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新生期母婴分离对幼鼠内脏高敏感性及室旁核和前皮质扣带回Fos蛋白表达影响

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新生期母婴分离对幼鼠内脏高敏感性及室旁核和前皮质扣带回Fos蛋...

作者：吴国媛福建医科大学

学位级别：硕士

目的:采用行为学和电生理学评价方法,观察不同新生期母婴分离(NMS)时间对幼鼠内脏痛觉敏感性影响,探讨采用NMS建立幼年动物内脏高敏感模型所需的NMS适宜时间,对进一步认识NMS远期危害,指导临床防治具有重要指导意义。方法: 50只SD新生... 详细信息

目的:采用行为学和电生理学评价方法,观察不同新生期母婴分离(NMS)时间对幼鼠内脏痛觉敏感性影响,探讨采用NMS建立幼年动物内脏高敏感模型所需的NMS适宜时间,对进一步认识NMS远期危害,指导临床防治具有重要指导意义。方法: 50只SD新生大鼠随机分成NMS39、NMS60、NMS78、NMS120组和对照组(C组),每组10只;NMS39组出生后第24d每天与母鼠分离3h(8:00-11:00am),连续13d,NMS60组出生后第21d每天与母鼠分离3h(8:00-11:00am),连续20d,NMS78组生后第24d(每天上午、下午分别与母鼠分离3h(8:00-11:00am;14:00-17:00pm),连续13d,NMS120组生后21d每天上午、下午分别与母鼠分离3h(8:00-11:00am;14:00-17:00pm),连续20d,对照组不予任何处理,与母鼠同笼。常规饲养到6周龄,通过不同压力结直肠扩张(CRD)刺激后的腹壁撤退反射评分(AWR)、痛阈测定和腹外斜肌放电波幅值测量进行幼鼠肠道痛觉敏感性评价,测定幼鼠排便粪点数和玻璃小球排出时间评估幼鼠结肠动力,处死幼鼠,留取降结肠进行病理学检查。采用SPSS11.0软件进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准。结果:随CRD压力增加,5组幼鼠AWR评分和腹外斜肌放电波幅值均逐渐增加;当CRD为20mmHg、40mmHg、60mmHg时,NMS39组、NMS60组、NMS78组、NMS120组幼鼠AWR评分明显高于C组,CRD为80mmHg时,5组幼鼠AWR评分差异无显著意义;当CRD为15mmHg、30mmHg、45 mmHg、60mmHg时,NMS39组、NMS60组、NMS78组、NMS120组幼鼠腹外斜肌放电波幅值明显高于C组;CRD为75mmHg时,5组幼鼠腹外斜肌放电波幅值差异无显著意义;NMS39组、NMS60组、NMS78组、NMS120组及C组幼鼠痛阈值分别为15.83±5.05mmHg、16.50±8.40mmHg、13.50±2.88 mmHg、16.00±5.28 mmHg、33.83±4.31mmHg;NMS39组、NMS60组、NMS78组、NMS120组幼鼠间AWR评分、腹外斜肌放电波幅值及痛阈差异均无显著性意义;5组幼鼠玻璃小球排出时间及粪点数差异无统计学意义;各组降结肠均未见明显病理组织损伤。结论:长时间不同新生期母婴分离均能造成大鼠痛阈下降,出现内脏高敏感性;并且这种高敏感性能持续到幼年期,但幼鼠没有肠道动力改变,也没有排便习惯改变及大便性状改变,同时没有明显的组织病理学改变。采用新生大鼠在出生后第24d给予每天母婴分离3h可建立一种理想的幼鼠内脏痛高敏感模型。目的:采用新生期母婴分离(NMS)建立幼鼠内脏高敏感性模型,观察内脏高敏感性模型幼鼠下丘脑室旁核(PVN)及前皮质扣带回(ACC)内Fos蛋白表达变化,探讨其在参与幼鼠内脏痛高敏感形成的机制,为临床上防治NMS所引起的危害及疾病提供理论依据。方法:32只SD新生大鼠按析因设计分成4组,每组8只。A1B1组为NMS组并在6周龄时接受CRD,A1B2组为NMS组,6周龄未给予CRD,A2B1组未给予NMS并在6周龄接受CRD,A2B2组未给予NMS,6周龄未给予CRD。A1B1、A2B1组幼鼠CRD接受刺激后2h和A1B2、A2B2组幼鼠留取PVN和ACC,应用免疫组织化学染色及计算机图像分析系统进行PVN和ACC内Fos蛋白免疫阳性(FLI)细胞数半定量分析。采用SPSS11.0软件包进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准。结果:A1B1组、A1B2组、A2B1组及A2B2组幼鼠PVN内FLI细胞数分别为50.61±11.68、31.25±7.28、43.67±16.03和18.13±3.41,ACC内FLI细胞数分别为53.48±15.45、38.42±11.67、35.02±9.80和20.13±2.08。NMS和幼鼠6周龄时CRD均可使幼鼠PVN和ACC内FLI细胞数显著升高,差别均有统计学意义;NMS引起幼鼠PVN和ACC内FLI细胞数增加的主效应分别为10.03个、18.38个,幼鼠6周龄时CRD引起幼鼠PVN和ACC内FLI细胞数增加的主效应分别为22.45个、14.98个;NMS和CRD对PVN和ACC内FLI细胞数影响无交互作用。结论:新生期持续NMS可导致幼鼠中枢神经系统发育异常和敏化,接受伤害性CRD刺激后能显著引起PVN和ACC内神经元Fos蛋白高表达,出现内脏痛觉高敏感性;PVN和ACC是幼鼠大脑中枢内脏伤害性刺激信号传导处理过程和感知觉的重要区域,其激活和致敏在NMS诱导的幼鼠内脏痛高敏性中起到至关重要作用。

