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猪旋毛虫病时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 412-418页

作者：李艾哲张惠媛刘琰白雪丁静李辰刘晓雷王洋刘明远吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

应用旋毛虫混合排泄分泌蛋白(ES)和家兔IgG分别偶联铕(Eu)纳米颗粒(EuNPs)制备2个荧光探针,即EuNPs-ES探针和EuNPs-Rabbit IgG探针。将小鼠抗猪IgG与山羊抗家兔IgG分别包被于检测线与质控线上,制备时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用15... 详细信息

应用旋毛虫混合排泄分泌蛋白(ES)和家兔IgG分别偶联铕(Eu)纳米颗粒(EuNPs)制备2个荧光探针,即EuNPs-ES探针和EuNPs-Rabbit IgG探针。将小鼠抗猪IgG与山羊抗家兔IgG分别包被于检测线与质控线上,制备时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用15头不同剂量人工感染旋毛虫猪的全血评估研制的试纸条性能。结果显示,用试纸条检测感染200、400、1000、10000条旋毛虫肌幼虫的猪全血样品时,结果均为阳性。而使用集样消化法消化对应的猪膈肌样本时,低剂量(200条)未全部检出。以上结果表明,本研究中建立的时间分辨荧光免疫层析试纸条方法相比于集样消化法具有更高的灵敏度,且操作简便,仅需5~10 min即可出结果,本研究成功建立了一种用于现场快速检测旋毛虫病的方法。

关键词：旋毛虫病肌幼虫排泄分泌抗原铕纳米颗粒全血免疫层析试纸条

《旋毛虫病暴发处理技术规范》实施情况跟踪评价

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中国卫生标准管理 2023年第9期14卷 6-12页

作者：俞铖航胡坤敏李若扬郑彬中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所/国家热带病研究中心/国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室/世界卫生组织热带病合作中心/国家级热带病国际联合研究中心科技教育处上海200025 上海第六人民医院东院医院感染管理科上海201306

目的标准是经济活动和社会发展的技术支撑,为做好标准,新《标准法》中明确提出复审需要建立在对现行标准实施评估后进行。本研究选取行业标准《旋毛虫病暴发处理技术规范》,为了充分了解标准实施过程中遇到的情况和问题,从而为标准实施... 详细信息

目的标准是经济活动和社会发展的技术支撑,为做好标准,新《标准法》中明确提出复审需要建立在对现行标准实施评估后进行。本研究选取行业标准《旋毛虫病暴发处理技术规范》,为了充分了解标准实施过程中遇到的情况和问题,从而为标准实施、修订和宣贯提供更具有科学依据的建议。方法本研究2020年1月对旋毛虫病的主要流行省份云南省的省、市、县、乡四级共21个机构,通过问卷调查了解标准知晓情况、内容掌握情况、宣传贯彻情况、执行的适用性、可操作性等相关信息。结果共回收103份问卷,有效问卷103份,规范的总知晓率、总使用率分别为81.55%和79.76%,从事寄生虫病相关工作的人员两率显著高于非从事寄生虫病相关工作的人员。其中县级单位人员的知晓率(91.67%)、使用率(83.33%)高于市级单位(89.47%,73.68%),高于省级单位(58.33%,8.33%)。标准的整体掌握程度高(85.28%),掌握程度仅与是否知晓标准差异有统计学意义(P旋毛虫病暴发处理技术规范》是一个可操作性强、适用性强的标准,在旋毛虫突发公共事件中能够发挥重要作用,建议继续适用。但是建议结合疾病的流行特征和工作人员的实际需求开展多样化、针对性培训,做好从业人员继续教育工作,缩小地区间认知差异;持续推进标准宣贯工作,探索新模式、新方法。

关键词：标准寄生虫病旋毛虫病跟踪评价效果评价卫生技术评估

我国旋毛虫病流行病学诊断治疗及防治措施研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2020年第5期32卷 448-452,458页

作者：杨小迪徐常艳王舒颖高宏宇梁金宝蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院第一附属医院

旋毛虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,人和多种动物(包括肉食动物、草食动物甚至某些禽鸟类)均可被感染,人因生食或半生食含有活幼虫囊包的肉类或肉制品而感染。在中国,该病主要流行于西南、东北和中原地区,危害人数多、社会... 详细信息

