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无毛基因敲除小鼠PPARγ-PGC1α-UCP1信号通路蛋白的表达及棕色脂肪组织能量代谢状态的变化

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郑州大学学报（医学版） 2023年第1期58卷 19-22页

作者：何龙郭好雨张超凡杨紫薇和娜娜朱奎成郑州大学第一附属医院麻醉与围术期医学部郑州450052 郑州大学医学科学院实验动物平台郑州450052

目的:探讨无毛(Hr)基因缺陷对小鼠能量代谢的影响及机制。方法:雄性Hr基因敲除(Hr^(-/-))小鼠和同窝野生型(Hr^(+/+))小鼠各10只,记录小鼠从出生后10周内的体重;于第10周,使用代谢监测系统对小鼠的耗氧量、产热量、活动量以及24 h进食... 详细信息

目的:探讨无毛(Hr)基因缺陷对小鼠能量代谢的影响及机制。方法:雄性Hr基因敲除(Hr^(-/-))小鼠和同窝野生型(Hr^(+/+))小鼠各10只,记录小鼠从出生后10周内的体重;于第10周,使用代谢监测系统对小鼠的耗氧量、产热量、活动量以及24 h进食量和饮水量进行监测,测量肛温,ELISA法检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(fT3)浓度,HE染色观察棕色脂肪组织(BAT),Western blot法检测BAT中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、PPARγ共激活因子1α(PGC1α)、解偶联蛋白1(UCP1)蛋白的表达。结果:出生后第1周至第10周,两组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。第10周,两组小鼠血清fT3浓度和活动量差异无统计学意义(P>0.05);与Hr^(+/+)小鼠比较,Hr^(-/-)小鼠的肛温、24 h进食量和饮水量、耗氧量和产热量升高(P基因缺陷可能通过激活PPARγ-PGC1α-UCP1信号通路,调节BAT能量代谢,从而使小鼠处于高能量代谢和高体温状态。

关键词：无毛基因棕色脂肪组织能量代谢过氧化物酶体增殖物激活受体γ PPARγ共激活因子1α 解偶联蛋白-1 小鼠

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豫医无毛小鼠无毛基因DNA原位PCR检测

郑州大学学报（医学版） 2003年第2期38卷 203-204页

作者：轩小燕付庆杜献堂李敏郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的 :探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法 :应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片 ,并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加TaqDNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果 :豫医... 详细信息

目的 :探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法 :应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片 ,并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加TaqDNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果 :豫医无毛小鼠皮肤和脾石蜡组织切片中检测到清晰的杂交信号 ,而且杂交信号位于细胞核内 ;4组对照均未出现杂交信号。结论 :原位PCR在基因组变异检测方面实用。

关键词：小鼠无毛基因原位PCR DNA检测

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豫医无毛小鼠无毛基因的比较生物学分析

郑州大学学报（医学版） 2008年第3期43卷 450-452页

作者：章金涛王纯耀杜春燕郑州大学实验动物中心郑州450052

目的:分析豫医无毛小鼠与其他物种间无毛基因组成的差异。方法:采用RT-PCR方法对豫医无毛小鼠无毛基因的cDNA序列进行克隆测序,并借助生物信息学分析技术对小鼠、大鼠、猴和人的无毛基因及其所编码的氨基酸序列进行比较生物学分析。结果... 详细信息

目的:分析豫医无毛小鼠与其他物种间无毛基因组成的差异。方法:采用RT-PCR方法对豫医无毛小鼠无毛基因的cDNA序列进行克隆测序,并借助生物信息学分析技术对小鼠、大鼠、猴和人的无毛基因及其所编码的氨基酸序列进行比较生物学分析。结果:获得了豫医无毛小鼠无毛基因的全长4 014 bp的cDNA序列(GenBank登录号:AY547390)。豫医无毛小鼠与国内外报道的2种小鼠、大鼠、猴、人等5种动物的核苷酸同源性分别为99.9%、99.7%、94.3%、81.7%、81.8%,氨基酸同源性分别是99.8%、99.7%、94.5%、79.8%、80.0%。结论:无毛基因是一个高度保守基因,不同物种间具有高度同源性。