关键词：新生期母婴分离内脏痛觉敏化模型评价室旁核前皮质扣带回 Fos表达

SP600125对新生期母婴分离后成年大鼠行为改变的保护作用及机制

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医学信息（医学与计算机应用） 2014年第4期18卷 96-96页

作者：党嘉文董文斌郭琳康兰泸州医学院附属医院新生儿科四川泸州646000

目的:探讨JNK特异性抑制剂SP600125对新生期母婴分离后成年大鼠行为改变的保护作用及机制。方法复制新生期母婴分离动物模型。随机分三组:对照组、母婴分离组与母婴分离+SP600125干预组。在2个月时,用三桶互通脑功能仪测定成年后大鼠行... 详细信息

目的:探讨JNK特异性抑制剂SP600125对新生期母婴分离后成年大鼠行为改变的保护作用及机制。方法复制新生期母婴分离动物模型。随机分三组:对照组、母婴分离组与母婴分离+SP600125干预组。在2个月时,用三桶互通脑功能仪测定成年后大鼠行为的改变,并采用免疫组化法检测 caspase-3在成年大鼠脑组织海马中的表达。结果 SP600125组成年后大鼠自发活动的总路程与平均速度较母婴分离组有所增加,但尚未恢复到对照组水平;海马组织caspase-3表达量母婴分离组较对照组明显增加(P母婴分离组明显减少(P新生期母婴分离后成年大鼠的认知障碍。

关键词：新生期母婴分离 C-Jun蛋白氨基末端激酶半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

参麦注射液对母婴分离新生鼠脑损伤的保护作用

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中国临床药理学杂志 2017年第4期33卷 335-337,342页

作者：党嘉文孙鸿燕董文斌李清平冯志强雷小平西南医科大学附属医院新生儿科四川泸州646000 西南医科大学护理学院卫校四川泸州646000 西南医科大学生理教研室四川泸州646000

目的研究参麦注射液对母婴分离新生鼠脑损伤的保护作用及机制。方法用新生期母婴分离动物模型(出生后第2~21天、与母鼠每天分离3 h)。按照体重将动物随机分为3组(n=12):对照组、模型组与实验组。在2个月时,用三桶互通脑功能仪测定成年... 详细信息

