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当归芍药散“健脾化浊”方剂要素对动脉粥样硬化小鼠血脂水平的影响

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当归芍药散“健脾化浊”方剂要素对动脉粥样硬化小鼠血脂水平的影...

作者：宗毓麟北京中医药大学

学位级别：硕士

目的和意义:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病(Arteriosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)、脑梗死等疾病的主要病因。AS的发病机制尚未完全明确,目前认为AS以脂质代谢障碍为病变基础。近年来,AS已成... 详细信息

目的和意义:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病(Arteriosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)、脑梗死等疾病的主要病因。AS的发病机制尚未完全明确,目前认为AS以脂质代谢障碍为病变基础。近年来,AS已成为全球范围内死亡和残疾的主要原因。从《黄帝内经》到当代中医临床,中医学对AS的相关认识日益深化,临床治疗手段不断丰富。总体而言,可将AS的病机分虚、实两端,虚以脾、肾虚损为要;实以痰浊、瘀血为主。临床以扶正祛邪为原则,多采用健脾、益肾、化痰、泄浊、散瘀等方法,标本同治,获得佳效。当归芍药散出自《金匮要略》,具有柔肝健脾,活血化浊的功效,在心血管疾病的应用中已初步证实当归芍药散具有良好的干预作用,但相关研究仍有待深入。“证候要素”是临床组方用药的明确靶点,方剂中与“证候要素”相对应部分为“方剂要素”。本研究应用由本团队创新提出的“方-证要素对应”组方原则提取了 AS中重要“证候要素”——“脾虚痰浊内生”,对应提取了当归芍药散中“健脾化浊”方剂要素(茯苓,白术,泽泻),旨在初步探索当归芍药散中“健脾化浊”方剂要素对AS小鼠血脂水平的影响,以期拓展方剂研究思路,并为当归芍药散中“健脾化浊”方剂要素的临床应用提供重要的实验依据。方法:理论探讨梳理了各家对《金匮要略》中当归芍药散方证的注解与医理阐释;采用数据挖掘的方法初步探索了临床中健脾化浊法的用药规律与特色;应用网络药理学方法及分子对接技术探索了当归芍药散中“健脾化浊”方剂要素干预AS的作用机制;实验研究通过高脂饮食喂养的方法制备了 ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠AS模型,观察了当归芍药散中“健脾化浊”方剂要素对AS小鼠血脂水平等的影响。具体如下:(1)模型制备:采用高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠的方法制备AS模型。(2)分组与给药:将ApoE-/-小鼠随机分为模型组、当归芍药散组、健脾化浊组,每组12只;C57BL/6J小鼠作为正常组,每组12只。造模成功后,当归芍药散组和健脾化浊组给予相应剂量中药灌胃,每日1次,连续16周;同时,正常组和模型组给予等体积的常温蒸馏水灌胃,每日1次,连续16周。(3)动物取材与指标检测:于实验第16周,小鼠禁食不禁水12 h,采用2%戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠,进行眼球取血和主动脉分离。各组中6只小鼠血液样本进行血脂检测;打开小鼠腹腔及胸腔,将小鼠固定后在解剖镜下暴露整个主动脉血管,取出并使用4%多聚甲醛固定。采用立式全自动生化仪检测小鼠血清中总胆固醇(Totalcholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL-C)含量;根据动脉硬化指数(Atherogenic index,AI)公式计算AI;使用ELISA试剂盒进行小鼠主动脉血管IL-6、IL-8、JNK水平检测,具体步骤参考试剂盒说明书进行;应用荧光定量PCR法检测小鼠主动脉血管中ALOX5、PPARA、PPARG的mRNA表达水平。结果:数据挖掘结果表明“健脾化浊”法核心用药及配伍以方剂要素(茯苓、泽泻、白术)为主;网络药理学研究结果表明“健脾化浊”方剂要素可能通过调节脂质代谢和抗炎作用干预AS。实验研究结果如下:(1)血脂水平检测:与正常组比较,模型组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著上升(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散组和健脾化浊组TC、TG、LDL-C水平显著下降(P<0.01),HDL-C水平显著上升(P<0.01)。(2)AI:模型组小鼠AI显著升高(P<0.01);与模型组相比,当归芍药散组和健脾化浊组AI显著降低(P<0.01)。(3)肝湿重:模型组小鼠肝湿重显著增加(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散组和健脾化浊组肝湿重下降(P<0.05)。(4)主动脉血管IL-6、IL-8、JNK水平检测:模型组小鼠主动脉血管IL-6、IL-8、JNK水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,当归芍药散组和健脾化浊组主动脉血管IL-6、IL-8、JNK水平显著降低(P<0.01)。(5)主动脉血管ALOX5、PPARA、PPARG的mRNA表达水平检测结果:模型组小鼠主动脉血管ALOX5的mRNA的表达水平升高(P<0.05),PPARA、PPARG的mRNA的表达水平降低(P<0.01;P<0.05);与模型组相比,当归芍药散组和健脾化浊组ALOX5的mRNA的表达水平降低(P<0.05),PPARA的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),PPARG的mRNA表达水