关键词：无毛小鼠无毛基因克隆比较生物学

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豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1021-1024页

作者：李敏卢新亚赵国强杜献堂郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克... 详细信息

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克隆测序结果为一923bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3150～3565bp位置,包含4个外显子(外显子13～16)及3个内含子(内含子13～15);与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%。结论:①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体。

关键词：豫医无毛小鼠昆明小鼠无毛基因序列分析

豫医卷毛大鼠无毛基因cDNA序列的比较生物学分析

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郑州大学学报（医学版） 2016年第1期51卷 27-31页

作者：张明昊章金涛河南中医学院基础医学院医学机能实验室郑州450046 郑州大学实验动物中心郑州450052

目的:对豫医卷毛大鼠的无毛(Hr)基因进行比较生物学分析。方法:采用PCR方法对豫医卷毛大鼠Hr基因的c DNA序列进行克隆、测序,并与BN大鼠、小家鼠、野猪、家牛、普通猕猴、人、黑腹果蝇和桔小实蝇的Hr基因c DNA序列及其编码产物的氨基酸... 详细信息

目的:对豫医卷毛大鼠的无毛(Hr)基因进行比较生物学分析。方法:采用PCR方法对豫医卷毛大鼠Hr基因的c DNA序列进行克隆、测序,并与BN大鼠、小家鼠、野猪、家牛、普通猕猴、人、黑腹果蝇和桔小实蝇的Hr基因c DNA序列及其编码产物的氨基酸序列进行同源性比较和系统遗传学分析。结果:获得了豫医卷毛大鼠Hr基因全长5 232 bp的c DNA序列(Gen Bank登录号:KR109217)。豫医卷毛大鼠Hr c DNA与BN大鼠、小家鼠、野猪、家牛、普通猕猴、人、黑腹果蝇和桔小实蝇的同源性分别为99.8%、87.3%、67.3%、70.2%、80.8%、79.8%、29.8%和24.9%,氨基酸序列的同源性分别为100.0%、92.9%、75.4%、74.8%、76.0%、77.8%、7.4%和11.7%。结论:Hr基因在哺乳动物中具有一定的保守性,与昆虫等非哺乳类动物之间具有较大的差异性。

关键词：卷毛大鼠无毛基因同源性比较

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豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

作者：臧文巧郑州大学

学位级别：硕士

目的豫医无毛小鼠(Yuyi hairless mice，YYHL)是河南省实验动物中心经10多年培育建立的国内唯一无毛小鼠近交系。该系小鼠出生时体表生长被毛，3周龄被毛开始从头至尾部逐渐脱落，5周龄体表全裸并终生不再长毛。该小鼠脱毛现象与... 详细信息

