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在线推扫富集-胶束电动毛细管色谱检测旋覆花素中和大鼠血浆中的旋覆花内酯

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色谱 2006年第5期24卷 508-512页

作者：赵京山温进坤韩梅河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室河北石家庄050017

采用熔融石英毛细管,以含有50mm o l/L十二烷基硫酸钠的50mm o l/L硼酸盐缓冲液为电极缓冲液,以10mm o l/L硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,经过对分离条件的优化,成功地建立了胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing(推扫)富集技术检测中性脂... 详细信息

采用熔融石英毛细管,以含有50mm o l/L十二烷基硫酸钠的50mm o l/L硼酸盐缓冲液为电极缓冲液,以10mm o l/L硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,经过对分离条件的优化,成功地建立了胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing(推扫)富集技术检测中性脂溶性物质旋覆花内酯(acety lb ritann ilac tone,ABL)的实验方法。所建方法的批内、批间测定值的相对标准偏差均小于5%,灵敏度为0.005g/L,回收率大于92%;被检测样品的含量与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.997 5。用所建立的方法检测了旋覆花素中ABL的含量及其在体内的动态变化,结果表明胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing样品富集技术可显著提高检测的灵敏度。该方法具有操作简单、进样量小(nL级)、检测速度快等特点,弥补了毛细管电泳在测定痕量组分方面的不足。

关键词：胶束电动毛细管色谱 sweeping在线富集技术旋覆花内酯旋覆花素大鼠血浆

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旋覆花内酯调制血管内皮细胞黏附的作用机制

旋覆花内酯调制血管内皮细胞黏附的作用机制

作者：李睿河北医科大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种血管慢性炎症反应疾病。当血管内膜受损时,损伤部位的内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等所释放的各种炎症因子,如tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β),interferon-γ(... 详细信息

