈伤在2mg/L6-BA、0.5mg/LKT培养基中的分化效率为47.5±4.8且不定芽数量最多长势最好;不定芽接种于0.6mg/LNAA的1/2MS培养基中生根率可达100%，经炼苗后移栽存活率可达70%以上。

关键词：荞麦无菌苗组织培养再生

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新疆紫草种子无菌苗的培养技术优化

新疆农业大学学报 2009年第3期32卷 26-28页

作者：代宁波王娟李翠芳王芳新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052

采用不同消毒方法对新疆紫草种子进行消毒,并将种子接种在不同激素、不同培养基中进行培养。结果表明,用15%的H2O2消毒新疆紫草种子15 min可提高种子的发芽率,发芽率最高达92.5%,较升汞消毒的种子发芽率高52.7%。培养基中加碳粉可以促... 详细信息

采用不同消毒方法对新疆紫草种子进行消毒,并将种子接种在不同激素、不同培养基中进行培养。结果表明,用15%的H2O2消毒新疆紫草种子15 min可提高种子的发芽率,发芽率最高达92.5%,较升汞消毒的种子发芽率高52.7%。培养基中加碳粉可以促进种子发芽率和无菌苗的质量。消毒方法对新疆紫草种子发芽率的影响最大,不同的培养基和激素对新疆紫草种子发芽率的影响甚微。

关键词：新疆紫草种子发芽无菌苗

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枸杞无菌苗外植体的培养及其再生植株

新疆农业科学 1993年第2期30卷 63-64页

作者：王子霞戚家华郝峥嵘海热古力.阿布力孜杨松杰新疆农科院核生所乌鲁木齐830000

以MS为基本培养基,分别添加IAA0.05—1.0mg/l、BA0.2—8.0mg/l、KT0.2—2.0mg/l和PAA0.1—10.0mg/l的激素,对枸杞无菌苗子叶和下胚轴进行离体培养,所产生的愈伤组织可在原培养基上直接分化出芽,其中子叶愈伤组织的平均诱导频率、分化频... 详细信息

以MS为基本培养基,分别添加IAA0.05—1.0mg/l、BA0.2—8.0mg/l、KT0.2—2.0mg/l和PAA0.1—10.0mg/l的激素,对枸杞无菌苗子叶和下胚轴进行离体培养,所产生的愈伤组织可在原培养基上直接分化出芽,其中子叶愈伤组织的平均诱导频率、分化频率和每块愈伤组织直接产生的芽数均高于下胚轴。

关键词：枸杞无菌苗外植体培养基植株再生组织培养

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大豆无菌苗的获得

吉林农业科学 2001年第2期26卷 7-9页

作者：邢少辰林秀峰庄炳昌邯郸农业高等专科学校河北邯郸057150 吉林省农科院农业生物技术重点开放实验室吉林公主岭136100

采用升汞和次氯酸纳两种消毒剂对野生大豆和栽培大豆进行处理 ,获得大豆的无菌苗。结果表明 :①野生大豆对消毒剂的抵抗能力明显高于栽培大豆 ;②用水浸泡的栽培大豆再用升汞和次氯酸纳处理时 ,都不能发芽或极少发芽 ,说明消毒剂对浸泡... 详细信息

采用升汞和次氯酸纳两种消毒剂对野生大豆和栽培大豆进行处理 ,获得大豆的无菌苗。结果表明 :①野生大豆对消毒剂的抵抗能力明显高于栽培大豆 ;②用水浸泡的栽培大豆再用升汞和次氯酸纳处理时 ,都不能发芽或极少发芽 ,说明消毒剂对浸泡的栽培大豆伤害十分严重 ;③种子放置在固体培养基的表面生长较快。

关键词：大豆无菌苗培养基

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毛竹无菌苗快繁及褐化控制技术研究

毛竹无菌苗快繁及褐化控制技术研究

作者：何安国浙江农林大学

学位级别：硕士

毛竹(Phyllostachys edulis)是我国最重要的生态经济竹种,但传统繁殖方式难以实现毛竹优良无性系的快速繁育。因此,建立毛竹组培体系有利于发挥其各方面效益。目前,已有毛竹组织培养研究报道,但依然存在一些问题,如:无菌苗获取效率低、... 详细信息