目的豫医无毛小鼠(Yuyi hairless mice，YYHL)是河南省实验动物中心经10多年培育建立的国内唯一无毛小鼠近交系。该系小鼠出生时体表生长被毛，3周龄被毛开始从头至尾部逐渐脱落，5周龄体表全裸并终生不再长毛。该小鼠脱毛现象与营养和寄生虫病无关，其脱毛性状比例符合3：1孟德尔定律，不受性别影响，并且只有在隐性纯合子状态才表现脱毛，属常染色体隐性遗传。其皮肤随鼠龄的增加而出现皱褶并越来越明显，同时伴有胸腺过早萎缩，皮肤过早老化，行动迟缓，寿命明显缩短(仅为12个月左右)以及免疫和生殖异常等一系列改变。为深入探索豫医无毛小鼠突变的分子机制，本课题组进行了大量研究，其中李敏对豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析证实相当与Mus musculus无毛小鼠(Genbank accession number Z32675)cDNA序列的3150-3565bp位置的923bp片段中，其DNA序列和昆明鼠完全相同;同时统计出该部分DNA序列和小鼠，大鼠及人无毛基因的核苷酸同源性分别为100％，95％，84％，说明该段序列在小鼠无毛基因内保守性较高，并同时排除了突变发生在该部位的可能性。该实验为本科题对豫医无毛小鼠无毛基因突变情况的研究打下了坚实的基础，本实验继续研究豫医无毛小鼠无毛基因，以期找到突变部位。方法本实验根据生物学性状类似的Mus musculus (house mouse)无毛基因cDNA序列(Genbank accession number Z32675)设计引物，对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增，将扩增的特异性片段纯化回收然后转化到特定的感郑州大学2004届硕士研究生学位论文豫医无毛小鼠无毛基因突变部位分析的定位和分析受态细菌中，最后将鉴定阳性的细菌送公司测序。对二者的测序结果进行比较，以寻找豫医无毛小鼠无毛基因突变位置并判断属于何种类型的突变，并将相应编码氨基酸进行比较，同时将测序结果和Mus museulus(Genbank acceSSion number AC122268.5) DNA序列进行比较和分析，研究它们的同源性程度，以确定豫医无毛小鼠无毛基因的特异性程度。结果 1.豫医无毛小鼠、昆明小鼠无毛基因部分DNA序列克隆测序结果本实验共测出豫医无毛小鼠DNA序列3556bp和昆明小鼠DNA序列3549bp，相当于Mus museulus DNA序列(Genbank aeeession number AC122268.5)的第 187953位到191509位，其中包括6个外显子(部分8，13和全部外显子9，10，11，12) 及5个内含子(即本实验所测序列的54一1676bp，1760一24O5bp，2555一2656bp， 2924bp一3156bp，3313一3526bp)。 2.豫医无毛小鼠、昆明小鼠无毛基因部分DNA序列测序结果的比较在本实验所测序列中，共发现豫医无毛小鼠无毛基因相对于昆明小鼠无毛基因不同之处有58个，其中内含子有54个，特别是在本次所测序列的第127一132bp (位于第8内含子)和1925一1934bp(位于第9内含子)处分别存在AACT4个碱基和CTCCATCGS个碱基的插入;在第473一478bp(位于第8内含子)处有AAGA4 个碱基的缺失。外显子部分昆明小鼠相对于豫医无毛小鼠的改变共有4个，即本次所测序列的第244Obp(第10外显子)处C一T，第27O7bp(第11外显子)处C ，第3275bp(第12外显子)G一A，第3300bp(第12外显子)处G一A.特别是在本次所测序列的第3300bp(位于第12外显子，相当于MuS muSCuluS cDNA 序列(Genbank aeeession number 232675)的第3110 bp处)处存在G一A无义突变，导致该部位由编码色氨酸的UGG转变为终止密码子UGA。终止密码子的提前会对无毛蛋白及无毛性状产生重要的影响。该序列中豫医无毛小鼠和昆明小鼠无毛基因的同源性为97.7%，豫医无毛小鼠和Mus musculus无毛基因的同源性为99.4%。 3.豫医无毛小鼠与昆明小鼠和国外报道的Mus musculus无毛基因编码的氨基酸比较本次所测序列昆明小鼠和国外报道的MuS muSCuluS可编码246个氨基酸，郑州大学2004届硕士研究生学位论文豫医无毛小鼠无毛基因突变部位分析的定位和分析而豫医无毛小鼠编码225个氨基酸，终止于本次所测序列对应氨基酸的第225位 (相当于Genbank aeeession number 232675第910位氨基酸)，因为在本次所测序第12外显子中即第

关键词：无毛小鼠豫医无毛小鼠:昆明小鼠无毛基因基因突变内含子外显子终止密码子

Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析

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中国实验动物学报 2011年第2期19卷 107-110,187页