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种血管慢性炎症反应疾病。当血管内膜受损时,损伤部位的内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等所释放的各种炎症因子,如tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β),interferon-γ(IFN-γ)等激活内皮细胞,使其合成、分泌血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercelluar adhension molecule-1,ICAM-1)、osteopontin(OPN)和Tenascin-c等黏附相关蛋白。这些黏附分子促进血小板和单核细胞与内皮细胞之间的黏附,并进一步促进炎性因子的释放,使血管炎性反应加重。NF-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)处于各种炎性因子调节网络的中心环节,是炎症反应的主要调控因子。NF-κB的活化可调节多种基因的表达,包括炎性介质、黏附分子、增殖与凋亡因子等,参与介导炎症反应、免疫应答、细胞增殖与凋亡等病理生理过程。NF-κB的激活被认为是血管内皮细胞受损的始动环节之一。因此,调节血管内皮细胞NF-κB的活性,阻断炎性应答信号通路,减少血管损伤部位炎性介质的释放,对心血管疾病防治具有重要意义。欧亚旋覆花(Inula Britannica-F)为菊科旋覆花属植物,是具有降气、消痰、止呕和抗炎功效的常用中药。旋覆花内酯(1,6-O2-acetylbritannilactone,ABLO2)是从欧亚旋覆花中分离得到的一种具有抗炎作用的单体,其是否对血管内皮损伤诱发的炎性反应具有抑制作用尚不清楚。为了探讨ABLO2对血管内皮细胞炎性反应及黏附的影响及其作用机制,本文从以下几方面进行了研究。方法:通过电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察ABLO2对核因子κB(NF-κB)p65与DNA顺式元件相互作用的影响;Western blot分析检测NF-κB p65的表达及其核转位以及IKK、p-IKK、IκBα、p-IκBα和黏附分子的表达变化;细胞黏附实验、细胞跨膜迁移实验检测内皮细胞黏附活性及单核细胞跨膜迁移能力的变化。结果:1. ABLO2抑制NF-κB活化及核转位Western blot结果显示:LPS/IFN-γ刺激ECV304细胞30 min后,核内NF-κB p65的水平明显升高,1 h后达高峰。用20μmol/L ABLO2预处理ECV304细胞2 h后,再用LPS/IFN-γ处理细胞,p65核转位受到明显抑制,表明ABLO2可抑制LPS/IFN-γ诱导的p65活化与核转位。2. ABLO2抑制p65与DNA顺式元件的相互作用以5′末端标记的含有NF-κB结合基序的双股寡核苷酸为探针,分别与不同条件处理的ECV304细胞核蛋白进行结合反应。经电泳分离后,放射自显影可见,从LPS/IFN-γ处理的ECV304细胞中提取的核蛋白与探针的结合活性显著增加,在5% PAGE上出现滞后的DNA-蛋白质复合物区带,经20μmol/L ABLO2预孵育2 h后,LPS诱导的核蛋白与探针的结合活性受到明显抑制。3. ABLO2抑制IκBα磷酸化与降解Western blot分析结果显示,对照细胞的胞浆中含有较高水平的IκBα,其磷酸化水平相对较低,用LPS/IFN-γ刺激ECV304细胞10 min、30 min、1 h后,IκBα磷酸化水平快速、短暂升高,于刺激10 min时达高峰,而IκBα水平变化与其磷酸化水平呈相反趋势。用20μmol/L ABLO2预处理ECV304细胞2 h后,LPS/IFN-γ诱导的IκBα磷酸化及IκBα降解受到明显抑制,以诱导10 min时作用最明显。提示ABLO2能抑制IκBα磷酸化与降解。4. ABLO2抑制IKK的活化Western blot结果显示,用LPS/IFN-γ刺激ECV304细胞10 min后,IKK磷酸化水平明显升高,以刺激30 min时最为明显,达对照组的13.12倍;用ABLO2预处理细胞2 h后,LPS/IFN-γ诱导的IKK磷酸化水平比未预孵育组降低73 %。5. ABLO2抑制NF-κB依赖的黏附分子表达Western blot分析结果表明,在常规培养的ECV304细胞中,黏附分子VCAM-1、OPN、MMP-9、Tenascin-c的表达水平均较低,给予10μg/ml LPS/IFN-γ刺激ECV304细胞

关键词：旋覆花内酯 NF-κB 内皮细胞活化黏附分子炎症

旋覆花内酯抑制血管平滑肌细胞炎性应答与阻断NF-κB活化有关

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细胞生物学杂志 2007年第2期29卷 267-271页

作者：刘月平韩梅温进坤郑斌河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

应用免疫细胞化学染色及Western印迹检测血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)环加氧酶-2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)表达、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)水平和NF-κBp65核转位的变化;电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定旋覆花内酯(1-o-acetylbritannilactone,ABL)对核内NF-κBp65与DNA调控元件的结合活性的影响。结果表明,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的VSMC,p65核转位加快,细胞核内的NF-κBp65水平快速升高,同时伴有IκB-α的减少;用ABL预处理VSMC后,LPS诱导的p65核转位增加及IκB-α减少受到明显抑制,抑制作用呈剂量依赖性。EMSA结果显示,LPS处理VSMC,其核蛋白与含有NF-κB结合位点的探针的结合活性升高;而用ABL预处理的VSMC,LPS诱导的核蛋白与探针结合活性的升高受到明显抑制。进而,ABL对NF-κB活化启动的下游炎性基因COX-2表达也具有较强的抑制效果。因此,ABL是一种抗炎物质,通过抑制NF-κB活化和炎性基因COX-2的表达而减弱或消除LPS诱导的VSMC炎症应答反应。