旋毛虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,人和多种动物(包括肉食动物、草食动物甚至某些禽鸟类)均可被感染,人因生食或半生食含有活幼虫囊包的肉类或肉制品而感染。在中国,该病主要流行于西南、东北和中原地区,危害人数多、社会影响大。该病暴发所导致的突发性公共卫生事件,严重威胁着人民健康和社会稳定。本文就我国旋毛虫病流行状况、诊断、治疗和防控措施等作一概述,旨在为进一步做好我国旋毛虫病防治工作提供参考。

关键词：旋毛虫病流行病学诊断治疗防控措施

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旋毛虫病的诊断与治疗

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 53-57页

作者：王中全崔晶郑州大学医学院寄生虫学教研室郑州450052

旋毛虫病无特异性的症状和体征,临床诊断较困难,所以流行病学资料非常重要,患者常有食生或半生肉类史,在该病暴发时期,同批患者往往能追溯到聚餐史。在肠道期可出现腹痛、腹泻伴全身不适等症状。发热、眼睑或面部水肿、肌肉疼痛是急性... 详细信息

旋毛虫病无特异性的症状和体征,临床诊断较困难,所以流行病学资料非常重要,患者常有食生或半生肉类史,在该病暴发时期,同批患者往往能追溯到聚餐史。在肠道期可出现腹痛、腹泻伴全身不适等症状。发热、眼睑或面部水肿、肌肉疼痛是急性期的主要表现,重症患者可并发心肌炎、肺炎及脑炎等。多数患者感染后2～5周外周血中嗜酸粒细胞增多。应用肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原和合成的泰威糖(tyvelose,3,6-双脱氧己糖)抗原ELISA检测旋毛虫抗体IgG,具有较高的特异性和敏感性,是初步诊断旋毛虫感染的首选血清学方法,ELISA阳性者需经蛋白质印迹分析确认。旋毛虫病的确诊主要依靠肌肉活检发现旋毛虫幼虫。阿苯达唑是治疗旋毛虫病的首选药物,剂量为20～30mg/(kg·d),分2次口服,疗程5～7d。糖皮质激素可延长旋毛虫感染的肠道期和增加肌肉虫荷,一般仅用于重症患者且需与阿苯达唑联合应用。

关键词：旋毛虫病诊断治疗 ELISA 蛋白质印迹阿苯达唑

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社会经济制度转变对旋毛虫病再现的影响

中国热带医学 2021年第4期21卷 385-389页

作者：龙绍蓉刘若丹张玺姜鹏崔晶王中全郑州大学基础医学院病原生物学系河南郑州450052

20世纪90年代,随着苏联解体和东欧剧变,俄罗斯及东欧国家出现了社会经济制度的转变与社会动荡。国营大型集体化养猪场被解散后,出现了大量达不到卫生标准的小型私人养猪场,结果引起旋毛虫病的死灰复燃,导致家猪旋毛虫的感染率明显升高... 详细信息

20世纪90年代,随着苏联解体和东欧剧变,俄罗斯及东欧国家出现了社会经济制度的转变与社会动荡。国营大型集体化养猪场被解散后,出现了大量达不到卫生标准的小型私人养猪场,结果引起旋毛虫病的死灰复燃,导致家猪旋毛虫的感染率明显升高。社会动荡导致标准化大型屠宰厂和肉类加工厂的数量明显减少,随之出现了大量的小型私人屠宰场或肉类加工厂,同时,有经验的兽医检疫人员的大量流失,导致了未经检疫的猪肉上市销售,结果引起了人体旋毛虫病的多次暴发流行。旋毛虫病在俄罗斯及一些东欧国家对居民身体健康造成了严重危害,也是当地常见的突发公共卫生事件。随着旅游业的发展及感染有旋毛虫的马肉出口到西欧,对西欧的公共卫生也构成了严重威胁。

关键词：旋毛虫病俄罗斯东欧社会经济制度转变

纳米金棒标记旋毛虫期抗原筛选及血清学检测研究

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纳米金棒标记旋毛虫期抗原筛选及血清学检测研究

作者：朱逢龙大理大学

学位级别：硕士

目的成功制备表面标记旋毛虫成虫、新生幼虫、囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原的纳米金棒,筛选出纳米金棒标记旋毛虫病的优势检测抗原及最适包被浓度,证实纳米金棒标记旋毛虫成虫纯化抗原的检测方法,能够为旋毛虫病的早期灵敏检测奠定... 详细信息