作者：李爱学孙兆增尚世臣王鹏姚晓兰曾林军事医学科学院实验动物中心北京100071

目的探讨Uncv无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性。方法参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Uncv无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析。结果获得了Uncv无毛小鼠及野生... 详细信息

目的探讨Uncv无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性。方法参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Uncv无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析。结果获得了Uncv无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp)。Uncv无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%。与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的。结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关。

关键词： Uncv小鼠无毛基因分子克隆序列分析

伴丘疹性损害先天性无毛症家系无毛基因突变的研究

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伴丘疹性损害先天性无毛症家系无毛基因突变的研究

作者：黄伟苹第二军医大学

学位级别：硕士

伴丘疹性损害先天性无毛症(atrichia with papular lesions,APL)是一种少见的常染色体隐性遗传性皮肤病,临床上表现为全身毛发的缺失以及散在的丘疹性皮损。国外文献报道该病在不同种族中发病率均极低,其发病机制与无毛基因(hairless ge... 详细信息

伴丘疹性损害先天性无毛症(atrichia with papular lesions,APL)是一种少见的常染色体隐性遗传性皮肤病,临床上表现为全身毛发的缺失以及散在的丘疹性皮损。国外文献报道该病在不同种族中发病率均极低,其发病机制与无毛基因(hairless gene,HR)的突变有关。迄今为止,人类基因突变数据库(human gene mutation database,HGMD)共收集了12种APL患者的HR基因突变,包括错义突变、无义突变、切接位点突变和小的缺失等不同类型。目前,国内尚无该病的相关报道。目的研究1个APL家系中HR基因的突变情况。方法取患者颈部肤色及前臂红色丘疹各1处进行组织病理学检查;提取患者及其父母、弟弟的外周血,标准方法抽提DNA;采用聚合酶链反应扩增HR基因的全部编码序列并结合DNA直接测序方法,检测患者HR基因的突变。结果发现患者HR基因存在两处杂合突变:第3外显子的1010位碱基由鸟嘌呤变为腺嘌呤,使第337位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸(G337D);第4外显子的1491位碱基由胞嘧啶变为胸腺嘧啶,使第498位氨基酸由谷氨酸突变为终止密码(Q498X)。患者父亲的HR基因的第3外显子存在G1010A的错义突变。患者弟弟的HR基因的第3外显子也存在G1010A的错义突变。患者母亲的HR基因的第4外显子出现C1491T的无义突变。正常对照者HR基因序列正常。结论该患者无毛基因中G337D及Q498X两处突变可能使该基因无法编码正常的蛋白,为导致临床表现的特异突变。

关键词：伴丘疹性损害先天性无毛症无毛基因突变

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原位PCR检测定位豫医无毛小鼠无毛基因

原位PCR检测定位豫医无毛小鼠无毛基因

作者：轩小燕郑州大学

学位级别：硕士

无毛小鼠(hairless mice)是一种不同于裸小鼠(nude mice)而皮肤和毛发结构发生遗传突变的小鼠新品系。国外已有多种无毛小鼠品系，而国内有关无毛小鼠这方面的报道却很少。1990年，河南省实验动物中心在昆明种实验小鼠繁殖群中，发现一... 详细信息