目的研究参麦注射液对母婴分离新生鼠脑损伤的保护作用及机制。方法用新生期母婴分离动物模型(出生后第2~21天、与母鼠每天分离3 h)。按照体重将动物随机分为3组(n=12):对照组、模型组与实验组。在2个月时,用三桶互通脑功能仪测定成年后大鼠行为的改变;用免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白在成年大鼠脑组织海马中的表达情况。结果成年后,实验组与模型组的大鼠自发活动的总路程分别为(15.17±5.32),(12.32±2.74)m,2组的平均速度分别为(0.09±0.03),(0.07±0.04)m·s^(-1),实验组较模型组自发活动的总路程有所增加、平均速度有所加快,差异均有统计学意义(均P期母婴分离所致新生鼠的神经损伤,从而改善远期行为发育。

关键词：新生期母婴分离三桶互通脑功能仪参麦注射液 Bcl-2蛋白

生命早期母婴分离对大鼠成年后催产素水平及情绪、行为障碍的影响

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中国儿童保健杂志 2020年第5期28卷 533-537,542页

作者：赖茜吴小凤杨亭陈洁李廷玉重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童营养与健康重庆市重点实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆)儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014

目的探讨大鼠生命早期母婴分离对成年期异常行为、情绪问题及体内催产素及相关分子表达的影响。方法将新生SD大鼠随机分为对照组和新生期母婴分离组(NMS组),NMS组新生鼠生后第1~14天每天与母鼠分离2 h,6周龄进行行为学测试,包括旷场测... 详细信息

目的探讨大鼠生命早期母婴分离对成年期异常行为、情绪问题及体内催产素及相关分子表达的影响。方法将新生SD大鼠随机分为对照组和新生期母婴分离组(NMS组),NMS组新生鼠生后第1~14天每天与母鼠分离2 h,6周龄进行行为学测试,包括旷场测试、三厢社交测试、高架十字迷宫和强迫游泳测试。Western blot方法检测大鼠下丘脑组织CD38蛋白表达水平,ELISA检测大鼠血清OXT水平。结果与对照组相比,NMS大鼠成年后自身梳理时间[(29.19±3.55)s,(55.90±4.03)s,P期缩短[(59.02±8.64)s,(33.97±5.87)s,P期母婴分离可能导致大鼠成年后出现孤独症样行为,焦虑、抑郁样行为。2)母婴分离可能通过降低大鼠下丘脑组织中CD38蛋白表达,进一步引起OXT释放减少,导致相关行为异常。

关键词：新生期母婴分离行为学催产素 CD38

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新生鼠母婴分离对成年后哮喘气道炎症的影响

新生鼠母婴分离对成年后哮喘气道炎症的影响

作者：陆李珺东南大学

学位级别：硕士

[目的]本实验通过建立生命早期应激模型(新生期母婴分离,NMS)及哮喘双模型,探讨新生期母婴分离对成年后哮喘气道炎症的影响及其机制,为临床更好理解生命早期应激事件与哮喘的关系奠定实验基础;为提倡母婴同室、家庭整体护理治疗手段提... 详细信息