关键词：旋覆花内酯血管平滑肌细胞 NF—kB 炎症反应

旋覆花内酯对LPS诱导的离体培养血管炎症因子表达的影响

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旋覆花内酯对LPS诱导的离体培养血管炎症因子表达的影响

作者：张佳河北医科大学

学位级别：硕士

目的:血管炎症反应是动脉粥样硬化( atherosclerosis, AS )、经皮腔内冠状动脉成形术( percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA )后血管再狭窄等心血管疾病发生发展的重要原因,涉及各种炎性介质与血管细胞(包括内皮细胞... 详细信息

目的:血管炎症反应是动脉粥样硬化( atherosclerosis, AS )、经皮腔内冠状动脉成形术( percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA )后血管再狭窄等心血管疾病发生发展的重要原因,涉及各种炎性介质与血管细胞(包括内皮细胞和平滑肌细胞)以及炎症细胞与血管细胞之间复杂的相互作用。一氧化氮( nitric oxide, NO )与前列腺素E2 ( prostaglandin E2, PGE2 )是重要的炎症介质,它们分别由一氧化氮合酶( nitric oxide synthase, NOS )和环加氧酶( cyclo-oxygenase, COX )催化合成。在炎症因子诱导下,诱导型一氧化氮合酶( inducible nitric oxide synthase, iNOS )和环加氧酶-2( cyclo-oxygenase-2, COX-2 )在血管细胞中的表达上调。同时,血管细胞黏附分子( vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1 )、细胞间黏附分子( intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)等的表达也升高,促进循环白细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱粒细胞等各种炎症细胞的募集。这些炎性介质在多环节上影响炎症反应的进程。核因子-κB( nuclear factor-κB, NF-κB )作为重要的转录因子,调控多种与炎症和细胞增殖相关的基因进行表达,如iNOS、COX-2、ICAM-1和VCAM-1等。正常情况下,NF-κB与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性的形式存在于胞浆中。当炎症发生时,多种炎症因子可通过信号传导激活IKK的上游激酶而促使IKK活化,活化的IKK通过使IκB发生磷酸化,而使IκB与NF-κB二聚体解离、降解,进而NF-κB暴露核定位序列而转位入核,通过结合于特异序列激活下游特定炎症基因的转录。因此,iNOS、COX-2、ICAM-1和VCAM-1的表达和NF-κB的激活可以作为寻找抗炎药物的靶标。旋覆花内酯( 1-o-acetylbritannilactone, ABL )是我们从中药旋覆花中提取分离的一种结构属于苯并呋喃酮衍生物的单体成分,前期实验证实其具有抑制炎性疼痛的作用。我们以往用体外培养的单核/巨噬细胞和血管内皮细胞研究其作用机制时发现,ABL对单核/巨噬细胞和血管内皮细胞均具有明显的抗炎作用,其作用机制与抑制NF-κB活化及下调iNOS、COX-2、ICAM-1和VCAM-1基因表达有关。在此基础上,本研究以离体培养的血管为研究对象,在器官水平上,观察ABL对脂多糖( LPS )诱导的促炎基因iNOS、COX-2和血管细胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1表达的影响,并研究其分子机制,从不同的角度探讨ABL抗血管炎性反应的效应及作用靶点。方法 1离体血管的培养及分组实验动物常规麻醉消毒,沿腹部正中线切口,并延长至胸腔。迅速分离大鼠胸腹主动脉,将剪下的血管放在含0.01M PBS的培养皿中漂洗去血细胞和血凝块,在无菌条件下去除血管周围多余的组织,剪成2-3 mm左右的动脉环,将动脉环放在24孔培养平板中,加入含10 %胎牛血清的DMEM培养基1 ml至刚好浸没动脉环。将24孔培养平板置入密闭的有机玻璃箱中。通入混合气体(成分为95%O2和5%CO2 ),将有机玻璃箱置入孵箱,在37℃孵育一定时间,每隔6 h换一次培养基。培养血管分为对照组、LPS组和ABL+LPS组。 2实验标本的处理离体血管环分别用LPS刺激1 h、6 h、12 h、18 h等不同时间后,提取组织总蛋白进行Western blot分析,检测血管壁中NF-κB p65的表达变化,并检测其上游基因IKK、IκBα和炎性基因iNOS、COX-2、ICAM-1、VCAM-1的表达变化。结果 1旋覆花内酯对LPS诱导的离体培养血管组织中NF-κB表达的影响 Western blot分析结果显示,分别给予不同浓度的LPS( 5、10、20 mg/L )刺激血管6 h,NF-κB p65蛋白的表达水平随着LPS刺激浓度的增加而呈逐渐升高趋势,与对照组相比,分别增加4.60倍、11.8倍和15.7倍。当加入5、10、20μmol/L ABL预孵育离体血管环2 h后,再加入LPS( 20 mg/L )刺激6 h,与LPS组( 20 mg/L )相比,随着ABL预处理浓度的增加NF-κB p65蛋白的表达呈下降趋势,分别降低了10.2 %、56.0 %和74.3 %。ABL对LPS诱导的NF-κB表达的抑制具有明显的剂量依赖性作用。 2旋覆花内酯对LPS诱导的离体培养血管组织中i