目的成功制备表面标记旋毛虫成虫、新生幼虫、囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原的纳米金棒,筛选出纳米金棒标记旋毛虫病的优势检测抗原及最适包被浓度,证实纳米金棒标记旋毛虫成虫纯化抗原的检测方法,能够为旋毛虫病的早期灵敏检测奠定实验基础。方法1.通过感染动物的方法,建立旋毛虫病的模型,收集旋毛虫成虫、新生幼虫、囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原及旋毛虫感染小鼠血清。2.巯基化旋毛虫成虫、新生幼虫、囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原,分别与纳米金棒聚合,通过紫外分光光度计扫描纳米金棒表面纵向等离子共振吸收峰的红峰移位变化,筛选出相应抗原的最佳包被浓度。3.将纳米金棒标记旋毛虫三个虫期的粗抗原和纯化抗原分别对不同时间、不同感染程度及不同稀释度阳性血清抗体检测结果作比较,筛选出旋毛虫标记纳米金棒的优势检测抗原;同时将检测结果与ELISA法对比,研究纳米金棒标记旋毛虫最佳检测抗原的早期灵敏性。结果1.成功建立旋毛虫病动物模型,并获得旋毛虫成虫、新生幼虫和囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原。2.制备了旋毛虫成虫、新生幼虫、囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原包被的纳米金棒,筛选出各个抗原最大的红峰移位及相应的最佳包被浓度:成虫粗抗原最大红峰移位为8nm,对应的最佳包被浓度为40ug/ml;新生幼虫粗抗原最大红峰移位为11nm,对应的最佳包被浓度为40ug/ml;囊包幼虫粗抗原最大红峰移位为11nm,对应的最佳包被浓度为30ug/ml;成虫纯化抗原72KD包被前后最大红峰移位为29nm,对应的最佳包被浓度为30ug/ml;旋毛虫新生幼虫纯化抗原260KD包被前后最大红峰移位为20nm,对应的最佳包被浓度为30ug/ml;旋毛虫囊包幼虫纯化抗原28KD包被前后最大红峰移位为21nm,对应的最佳包被浓度为20ug/ml。3.旋毛虫成虫、新生幼虫和囊包幼虫的虫期粗抗原包被的纳米金棒检测不同时间和不同感染程度的血清抗体最大红峰移位为9nm,最小红峰移位为0。旋毛虫成虫、新生幼虫和囊包幼虫的虫期纯化抗原包被的纳米金棒检测不同时间和不同感染程度的血清抗体最大红峰移位为49nm,最小红峰移位为9nm。结果以成虫纯化抗原包被的纳米金棒检测效果为最佳,筛选出成虫纯化抗原作为旋毛虫病的优势检测抗原。对比ELISA法检测结果:纳米金棒标记的成虫纯化抗原在检测旋毛虫感染轻度、中度的血清抗体较ELISA法提前8d;纳米金棒标记的成虫纯化抗原在检测旋毛虫阳性血清抗体的最低稀释度为1:800,也远低于ELISA法能检测的阳性血清最低稀释度1:600。结论成功制备旋毛虫成虫、新生幼虫和囊包幼虫的虫期粗抗原和纯化抗原包被的纳米金棒,筛选出旋毛虫三个虫期抗原的最佳包被浓度。优选出旋毛虫成虫纯化抗原72KD为最佳检测抗原,其最适包被浓度为30ug/ml。纳米金棒标记旋毛虫成虫纯化抗原检测血清抗体结果较ELISA法,检测时间更早、灵敏性更高,为丰富旋毛虫病的检测方法提供新的技术思路。

关键词：纳米金棒旋毛虫病旋毛虫抗原检验

Wortmannilatone F与G31P联合用药对旋毛虫抑杀作用和抗囊包形成与纤维化的实验研究

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Wortmannilatone F与G31P联合用药对旋毛虫抑杀作用和抗囊包形成...