关键词：动脉粥样硬化当归芍药散方剂要素健脾化浊

大柴胡汤及其“方剂要素”对NAFLD模型大鼠“肠-肝轴”作用的相关分析

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世界中医药 2021年第3期16卷 430-436页

作者：王敏周璐孙燕陈琳吴梦瑶张鑫蕾张淑静高誉珊杨佳敏郑丰杰李宇航北京中医药大学中医学院北京100029

目的:对大柴胡汤及其“方剂要素”对NAFLD模型大鼠“肠-肝轴”作用机制进行相关分析,揭示大柴胡汤的配伍规律。方法:105只大鼠分为正常组、模型组、盐酸吡格列酮组、疏肝利胆组、健脾化痰组、通腑泄浊组、大柴胡汤组,按照方法造模及给药... 详细信息

目的:对大柴胡汤及其“方剂要素”对NAFLD模型大鼠“肠-肝轴”作用机制进行相关分析,揭示大柴胡汤的配伍规律。方法:105只大鼠分为正常组、模型组、盐酸吡格列酮组、疏肝利胆组、健脾化痰组、通腑泄浊组、大柴胡汤组,按照方法造模及给药,检测“肝轴”及“肠轴”相关指标,采用Critic法进行综合评价。结果:与正常组比较,模型组“肝轴”以及“肠轴”各个指标权重之和Z总1、Z总2差异均有统计学意义(P方剂要素对改善NAFLD模型大鼠肠道菌群优势显著,能提高NAFLD大鼠肠道菌群中拟杆菌属、萨特氏菌属、假丁酸弧菌属细菌和Akkermansia muciniphila等有益菌的相对丰度。结论:大柴胡汤中疏肝利胆方剂要素主要通过疏利肝胆作用显著调节肝脏脂质代谢以及肝脏免疫功能,即调节“肝轴”;大柴胡汤中健脾化痰方剂要素主要通过健运脾胃、化痰作用改善肠黏膜屏障功能,即调节“肠轴”;大柴胡汤中通腑泄浊方剂要素主要调节肠道菌群;大柴胡汤全方则可同时作用于“肝轴”和“肠轴”,对NAFLD模型大鼠起治疗作用。

关键词：非酒精性脂肪性肝病大柴胡汤方剂要素疏肝利胆健脾化痰通腑泄浊肠-肝轴 CRITIC法综合评价

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从方证相应与方-证要素对应谈经方临床应用

北京中医药大学学报 2015年第10期38卷 653-657页

作者：郑丰杰北京中医药大学基础医学院北京100029

方证相应是针对病机的选方原则,方剂要素与证候要素对应(简称方-证要素对应)是在方证相应基础上发展而成的应证组方原则,二者均是辨证论治精神指导下的处方原则。探讨方证相应与方-证要素对应的内涵,对提高临证处方的灵活性和规范性、... 详细信息