关键词：离体培养血管旋覆花内酯炎症

旋覆花内酯对血管内皮剥脱诱导的基质金属蛋白酶-2及其组织抑制剂表达的影响

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旋覆花内酯对血管内皮剥脱诱导的基质金属蛋白酶-2及其组织抑制剂...

作者：李娟娟河北医科大学

学位级别：硕士

目的：PTCA术后血管再狭窄(restenosis，RS)的发病机制及防治是目前心血管疾病的一个研究热点。RS的发生是一个血管损伤后新生内膜增生和血管重构的过程。这与血管壁细胞外基质的代谢失衡密切相关。基质金属蛋白酶(matrix metalloprotei... 详细信息

目的：PTCA术后血管再狭窄(restenosis，RS)的发病机制及防治是目前心血管疾病的一个研究热点。RS的发生是一个血管损伤后新生内膜增生和血管重构的过程。这与血管壁细胞外基质的代谢失衡密切相关。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是体内较为重要的一类蛋白水解酶。组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)作为MMPs的天然抑制剂与MMPs一起调控细胞外基质代谢。在血管组织中以MMP-2／TIMP-2系统最为重要。旋覆花内酯(1-o-acetylbritannilactone，ABL)是我们从旋覆花中提取的一种苯并呋喃酮衍生物，通过体外实验已证实其可抑制血管细胞的炎症反应。但尚未在体内实验证明其对RS的防治效果。本实验通过球囊内皮剥脱术建立的大鼠血管损伤狭窄模型，观察血管损伤后新生内膜形成过程中MMP-2和TIMP-2的表达变化及ABL对RS形成以及MMP-2和TIMP-2表达的影响。方法： 1 动物模型的复制及分组：实验动物常规麻醉消毒;沿颈部正中线切口，于气管左侧分离左侧颈总动脉;于颈总动脉远端剪一楔形切口，球囊导管自切口处经颈总动脉插入至胸腹主动脉远心端，充盈球

关键词：基质金属蛋白酶-2 组织金属蛋白酶抑制剂-2 旋覆花内酯血管再狭窄

大花旋覆花内酯通过抑制NF-κB活化抗血管炎症反应

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中国病理生理杂志 2008年第10期24卷 2033-2036页

作者：张佳尉坤刘月平温进坤张嫡群韩梅河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室神经与血管生物学省部共建教育部重点实验室河北石家庄050017

目的:以离体培养的血管环为研究对象,探讨大花旋覆花内酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)抑制脂多糖(LPS)诱导的血管炎症反应效应和分子机制。方法:将体外培养的血管环预先用ABL孵育后,再用LPS刺激,提取组织总蛋白进行Western blottin... 详细信息