作者：张雪强大连医科大学

学位级别：硕士

实验目的:旋毛虫病是一种对人类健康危害较大的寄生虫病,本病呈世界性分布,也是我国重点防治的一种食源性寄生虫病。目前国内外有关旋毛虫病的实验研究主要集中于病原学和免疫学,而针对旋毛虫病药物防治方面的研究较少。阿苯达唑和苯并... 详细信息

实验目的:旋毛虫病是一种对人类健康危害较大的寄生虫病,本病呈世界性分布,也是我国重点防治的一种食源性寄生虫病。目前国内外有关旋毛虫病的实验研究主要集中于病原学和免疫学,而针对旋毛虫病药物防治方面的研究较少。阿苯达唑和苯并咪唑是当前临床上应用最广的治疗旋毛虫病药物,该类药物非我国自主产权,且有一定的副作用,同时又有产生耐药性的趋向,因此开发具有我国自主产权的抑杀旋毛虫的药物,无论从临床上应用于防治旋毛虫病的实际工作方面,还是对我国社会经济发展方面都有着重要的意义。Wortmannilactone F是一种从邬氏黄丝曲菌(Talaromyces.Wortmannii)分离得到的新型化合物,它可以抑制蠕虫线粒体内膜上的电子传递,为NADH-延胡索酸还原酶抑制剂。我们的前期实验已证明该药对旋毛虫成虫具有明显的抑杀作用。G31P是一种趋化因子的竞争性抑制剂,能阻断IL8以及其他趋化因子与CXCR1/2结合,从而使得趋化因子失去正常的生物学效应,阻止多种炎症细胞的浸润,减轻病灶周围的炎症反应。在探讨防治旋毛虫病的临床用药时,除应选用能直接有效地抑杀幼虫,以防止其引发的机械损害和免疫病理损伤的药物外,还要考虑到能有效地阻止囊包形成、囊包外胶原纤维的增生和囊壁周围血管的新生,防止由于囊包形成和纤维化给病灶周围组织器官造成继发性损害,以达到有效地防治旋毛虫感染(病)的目的。本实验旨在探讨Wortmannilatone F与G31P联合用药对旋毛虫的抑杀作用和对囊包形成与纤维化的影响。实验方法:1.建立旋毛虫感染动物模型和实验分组:(1)建立模型:取32只BALB/c雄性小鼠,其中8只作为阴性对照组,其余24只小鼠全部感染旋毛虫囊包,囊包接种数为150±5个/鼠,建立旋毛虫病小鼠实验动物模型。囊包感染接种过程见参考文献[1]。(2)实验分组:将感染旋毛虫的24只小鼠,随机分为三个组:Wortmannilactone F治疗组、Wortmannilactone F与G31P联合治疗组(简称联合治疗组)、阳性模型组(Model)。未感染的8只作为阴性对照组(Control)。四组小鼠饲养条件相同。2.实验方法:在小鼠实验感染旋毛虫囊包10天后,Wortmannilactone F和G31P联合治疗组小鼠皮下注射G31P,500μg/kg,隔日注射1次,连续7次。同时给小鼠口服Wortmannilactone F,200mg/kg,每日1次,连续灌胃3天;Wortmannilactone F治疗组小鼠在感染旋毛虫10天后,口服Wortmannilactone F,200mg/kg,每日1次,连续灌胃3天,同时隔日皮下注射等量的生理盐水。阳性模型组和阴性对照组小鼠,用等量生理盐水代替Wortmannilactone F和G31P。停药后1天,将所有实验小鼠麻醉处死,无菌解剖小鼠,收集膈肌组织等进行药效的实验观察。3.实验观察指标:(1)抑杀旋毛虫幼虫观察:收集4组小鼠膈肌组织采用HE染色法,计数膈肌组织内旋毛虫囊包量并比较囊包大小,目的是观察Wortmannilactone F和G31P对旋毛虫囊包的联合抑杀疗效。(2)旋毛虫囊包形态学观察:对4组小鼠膈肌组织采用HE染色法,在光镜下观察药物对膈肌组织内旋毛虫囊包形态的影响、宿主在囊包外周产生的免疫病理反应,以及通过电子显微镜观察旋毛虫囊包形成的完整性和其内幼虫虫体发育等情况。(3)采用免疫组织化学染色检测FSP1的表达,以观察G31P对膈肌组织囊包外周成纤维细胞积聚数量和旋毛虫囊包形成完整性的影响。(4)采用Masson染色法检测旋毛虫囊包纤维化的程度,以观察G31P对膈肌组织囊包外周胶原纤维含量的影响,进而探讨药物治疗后对旋毛虫囊包形成完整性的影响。(5)应用免疫荧光染色检测各组小鼠膈肌组织中v WF因子的表达量,探讨在旋毛虫病鼠膈肌组织中囊包形成过程中,联合用药对其周围新生血管形成的影响。结果与讨论:1、联合用药对旋毛虫幼虫的抑杀效果观察(1)Wortmannilactone F治疗组和联合治疗组小鼠经药物作用后,在镜下计数膈肌组织中虫体囊包数量分别为11.5±2.1、6.4±1.2,减虫率分别达到58.0%、76.6%,进行统计学比较具有显著性差异(P旋毛虫囊包内幼虫虫体形态,发现虫体完整,表皮光滑,完好地盘曲在宿主的营养细胞内,其外可见纤维化囊包。在电镜下观察,阳性模型组肌幼虫角质层光滑平坦,每隔等长距离有大小相等的横纹。而Wortmannilactone F治疗组和联合用药治疗组旋毛虫囊包内幼虫的虫体形态结构发生明显的变化,光镜下可见虫体小且僵直,似发育不良;在电镜下,可见肌幼虫角质层凹凸不平,出现不同程度的波折起伏,横纹大小不一,间距不