毛竹(Phyllostachys edulis)是我国最重要的生态经济竹种,但传统繁殖方式难以实现毛竹优良无性系的快速繁育。因此,建立毛竹组培体系有利于发挥其各方面效益。目前,已有毛竹组织培养研究报道,但依然存在一些问题,如:无菌苗获取效率低、激素诱导增殖效果不明确、组培褐化严重、生根率不稳定等。本研究针对以上问题,从消毒方法、增殖技术手段、诱导生根及控制褐化4个方面展开研究,以期进一步优化毛竹组培体系,实现各方面效益的综合开发利用。结果如下:1.未去皮盾片作为外植体,利用有效氯浓度5.2%的次氯酸钠溶液在抽真空条件下消毒8.6min,污染率为15.5%,与去皮盾片的污染率13.5%无显著差异,较半粒种子污染率48.5%显著降低;萌发率64.5%略高于去皮盾片的萌发率59.0%,较半粒种子萌发率40.5%显著提高。2.BA、KT、TDZ均可显著提高侧芽诱导率,0.5mg/LTDZ诱导效果最佳,诱导率达100%,侧芽诱导数2.57;KT次之,BA较差;但附加0.5 mg/L BA可显著提高TDZ的侧芽诱导效果;进一步正交优化结果显示,MS+0.15mg/LTDZ+0.5 mg/LBA+0.1 mg/LNAA中增殖系数最高,尤以液体增殖培养基连续培养最佳,增殖系数达7.59。3.随继代次数增加,生根率呈下降趋势,至增殖继代3次后,生根率仅为3.33%;NAA和IBA均可提高生根率,尤以0.5 mg/L NAA效果最佳,可将增殖继代3次后的芽丛生根率提高至36.7%;在此基础上,附加2000mg/L AC,可进一步提高生根率至 66%。4.抗氧化型防褐剂抗坏血酸(VC)和柠檬酸(CA)对组培褐化无显著改善作用,但吸附型防褐剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和活性炭(AC)具有较好的防褐效果,尤以1000 mg/L AC最佳。继代第1、2周期,1000 mg/LAC处理组的总酚含量分别为155μg/g、129 μg/g,没食子酸含量分别为2.14μg/g、6.24μg/g,原儿茶酸含量分别为28.23μg/g、7.97μg/g,绿原酸含量分别为 103.69μg/g 和 36.12μg/g,PPO 活性显著低于CK,CAT和POD活性均显著高于CK。继代第3周期,添加1000 mg/L AC褐化指数显著低于其它处理,控制在第1周期CK的水平。到继代第4周期后,1000 mg/LAC较CK依然有较好的缓解褐化作用。结果表明,以未去皮盾片为外植体,次氯酸钠为消毒剂,可有效提高无菌芽获取效率;明确了 BA、TDZ和NAA组合可显著提高增殖效果;生根受继代次数影响,NAA诱导生根效果最佳,附加AC可进一步促进生根。附加1000 m/L AC可延缓褐化发生并减缓褐化程度。

关键词：毛竹无菌苗快繁褐化控制

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番茄组织培养中无菌苗培养条件的优化

中国农学通报 2006年第4期22卷 335-337页

作者：吴志刚宋明王志敏牛义西南大学园艺园林学院重庆市蔬菜学重点实验室重庆400716

对番茄组织培养中种子的消毒方法和无菌苗培养条件进行了优化。经过对五种消毒方法的消毒效果比较,以10%的NaClO溶液+土温1滴30min和10%NaClO溶液20min+0.1%HgCl23min消毒效果最佳,对种子发芽抑制作用较小。同时,通过对无菌苗生理指标... 详细信息

对番茄组织培养中种子的消毒方法和无菌苗培养条件进行了优化。经过对五种消毒方法的消毒效果比较,以10%的NaClO溶液+土温1滴30min和10%NaClO溶液20min+0.1%HgCl23min消毒效果最佳,对种子发芽抑制作用较小。同时,通过对无菌苗生理指标的测定,添加1%蔗糖的1/2MS培养基有利于壮苗的形成。

