检索结果-南通市图书馆

作者：毛明田山东农业大学

学位级别：硕士

传统意义上的水禽细小病毒包括鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus,MDPV)两种,鹅细小病毒能够引起雏鹅肠道产生纤维素性栓塞,番鸭细小病毒则导致雏番鸭出现腹泻、喘气和脚软的症状。2015年3月开始... 详细信息

传统意义上的水禽细小病毒包括鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus,MDPV)两种,鹅细小病毒能够引起雏鹅肠道产生纤维素性栓塞,番鸭细小病毒则导致雏番鸭出现腹泻、喘气和脚软的症状。2015年3月开始,我国山东、安徽、江苏等不同省份的樱桃谷肉鸭与骡鸭群爆发了以患病鸭短喙、舌外伸、发育受阻为主要特征的新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)感染,该病又称为“鸭短喙侏儒综合征”(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS),患病鸭生长迟缓,群体淘汰率可以超过40%,给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。本研究从内蒙古地区SBDS症状明显的樱桃谷肉鸭组织中分离到一株NGPV,将其命名为KC3S3株。对该毒株进行全基因组序列分析与致病性研究,同时以此毒株的全基因组为基础序列构建NGPV感染性克隆,感染性质粒通过鸭胚进行转染,成功得到带有分子遗传标记的NGPV病毒粒子。后续在拯救株的传代过程中,随着毒株复制能力逐渐达到亲本毒株水平,病毒感染鸭胚与细胞的能力明显与亲本毒株不同。鉴于此,本试验选取亲本毒株与两个不同代次拯救毒株进行雏鸭感染试验,通过不同组间差异分析,比较毒株的致病能力,这不但从动物水平上反映了不同毒力NGPV的感染差异性,同时也为NGPV传代致弱的理论模型提供了事实依据,为今后深入研究NGPV的致病机理与免疫防控提供了一定的技术支持。主要研究内容如下:采集内蒙古地区SBDS症状明显的樱桃谷肉鸭病料,处理后接种鸭胚,胚体在120h前后死亡,死亡鸭胚前胸羽毛部位轻微出血,生长严重抑制,PCR检测及NGPV VP2基因测序表明所分离病毒为NGPV,将其命名为KC3S3株,然后通过分段测序后拼接基因组进行KC3S3株全序列分析。同源性分析结果表明,KC3S3株与2020年山东NGPV分离株JS1212的核苷酸相似性达到99.8%。将KC3S3株同时与GPV参考株和MDPV参考株进行核苷酸同源性分析,结果显示其全基因组与GPV参考株的核苷酸同源性为94.7%～95.9%,与MDPV参考株的核苷酸同源性仅为81.2%～85.0%。遗传进化分析结果表明,KC3S3株与新型鹅细小病毒的亲缘关系最近,该分离毒株位于一条单独的进化分支,并与NGPV JS1212株、JS112株与HN1P株共处同一段基因进化簇。动物回归试验结果显示,感染KC3S3株的樱桃谷肉鸭表现出发育迟缓、舌尖磨损、胫骨骨折、胸腺点状出血等SBDS典型病变特征。综上所述,KC3S3株是一株具有独特进化性质的NGPV分离毒株。利用分段DNA扩增和同源重组的方式对KC3S3株进行反向遗传操作。通过高保真酶扩增KC3S3株全基因组,对位于NS2片段的SphⅠ酶切位点进行重叠突变,并以此作为分子标签。末端倒置重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)是一段位于基因组两端的包含大量重复GC碱基序列的长复杂回文序列,该序列为细小病毒属所共有。由于完整ITR在转化过程中极易发生缺失重排,本试验通过分隔ITR的方法对易变区域进行改造,从而降低了ITR在大肠杆菌体内复制的突变概率,同时也减少了ITR在菌种体内的复制次数,保证了克隆质粒的正确性。底层质粒选取p Blue Script II SK(+)载体(p BSK载体),目的片段通过同源重组的方式依次连接到载体的KpnⅠ与Bam HⅠ酶切位点之间,重组质粒命名为p KS3。p KS3质粒与脂质体混合后转染至10日龄鸭胚绒毛尿囊膜,37℃培养120 h后收取尿囊液并盲传3代。第3代鸭胚在160 h前后死亡,收集鸭胚尿囊液进行鉴定,PCR结果显示,盲传3代仍能检测到病毒粒子存在,测序结果表明拯救毒株已成功引入核苷酸位点标记。感染性质粒拯救得到的毒株命名为r KS3-N(N为代次),采用细胞与动物感染试验进行拯救毒株的生物学特性分析。亲本毒株与不同代次拯救毒株通过Taq Man荧光定量的方法统一病毒粒子拷贝数,选取KC3S3株、r KS3-3株、r KS3-5株与r KS3-10株进行DEF细胞感染试验,同时选取KC3S3株与r KS3-10株进行鸭胚感染试验,不同毒株的感染结果迥然不同。选取KC3S3株、r KS3-5株与r KS3-10株构建动物模型,120只一日龄樱桃谷雏鸭随机分为4组,每组30只,A组为KC3S3株感染组,B组为r KS3-5感染组,C组为r KS3-10感染组,D组为对照组。KC3S3感染组与r KS3-10感染组每只接种0.1 m L(1×10copies/0.1m L)病毒液与2.4 m L生理盐水配成的混合液,r KS3-5感染组每只接种2.5 m L(1