关键词：旋毛虫病 Wortmannilatone F G31P 杀虫纤维化

云南地区旋毛虫病致死9例的分布及病理学特点分析

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法医学杂志 2013年第1期29卷 28-30页

作者：刘翔杨利萍白桦赵以诚昆明法医院司法鉴定中心云南昆明650034

目的分析云南地区旋毛虫病致死案例的法医病理学特点,并总结和分析旋毛虫病在云南地区的人群分布特点。方法收集近年来昆明法医院司法鉴定中心受理的旋毛虫病致死法医病理学案件9例,对旋毛虫病病理学及流行病学特点进行分析。结果 9例... 详细信息

目的分析云南地区旋毛虫病致死案例的法医病理学特点,并总结和分析旋毛虫病在云南地区的人群分布特点。方法收集近年来昆明法医院司法鉴定中心受理的旋毛虫病致死法医病理学案件9例,对旋毛虫病病理学及流行病学特点进行分析。结果 9例旋毛虫病致死案例均系心肌炎并发心力衰竭死亡,其中1例合并脑炎,3例合并肺炎。人群分布主要为白族、傣族人群。地域分布多集中在大理、德宏、临沧、西双版纳等地。流行时间多集中在冬春季。结论旋毛虫病的发病原因与生食猪肉的习惯密切相关,其死亡案例中肌肉系统的病理改变可作为诊断的主要依据。

关键词：法医病理学流行病学旋毛虫病云南

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断早期旋毛虫病的研究

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中国人兽共患病学报 2016年第12期32卷 1058-1063页

作者：文慧胡晨曦王李昂王涵刘春颖宋艳艳刘若丹姜鹏王中全崔晶郑州大学医学院寄生虫学教研室郑州450052

目的评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值。方法应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6~11d的小鼠血清及19d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他... 详细信息

目的评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值。方法应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6~11d的小鼠血清及19d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他寄生虫病人血清的检测结果进行比较。结果 Western blot分析显示,肌幼虫ES蛋白中的2条蛋白带(41.5、55kDa)可被旋毛虫感染后7~11d的小鼠血清识别,6条蛋白带(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)能被早期和晚期旋毛虫病人血清识别,阳性反应率均为100%(15/15);这6条蛋白带与裂头蚴病人和健康人血清无交叉反应,但与其他寄生虫病(血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明显的交叉反应(19.12%~38.23%)。结论旋毛虫肌幼虫ES抗原中的41.5kDa^65.2kDa蛋白带可与旋毛虫感染早期血清反应,但与其他蠕虫病患者有明显的交叉反应。

关键词：旋毛虫病旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原 Western blot 早期诊断