关键词：番茄组织培养无菌苗

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以不结球白菜无菌苗茎尖诱导筛选耐热变异体

上海农业学报 2002年第2期18卷 6-9页

作者：王亦菲陆瑞菊周润梅孙月芳黄剑华上海市农业科学院生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

以优质不结球白菜 [BrassicacampestresL .ssp .chinensis(L .)Makino]“小叶青”为供试材料 ,研究了平阳霉素处理浓度、时间、外源添加物对供试茎尖存活率以及激素配比对茎尖不定芽诱导率的影响。结果表明 :平阳霉素 80mg/L的 4h处理... 详细信息

以优质不结球白菜 [BrassicacampestresL .ssp .chinensis(L .)Makino]“小叶青”为供试材料 ,研究了平阳霉素处理浓度、时间、外源添加物对供试茎尖存活率以及激素配比对茎尖不定芽诱导率的影响。结果表明 :平阳霉素 80mg/L的 4h处理可作为适宜诱变处理 ,添加椰汁有利于茎尖存活 ;AgNO32 .0mg/L、BA 1.0mg/L、KT 2 .0mg/L的激素组合有利于诱导正常型不定芽和获得较高的诱导率。通过研究 ,建立了不结球白菜耐热变异体诱导及筛选技术程序 ,获得了耐热性提高的变异体材料。

关键词：不结球白菜无菌苗茎尖诱导筛选耐热变异体

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烟草无菌苗培养前的种子消毒技术研究

中国烟草科学 2007年第2期28卷 45-46,51页

作者：胡重怡郑少清陈兴江陈丽莉程艳贵州烟草科学研究所贵阳550003

不同消毒处理对烟草种子消毒效果的影响研究表明,在种子消毒之前,经无菌水浸泡24 h(预处理)的比不浸泡的消毒效果好;在10%H2O2、2%有效氯次氯酸钠溶液、1‰升汞3种杀菌剂中,10%H2O2消毒效果最好,种子带菌率为0%,用75%乙醇预处理可降低... 详细信息

不同消毒处理对烟草种子消毒效果的影响研究表明,在种子消毒之前,经无菌水浸泡24 h(预处理)的比不浸泡的消毒效果好;在10%H2O2、2%有效氯次氯酸钠溶液、1‰升汞3种杀菌剂中,10%H2O2消毒效果最好,种子带菌率为0%,用75%乙醇预处理可降低种子带菌率;3种消毒剂中以10%H2O2处理烟草种子发芽率最高。

关键词：烟草无菌苗种子消毒

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三峡消落带落羽杉茎段外植体扩繁技术研究

西南大学学报（自然科学版） 2022年第11期44卷 70-79页

作者：陈雪梅陈春桦杨治华袁中勋陈张婷李昌晓西南大学生命科学学院重庆400715 重庆市北碚区王朴中学校重庆400717

为了提供大量优质落羽杉幼苗用于三峡库区消落带人工植被重建,进一步推进落羽杉在我国尤其是消落带地区的推广应用,以落羽杉茎段为外植体,通过组织培养扩繁获得无菌苗.结果表明:未木质化茎段中部为最佳外植体,存活率最高,为41.67%;对未... 详细信息

为了提供大量优质落羽杉幼苗用于三峡库区消落带人工植被重建,进一步推进落羽杉在我国尤其是消落带地区的推广应用,以落羽杉茎段为外植体,通过组织培养扩繁获得无菌苗.结果表明:未木质化茎段中部为最佳外植体,存活率最高,为41.67%;对未木质化茎段中部采用联合消毒,先用75%乙醇漂洗30 s,再用0.1%的HgCl_(2)消毒3 min,培养基中附加浓度为0.2%的抗菌剂PPM,无菌外植体获得率为75.00%,污染率为16.67%;茎段腋芽诱导最合适的培养基为MS+0.5 mg/L KT+0.4 mg/L NAA,诱导率为66.67%,丛芽诱导最合适的培养基为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L IBA,诱导率为83.33%.

关键词：落羽杉三峡库区扩繁无菌苗