无毛小鼠(hairless mice)是一种不同于裸小鼠(nude mice)而皮肤和毛发结构发生遗传突变的小鼠新品系。国外已有多种无毛小鼠品系，而国内有关无毛小鼠这方面的报道却很少。1990年，河南省实验动物中心在昆明种实验小鼠繁殖群中，发现一株无毛突变小鼠。经过10多年的研究，已建成一无毛小鼠的近交系，命名为豫医无毛小鼠(Yuyi Hairless Mice，简称YYHL)。该种小鼠出生时被毛生长正常，2—3周开始脱毛，经大约2周时间除胡须外其余被毛全部脱净，并终生保持无毛状态。该种小鼠生长过程中，除被毛的脱落外，头部和体侧皮肤也逐渐显得松弛、出现皱褶，时值壮年(7-8月龄)已“老态龙钟”;松弛的上睑皮肤甚至遮盖双眼，致使行走觅食困难。该突变无毛小鼠自然寿命大约是10个月余，仅为正常昆明小鼠寿命的一半。其胸腺退化也早于野株小鼠、免疫力下降，特别是细胞免疫。根据孟德尔遗传学原理，分析其遗传图谱，证实脱毛性状是由于常染色体上单一隐性基因发生突变所致。为了进一步研究造成无毛小鼠相应表现型变异的遗传学根源，本实验拟检测定位无毛基因，对豫医无毛小鼠进行深入的分子生物学研究。复习文献，根据GenBank存储的类郑州大学2002年硕士毕业论文原位PCR检测定位豫医无毛小鼠无毛基因似的突变株无毛基因全序列设计引物。应用原位PCR的方法，检测定位豫医无毛小鼠胸腺、脾组织切片和骨髓细胞、淋巴细胞内的无毛基因。确定豫医无毛小鼠与其他得到国际公认的无毛小鼠，如：rhlno mice，hairless mice等基因结构万面的同源性。结果 1．石蜡组织切片上突变基因的获得：利用基因文库中的无毛基因全序列设计一对引物，即引物 P;和 Py引物 5”端用生物素标记。应用豫医无毛小鼠的胸腺、脾做石蜡组织切片，正常昆明小鼠的胸腺、脾的组织所做石蜡组织切片作为对照。应用蛋白酶K改变石蜡切片上组织的通透性，用多聚甲醛固定组织，乙醇水化。热启动：在 PCR扩增前，部分 PCR反应混合液（不加 Taa DNA多聚酶）94oC预热 smin，然后再加入 Taq DNA多聚酶。每张玻片上加4oUL＊＊R反应液，盖上盖玻片，液体石蜡封片。于94℃热板上变性smin，50℃复性10min，72OC延伸10min;共进行2 5个循环。对照：正常昆明小鼠的石蜡切片;豫医无毛小鼠石蜡组织切片不加引物对照和不加 Taq DNA聚合酶的对照。反应结束后三氯甲烷，酶学方法检测杂交信号，在显微镜观察结果并记录。确定有杂交信号吸附在组织上。 2．染色体标本的获得：用戊巴比妥钠麻醉豫医无毛小鼠和正常的昆明小鼠实验群。腹部酒精消毒，置超净台中，取心脏血大约 lml，用淋巴细胞分离液分离，PB S冲洗数次，以去除淋巴细胞分离液。同时取小鼠脾脏，边研磨边滴加 yMI 640，用淋巴细胞分离液分离，PBS冲洗。心脏血和脾脏的淋巴细胞在RPMI 1640培养液中培养 72h，培养时在 RPMI 640培养液中添加刀豆蛋白 A， 2郑州大学2002年硕士毕业论文原位P＊R检测定位豫医无毛小鼠无毛基因培养至 70h时，向 yMI 640培养液中加秋水仙素，培养至 72h，收集培养液离心，0刀SMKCI低渗50min，离心，甲醇／冰乙酸固定3次，把固定好的淋巴细胞均匀平铺与载玻片上（玻片用多聚赖氨酸处理人取幼龄的豫医无毛小鼠和相当月龄的正常昆明小鼠，腹腔注射秋水仙素，作用4h后，将小鼠断颈处死，分离股骨，用注射器冲洗骨髓腔，离心收集骨髓细胞，0刀SMKCI低渗80而n，离心，甲醇／冰乙酸固定。把固定好的淋巴细胞均匀平铺与载玻片上（玻片用多聚赖氨酸处理人这样就准备好了处于分裂中期的染色体涂片。 3．染色体G显带：将步骤2中制备好的淋巴细胞和骨髓细胞的

关键词：豫医无毛小鼠 Rhino mice hairless mice 无毛基因原位PCR 染色体G带