[目的]本实验通过建立生命早期应激模型(新生期母婴分离,NMS)及哮喘双模型,探讨新生期母婴分离对成年后哮喘气道炎症的影响及其机制,为临床更好理解生命早期应激事件与哮喘的关系奠定实验基础;为提倡母婴同室、家庭整体护理治疗手段提供可靠依据;也为后期预防应激加重哮喘的治疗提供新的策略。[方法]建立新生期母婴分离模型,以Balb/c新生雄鼠为研究对象,随机分成NMS组及非NMS组。仔鼠出生当天作为PNDO,NMS组在PND2～PND14,每天同时间段分离新生鼠及母鼠3h,而非NMS组不做分离处理。分别于PND21、PND28、PND35、PND42(即断奶当天、一周、两周、三周)收集粪便,应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术检测肠道菌群图谱,并采用高效液相色谱法获取肠道菌群代谢产物短链脂肪酸(SCFAs)的含量。在PND43采用鸡卵清蛋白(OVA)致敏法建立哮喘模型。将非NMS组随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组),NMS组建立哮喘模型成为母婴分离哮喘组(C组)和短链脂肪酸喂养母婴分离哮喘组(D组)。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数各组炎症细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数目;HE染色观察雄鼠肺组织病理变化;同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雄鼠肺组织中细胞因子(IL-13、IL-25、IL-33)水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定肺组织中Occludin和E-cadherin蛋白的表达。[结果]1.新生鼠母婴分离后肠道菌群及SCFAs含量的变化:发现断奶后一周、两周、三周NMS组雄鼠肠道菌群DGGE图谱的条带数S’、多样性指数H’和优势度指数D’均低于非NMS组(P新生鼠母婴分离后哮喘气道炎症的变化:C组雄鼠BALF中炎症细胞总数及EOS数目高于B组及A组,D组较C组有所减少(P新生鼠母婴分离引起哮喘气道炎症变化可能存在的机制:C组雄鼠肺组织HE染色可见支气管上皮杯状细胞轻度增多,管腔内有少量黏性分泌物;而B组及D组上述病理改变减轻,A组未见明显改变。Western blot显示:B、C、D三组肺组织Occludin和E-cadherin蛋白的表达较A组明显下降,其中C组蛋白表达水平低于B组,而D组高于C组,且差异具有统计学意义。[结论]新生期母婴分离可影响子代肠道菌群的多样性并能降低肠道中丁酸的含量。新生期母婴分离的雄鼠也可出现成年后哮喘气道炎症加重的现象,引起这一现象的机制可能是:生命早期肠道菌群多样性的改变引起了短链脂肪酸含量的减少,而短链脂肪酸含量的减少进一步破坏了气道上皮屏障,最终加重哮喘。

关键词：生命早期应激新生期母婴分离短链脂肪酸哮喘

母婴分离大鼠脑一肠轴内P物质及其NK1受体的表达

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浙江临床医学 2016年第2期18卷 264-266页

作者：滕卫军丁明星方远书方马荣浙江大学金华医院内镜中心 321000 金华职业技术学院医学院 321007 浙江省金华市实验动物中心 321000 浙江大学神经科学研究所 310058

目的研究P物质及其受体在新生期母婴分离大鼠模型脑-肠轴上的表达。方法将新生期Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为两组：母婴分离组：在出生后第2~21天，使新生大鼠与哺乳期母鼠分离3h／d。对照组：在出生后第2~21天，不给予任何处理。... 详细信息

目的研究P物质及其受体在新生期母婴分离大鼠模型脑-肠轴上的表达。方法将新生期Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为两组：母婴分离组：在出生后第2~21天，使新生大鼠与哺乳期母鼠分离3h／d。对照组：在出生后第2~21天，不给予任何处理。成年后（出生后60d）给予结直肠球囊扩张（CRD），取远端结肠、腰骶段脊髓和中脑进行P物质和NKl受体免疫组化检测并定量分析。结果母婴分离组大鼠和对照组比较，结肠肌层P物质阳性面积百分数、结肠NKI受体阳性肌间神经丛数目、脊髓背角P物质阳性面积、脊髓背角NK1阳性分布积分、中脑导水管周围灰质（PAG）和中缝核（DR）内P物质阳性面积、中脑PAG和DR内NK1阳性分布积分差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论新生期母婴分离对P物质和NK1受体表达的影响不明显，P物质和NK1受体在母婴分离大鼠模型内脏感觉过敏发生机制中的作用可能不大。

关键词：内脏感觉过敏新生期母婴分离 P物质 NK1受体

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新生期母子分离对大鼠2型糖尿病进程的影响

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2017年第1期38卷 69-74页

作者：赵莉覃媛蔡轶顾少菊卞兆祥张曼广州医科大学药学院蛇毒与生物毒素研究所广东广州511436 香港浸会大学中医药学院香港特别行政区999077

目的:明确新生期母婴分离是否改变成年期糖代谢及增加高脂饮食导致2型糖尿病的风险.方法:建立大鼠NMS模型,正常(NH)大鼠和NMS大鼠成年后高脂饮食干预2个月,检测大鼠体重、口服葡萄糖耐量和血压.结果:NMS大鼠成年后体重与NH大鼠体重无明... 详细信息