方证相应是针对病机的选方原则,方剂要素与证候要素对应(简称方-证要素对应)是在方证相应基础上发展而成的应证组方原则,二者均是辨证论治精神指导下的处方原则。探讨方证相应与方-证要素对应的内涵,对提高临证处方的灵活性和规范性、扩大经方现代临床应用、提高证候复杂的疾病的治疗效果,具有积极意义。

关键词：伤寒论经方方剂要素证候要素组方原则

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《伤寒论》“方—证要素对应”研究

《伤寒论》“方—证要素对应”研究

作者：刘艳红北京中医药大学

学位级别：硕士

辨证论治是中医理论的核心,是中医临床医学的灵魂,而证候和方剂则是贯穿于辨证论治过程中两个互相呼应的核心组成部分。证候是辨证的结果和论治的前提,是中医诊疗疾病的基础;方剂是辨证的目的和论治的结果,是中医诊疗疾病的手段,两者充... 详细信息

辨证论治是中医理论的核心,是中医临床医学的灵魂,而证候和方剂则是贯穿于辨证论治过程中两个互相呼应的核心组成部分。证候是辨证的结果和论治的前提,是中医诊疗疾病的基础;方剂是辨证的目的和论治的结果,是中医诊疗疾病的手段,两者充分体现了中医学理论的优势和特色。因此证候和方剂的研究一直是中医学的热点与重点,亦被认为是中医现代化研究的关键点。可喜的是近10年来,在中医证候的研究方面取得了明显的进展,特别是“证候要素”的提出,对中医辨证论治、理法方药的应用等均产生了深刻的影响。基于证候要素(证素)理论,我们课题组提出方剂要素(方素)的概念,并在“方证对应”的辨证论治原则基础上,将证候要素理论与方剂要素理论结合,提出“方一证要素对应”新的方剂组成原则。基于上述研究进展,本研究拟将方证要素理论引入到《伤寒论》方剂的研究中。《伤寒论》是一部将辨证论治融入理法方药之中的经典著作,书中载方112首,组合有法,配伍严谨,用药精简,变化灵活,效如桴鼓,久用不衰,被后世医家视为处方的典范,称为“经方之祖”。研究《伤寒论》方剂所蕴含的“方-证要素对应”关系以及加减化裁规律,能够启迪临床用方组方思路,提高临床辨证论治能力。本论文主要分为四部分,研究内容及结论如下：第一部分为综述部分,主要概述了证候要素以及方剂要素的研究现状,为本文的研究溯流探源。证候要素理论的综述主要将从证候要素理论的形成、证候要素的提取与挖掘方法、临床疾病证候要素研究三个方面展开。得出证候要素概念的提出是基于证候标准化、规范化研究的需求;证候要素研究方法的创新与更替,反映证候要素的研究正处于探索和发展中;证候要素理论应用于临床疾病的辩证论治中,降低了辨证的复杂性,提高了辨证的准确性、灵活性以及可操作性,使得论治更有针对性、方向性。因此将证候要素理论引入到辨证论治体系中,有助于我们更好地认识疾病的本质,把握证候内涵,进而提高辨证论治水平。方剂要素理论的概述主要从其来源、概念展开,并将其与方元、方根、组方要素、药群等多个基于不同理论的药物组合概念进行了比较,得出在证候要素理论基础上提出来的方剂要素,对于临证组方而言,更具有方向性和针对性。总之,基于证候要素理论,提出方剂要素的概念,进而产生“方-证要素对应”组方原则,是对中医方剂组方理论的思考与发展,值得进一步研究。第二部分主要分析了“证候要素”、“方剂要素”、“方-证要素对应”的基本内涵。