目的:以离体培养的血管环为研究对象,探讨大花旋覆花内酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)抑制脂多糖(LPS)诱导的血管炎症反应效应和分子机制。方法:将体外培养的血管环预先用ABL孵育后,再用LPS刺激,提取组织总蛋白进行Western blotting分析。结果:ABL抑制LPS诱导的IKK磷酸化活化和由此引发的IκBα的磷酸化降解,降低NF-κB水平,进而抑制NF-κB依赖的炎症因子iNOS、COX-2、ICAM-1和VCAM-1的表达。结论:ABL是一种调节NF-κB活性的制剂,具有抑制致炎因子表达,上调抑炎因子水平,维持两者平衡的作用,可消除LPS诱导的血管炎症反应。

关键词：旋覆花内酯炎症主动脉 NF—κB

旋覆花内酯调控microRNA-155介导的炎症反应减轻实验性脑缺血损伤

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旋覆花内酯调控microRNA-155介导的炎症反应减轻实验性脑缺血损伤

第十一次中国中西医结合神经科学术会议

作者：温雅张祥建董立鹏赵景茹张聪祝春华河北医科大学第二医院神经内科

目的:过度炎症反应是缺血性脑血管病继发性损伤的关键病理机制。大量研究表明microRNA-155(miR-155)可介导炎性细胞因子表达,旋覆花内酯通过抑制炎性相关基因的表达而发挥有效的抗炎作用。但有关缺血性脑血管病继发性炎症损伤中miR-155... 详细信息

目的:过度炎症反应是缺血性脑血管病继发性损伤的关键病理机制。大量研究表明microRNA-155(miR-155)可介导炎性细胞因子表达,旋覆花内酯通过抑制炎性相关基因的表达而发挥有效的抗炎作用。但有关缺血性脑血管病继发性炎症损伤中miR-155的作用机制及旋覆花内酯的保护作用少见报道。本实验在小鼠永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)所致脑梗死模型上进行了深入研究。方法:采用miR-155-/-小鼠和野生型小鼠制备pMCAO模型。术前24h侧脑室注射pAd-miR-155诱导miR-155过表达。缺血缺氧(OGD)诱导的BV2细胞和pMCAO小鼠脑组织用于检测旋覆花内酯和miR-155对促炎因子表达的调节。结果:与对照组相比,旋覆花内酯能明显降低神经功能缺损评分、脑梗死体积(P旋覆花内酯下调TNF-α和IL-1β的表达的机制是抑制NF-κB、TRL4的表达。进一步研究发现miR-155通过上调TRL4的表达,下调SOCS1和MyD88的表达而促进TNF-α和IL-1β的表达。旋覆花内酯能抑制miR-155靶基因的表达。结论:miR-155通过调节TLR4/MyD88和SOCS1的表达在缺血性脑血管病中介导炎症反应,而旋覆花内酯通过抑制miR-155的表达发挥抗炎作用。结果表明miR-155将成为治疗缺血性脑血管病继发性炎症损伤的新靶点。

关键词：脑缺血炎症 microRNA-155 旋覆花内酯

来源： cnki会议评论

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欧亚旋覆花化学成分研究

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2016年第8期 291-291页

作者：刘卫张英华陈人萍谷伟玲张艳利王敏吉林省中医药科学院吉林长春130012

研究欧亚旋覆花的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和制备HPLC等技术方法进行分离纯化,运用理化性质和波普数据鉴定化合物结构。结果从欧亚旋覆花乙醇提取物中分离得到2个新化合物,分别鉴定为6α-Hydroxytomentosin(1),旋... 详细信息

研究欧亚旋覆花的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和制备HPLC等技术方法进行分离纯化,运用理化性质和波普数据鉴定化合物结构。结果从欧亚旋覆花乙醇提取物中分离得到2个新化合物,分别鉴定为6α-Hydroxytomentosin(1),旋覆花内酯(2),迄今为止未见文献报道。

关键词：欧亚旋覆花化学成分旋覆花内酯