目的:明确新生期母婴分离是否改变成年期糖代谢及增加高脂饮食导致2型糖尿病的风险.方法:建立大鼠NMS模型,正常(NH)大鼠和NMS大鼠成年后高脂饮食干预2个月,检测大鼠体重、口服葡萄糖耐量和血压.结果:NMS大鼠成年后体重与NH大鼠体重无明显差别,但随着鼠龄的增长,NMS大鼠体重较NH大鼠体重增加;成年后大鼠经高脂饮食干预1个月或2个月,高脂饮食组NH和NMS大鼠分别较正常饮食组NH大鼠和NMS组体重明显增加;成年后NMS大鼠空腹血糖较NH大鼠低,但NMS大鼠口服葡萄糖后30 min的血糖值较NH大鼠高;NMS正常饮食组、NH高脂饮食组和NMS高脂饮食组口服葡萄糖后60、90、120 min的血糖值均比NH正常饮食组高;NMS高脂饮食组口服葡萄糖后90、120 min的血糖值均比NMS正常饮食组高;各组大鼠血压均无明显差异.结论:NMS可能导致大鼠糖耐量减低,体内糖代谢紊乱,可能增加发生2型糖尿病的敏感性.

关键词：新生期母婴分离糖耐量受损高脂饮食

内脏痛高敏感幼鼠的学习记忆能力变化和脊髓背角、海马CA1区脑源性神经营养因子表达变化及意义

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内脏痛高敏感幼鼠的学习记忆能力变化和脊髓背角、海马CA1区脑源...

作者：许淳福建医科大学

学位级别：硕士

目的:采用新生期母婴分离建立幼鼠内脏痛高敏感模型,探讨脊髓背角脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和幼鼠内脏痛敏感性增高的关系。方法:32只新生SD大鼠按2×2析因设计随机分成4组,每组8只。分别为M1C1组、M1C0组、M0C1组、M0C0组。M1C1... 详细信息

目的:采用新生期母婴分离建立幼鼠内脏痛高敏感模型,探讨脊髓背角脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和幼鼠内脏痛敏感性增高的关系。方法:32只新生SD大鼠按2×2析因设计随机分成4组,每组8只。分别为M1C1组、M1C0组、M0C1组、M0C0组。M1C1组:给予新生期母婴分离(NMS)建立幼鼠内脏痛高敏感模型,并在50日龄时接受结直肠扩张(CRD)刺激;M1C0组:同样给予NMS建立幼鼠内脏痛高敏感模型,但在50日龄时不接受CRD刺激;M0C1组:不给予NMS,但在50日龄时接受CRD刺激;M0C0组:既不给予NMS,50日龄时也不接受CRD刺激。M1C1组、M0C1组在接受CRD刺激后次日和M1C0组、M0C0组幼鼠一起处死,留取L62脊髓,采用SABC免疫组织化学方法检测各组幼鼠脊髓背角BDNF表达情况。采用SPSS 18.0软件包进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准结果:随着CRD压力的增加,腹外斜肌放电幅值增加;在CRD为15mm Hg、30mm Hg、45mm Hg低扩张压刺激下,M1C1组腹外斜肌放电幅值显著高于M0C1组,差异有统计学意义,当CRD为60mm Hg、75mm Hg高扩张压刺激时,两组幼鼠腹外斜肌放电幅值差异无统计学意义。M1C1组、M0C1组、M1C0组及M0C0组幼鼠脊髓背角BDNF阳性细胞数百分比(IHS值)分别为32.25%(5.79)、31.18%(5.21)、32.25%(5.64)、24.50%(4.64),析因方差分析显示:新生期母婴分离可以导致幼鼠脊髓背角BDNF阳性细胞数百分比(IHS值)明显增加,单次CRD不能影响幼鼠脊髓背角BDNF阳性细胞数百分比(IHS值)的表达,新生期MS和单次CRD刺激二者不存在交互作用。结论:新生期MS可建立幼鼠内脏痛高敏感模型,其原因可能与脊髓背角BDNF过度表达相关。目的:采用新生期母婴分离建立幼鼠内脏痛高敏感模型,探讨内脏痛敏感性增高幼鼠学习记忆能力和海马CA1区BDNF的表达变化。方法:32只新生SD大鼠随机分成两组,每组16只,分别为M1组和M0组。M1组给予新生期母婴分离(NMS)建立幼鼠内脏痛高敏感模型,M0组不给予NMS。在幼鼠35日龄时,两组同时接受Morris水迷宫检测。待幼鼠50日龄时,再根据是否接受结直肠扩张(CRD)刺激将SD大鼠分成4组,每组8只。分别为M1C1组、M1C0组、M0C1组、M0C0组。M1C1组:给予NMS建立幼鼠内脏痛高敏感模型,并在50日龄时接受结直肠扩张(CRD)刺激;M1C0组:同样给予NMS建立幼鼠内脏痛高敏感模型,但在50日龄时不予CRD刺激;M0C1组:不予NMS,在50日龄时接受CRD刺激;M0C0组:不予NMS,50日龄时不予CRD刺激。M1C1组、M0C1组在接受CRD刺激后次日和M1C0组、M0C0组幼鼠一起处死,留取海马,采用SABC免疫组织化学检测各组幼鼠海马CA1区BDNF表达情况。结果:随着Morris水迷宫训练次数的增加,定位航行试验的潜伏期和总路程明显减少,同一日期模型组幼鼠和对照组相比,潜伏期及总游泳路程差别无统计学意义(P>0.05);空间探索实验中,与对照组相比,模型组幼鼠“原平台象限游泳路程/总路程”和“原平台穿越时间/总时间”和“穿越平台次数”明显较少,分别为:2.29、25.60%、25.60%,3.53、29.30%、30.14,两组差别具有统计学意义(P新生期MS建立的内脏痛高敏感幼鼠海马CA1区BDNF阳性细胞数百分比和阳性细胞IHS值明显下降。结论:新生期母婴分离在导致幼鼠内脏痛敏感性增高的同时,出现海马依赖性的学习记忆能力下降,表现为Morris水迷宫实验成绩下降和海马BDFN表达降低。