认为证候要素是证候的病机单元以及诊断要素,将复杂的证候分解成相对简单清晰的证候要素,能够降低证候的维度,便于分析探讨证候的病机,有利于针对病机处方用药;而方剂要素则是针对证候要素提出的方剂单元,两者之间具有对应关系,因此方剂要素具有很强的靶向性,其出现形式可以是一味药,也可以是两味药或者几味药的药物组合,甚至可以以小方的形式出现,强调的是针对病机单元的治则、治法,是临床拆方、合方以及加减化裁的基本方剂单位;根据方剂要素与证候要素的对应关系来处方用药,即“方-证要素对应”组方原则,这一组方原则强调了方剂特定药物组成部分与其主治证候特定病机之间的相互作用,体现了“理法方药”之间的逻辑关系,使得组方用药更有针对性,能够启迪临床用方组方思路。第三部分基于“方-证要素对应”理论,分析了《伤寒论》112方的“方-证要素对应”关系。从《伤寒论》112方的方证要素解析中,发现《伤寒论》112方包含大量的重复出现的方剂要素,这些重复出现的方剂要素,强调的是针对同一病机单元的治则、治法,是《伤寒论》方剂的优良“组件”或者称“配件”,是《伤寒论》方剂灵活化裁的药物基础。第四部分基于“方-证要素对应”理论,以《伤寒论》白虎汤类方、承气汤类方、柴胡汤类方、四逆汤类方为例,探讨《伤寒论》类方衍化规律,得出其类方衍化规律为：针对基本病机设立基本方,进而随着病机之间的演变,衍化出以基本方为基础的类方,使方剂的治疗与具体病机相适应,形成以一方加减多变,变方顺应证候,加减遵循法因证设,方因法立,以法统方,证变法亦变的方药化裁规律。这不仅体现了仲景“观其脉证,知犯何逆,随证治之”的辨证论治原则,也体现了“方-证要素对应”组方原则。在上述研究的基础上,总结出临床用方组方思路：临证时,如能找到跟所治疾病主要病机完全相合的经方或者时方,即完整地使用该方;如找不到跟所治疾病主要病机完全相合的经方或者时方,但能找到基本相合的,则对该方剂进行加减化裁而使用,使得化裁后的方剂更具有针对性;如所治疾病主要病机为两个或者多个病机相合,单方难以胜任,则可以选择相应的两个或者数个方剂进行合方应用或者合方加减应用。此三种即用方思路,遵循的是方证对应选方原则,即“有是证,用是方”。如找不到跟所治疾病主要病机相合的方剂,此时医者可将复杂的病机进行降维,·简化成数量相对局限、内容相对清晰的“证候要素”,提取经方或者时方相应的

关键词：证候要素方剂要素方-证要素对应《伤寒论》类方研究

当归芍药散及其拆方对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠血小板聚集率及内皮细胞粘附分子的影响

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环球中医药 2023年第6期16卷 1067-1073页

作者：鹿艺星孙月蒙孙燕宗毓麟闫淑鑫骈雪高誉珊李宇航北京中医药大学中医学院 100029

目的探讨当归芍药散及其拆方对动脉粥样硬化载脂蛋白基因E敲除(ApoE^(-/-))小鼠血小板聚集率和内皮细胞粘附分子的影响。方法72只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饮食饲养,随机分为模型组、当归芍药散组、柔肝缓急组、健脾化浊组、活血散瘀组和... 详细信息