关键词：内脏高敏脊髓背角脑源性神经营养因子幼鼠新生期母婴分离海马CA1区 Morris水迷宫

肠易激综合征早期生活事件模型下的大鼠结肠肠神经可塑性研究

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解剖学研究 2013年第2期35卷 120-125页

作者：赵敏郭友逢张萌李智中山大学附属第一医院病理科广东广州510080

目的从神经可塑性角度探讨肠易激综合征的可能发病机制、临床特征及治疗方法。方法雄性SD大鼠出生后连续13 d每天分离3 h。腹壁撤退反射实验用来检测内脏痛觉过敏。肠神经系统结构可塑性可以通过铺片技术和免疫荧光技术,比较近端结肠神... 详细信息

目的从神经可塑性角度探讨肠易激综合征的可能发病机制、临床特征及治疗方法。方法雄性SD大鼠出生后连续13 d每天分离3 h。腹壁撤退反射实验用来检测内脏痛觉过敏。肠神经系统结构可塑性可以通过铺片技术和免疫荧光技术,比较近端结肠神经节(HuD阳性细胞)的大小和数目以及胶质细胞(GFAP)的变化来检测。检测近端结肠多组肌间神经丛和黏膜下神经丛肠神经递质类型(ChAT-、VIP-、nNOS-、calbindin-TrKA-、P75-阳性细胞),分析神经递质的可塑性变化。结果新生期应激可致成年鼠内脏敏感性增高,新生期母婴分离可以诱导肠神经结构改变,导致神经元肥大和增生、胶质细胞与神经元的比例增高。神经递质方面,新生期母婴分离组P75和TrkA表达(黏膜下神经丛、肌间神经丛)较正常组均明显增加。ChAT在肌间神经丛表达明显增加,VIP在黏膜下神经丛表达降低,nNOS在肌间神经丛表达增高,Cabindin表达未见明显异常。结论新生期母婴分离可以引起大鼠结肠肠神经可塑性的长期改变。新生期母婴分离诱导的内脏高敏感性中存在肠神经系统可塑性。早期生活事件是引起成年后肠神经系统可塑性改变的重要原因。

关键词：肠易激综合征肠神经系统可塑性新生期母婴分离