目的探讨当归芍药散及其拆方对动脉粥样硬化载脂蛋白基因E敲除(ApoE^(-/-))小鼠血小板聚集率和内皮细胞粘附分子的影响。方法72只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饮食饲养,随机分为模型组、当归芍药散组、柔肝缓急组、健脾化浊组、活血散瘀组和阿托伐他汀钙组,每组12只。12只普通C57BL/6J小鼠作为空白对照组,给予普通饮食饲养。各组小鼠持续灌胃干预16周后,剥离小鼠主动脉,使用改良油红O对主动脉进行染色,使用Image-pro plus 6.0图像处理软件计算小鼠主动脉斑块面积百分比;通过比浊法检测血小板聚集率,并给予活血散瘀疗效评价;免疫组化法检测小鼠主动脉血管内皮细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)表达。结果(1)与正常组相比,模型组小鼠油红O染色斑块面积占比、血小板聚集率以及主动脉血管ICAM-1、VCAM-1表达显著升高,差异均有统计学意义(P方剂要素在降低血小板聚集率和调节粘附因子方面疗效显著。

关键词：动脉粥样硬化当归芍药散方剂要素血小板聚集率内皮细胞粘附因子

当归芍药散及其拆方对动脉粥样硬化小鼠血脂及炎症介质的影响

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世界中医药 2023年第9期18卷 1230-1235页

作者：宗毓麟孙月蒙孙燕周璐鹿艺星李昱达张淑静高誉珊郑丰杰李宇航北京中医药大学中医学院北京100029

目的:探讨当归芍药散及其拆方对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)模型血脂及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、c-Jun氨基端激酶(JNK)水平的影响。方法:72只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、当归芍... 详细信息

目的:探讨当归芍药散及其拆方对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)模型血脂及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、c-Jun氨基端激酶(JNK)水平的影响。方法:72只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、当归芍药散组、健脾化浊组、阿托伐他汀钙组、活血散瘀组和柔肝缓急组,每组12只,高脂饮食诱导建立AS模型。12只C57BL/6J小鼠作为正常组普通饮食饲养。适应性饲养1周后各给药组小鼠给予中药灌胃16周。全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附试验法测定小鼠主动脉IL-6、IL-8、JNK表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高(均P方剂要素较其他拆方组效果更为明显。

关键词：动脉粥样硬化载脂蛋白E敲除小鼠当归芍药散血脂炎症介质方剂要素健脾化浊

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大柴胡汤及其拆方对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型“肝-肠轴”影响的形态学

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世界中医药 2020年第21期15卷 3260-3265页

作者：高誉珊张鑫蕾吴梦瑶周璐张淑静陈琳王敏孙燕郑丰杰李宇航北京中医药大学北京100029

目的:观察大柴胡汤及其拆方(方剂要素)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型“肝-肠轴”肝、肠形态学的影响。方法:采用随机数字表法将大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸吡格列酮组、大柴胡汤组、疏肝利胆组、健脾化痰组、通腑泄浊组。采... 详细信息

目的:观察大柴胡汤及其拆方(方剂要素)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型“肝-肠轴”肝、肠形态学的影响。方法:采用随机数字表法将大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸吡格列酮组、大柴胡汤组、疏肝利胆组、健脾化痰组、通腑泄浊组。采用高脂高糖饲料喂养16周建立NAFLD模型,并于第13~16周分别给予大柴胡汤及拆方。造模结束后,取小肠组织,电镜观察细胞间紧密连接情况,采用HE染色、油红O染色、Masson染色观察各组大鼠肝组织。结果:模型组肠细胞间隙明显增大,紧密连接程度降低,各给药组细胞间隙均有不同程度地减小,以全方组最为显著;正常组大鼠肝细胞结构正常,模型组大鼠部分肝细胞呈气球样变性,见不同程度脂滴形成,各给药组较模型组脂滴情况均有不同程度减轻。结论:大柴胡汤及其拆方均能不同程度地改善NAFLD模型大鼠肝细胞脂肪变及肠细胞紧密连接情况,并以全方共用效果尤著,疏肝利胆、健脾化痰、通腑泄浊等治法联合运用对改善NAFLD具有较好的疗效。

关键词：大柴胡汤方剂要素拆方研究非酒精性脂肪性肝病肝-肠轴形态学电镜油红O染色