关键词：新型鹅细小病毒全基因组序列分析感染性克隆传代致弱动物试验

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新型鹅细小病毒NMG21株的鸭胚传代致弱研究

新型鹅细小病毒NMG21株的鸭胚传代致弱研究

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作者：吕红萌山东农业大学

学位级别：硕士

小鹅瘟是危害养鹅业的主要疫病,通过使用小鹅瘟种鹅用弱毒疫苗、雏鹅用弱毒疫苗及高免血清,很好地控制了该病的蔓延。从2015年起,我国肉鸭群中陆续出现以短喙、大舌头、侏儒、羽毛脱落形成“背刺”为特征的疾病,发病率高、死亡率低,给... 详细信息

小鹅瘟是危害养鹅业的主要疫病,通过使用小鹅瘟种鹅用弱毒疫苗、雏鹅用弱毒疫苗及高免血清,很好地控制了该病的蔓延。从2015年起,我国肉鸭群中陆续出现以短喙、大舌头、侏儒、羽毛脱落形成“背刺”为特征的疾病,发病率高、死亡率低,给我国养鸭业造成了严重的经济损失。本实验室在国内率先分离鉴定了其病原为新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)。本研究选择分离自内蒙古某鸭场的强毒株NMG21进行传代致弱。使用10日龄鸭胚对NMG21株进行传代,直至35代。将NMG21、NMG21-5、NMG21-15、NMG21-25、NMG21-35的病毒尿囊液分别用无菌的生理盐水连续10倍稀释至10,每个稀释梯度经鸭胚尿囊腔分别接种5枚10日龄樱桃谷鸭鸭胚,按照Reed-Muench法计算病毒的EID,结果表明新型鹅细小病毒NMG21株随着传代次数的增加,致死鸭胚的能力逐渐减弱,毒力不断降低。根据NGPV VP3的基因序列设计特异性引物及探针,将目的片段连接到载体p MD18-T上构建重组质粒。构建成功后,将标准质粒10倍稀释,以稀释的标准质粒为模板,构建荧光定量标准曲线,建立TaqMan探针荧光定量PCR方法检测NGPV。检验结果表明,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,临床样本检出率高,可用于后续动物试验中病毒的定性与定量检测。将NMG21以及传代毒株NMG21-5、NMG21-15、NMG21-25、NMG21-35通过肌肉注射途径感染1日龄雏鸭,每只雏鸭0.2 m L(各毒株的EID分别为10、10、10、10、10/0.2m L)病毒液,空白对照组雏鸭接种相同剂量生理盐水,观察记录不同分组雏鸭的临床表现及死亡情况。攻毒后第7 d、14 d、21 d、28 d,每组随机抽取6只进行称重、剖检。固定肝脏、脾脏、十二指肠、肺脏、腺胃等组织器官,观察组织学病变;收集各组织器官及泄殖腔棉拭子,进行病毒载量的测定;采集血液并制备血清,进行病毒载量及抗体水平测定;量取对照组雏鸭的喙长及舌长,建立短喙发病标准曲线,统计感染组雏鸭短喙的发病率;量取股骨、胫骨的长度,检查其病变。动物试验结果表明,不同代次毒株感染组雏鸭的临床表现差别比较大。其中NMG21感染组临床症状最为严重,死亡率高达40%,雏鸭个体发育严重受阻,部分雏鸭瘫痪,肺脏、肝脏、胰腺严重出血,脾脏、肾脏、胸腺肿大出血;NMG21-5、NMG21-15感染组死亡率分别为30%和26.7%,雏鸭个体发育受阻,肺脏、肝脏出血,胸腺肿大出血;NMG21-25、NMG21-35感染组死亡率较低,分别为6.7%和2.8%,个体发育轻微受阻,体内脏器轻微出血或正常,除NMG21-35出现“背刺”症状外,无其他异常表现。所有攻毒组的组织学病变相似,肺房充血,肺细胞气肿;肝细胞、脾细胞肿大、增生;肠绒毛不同程度脱落且伴有炎性细胞渗出。不同脏器的病毒载量检测结果表明,感染组雏鸭的心脏、肝脏、腺胃和十二指肠病毒载量较高;不同感染组间比较,随着不同代次毒株毒力的减弱,感染雏鸭组织的病毒载量也逐渐降低。病毒血症结果显示,感染毒株毒力越强,血液中病毒含量越高。泄殖腔棉拭子排毒规律显示,感染毒株毒力越强,泄殖腔排毒量越大。ELISA检测结果显示,感染毒株的毒力越弱,雏鸭的抗体反应越强。综上所述,本研究经鸭胚传代,成功致弱新型鹅细小病毒的强毒株NMG21,且随着传代次数的增加,毒力呈现下降趋势,对雏鸭的致病性不断降低。本研究为新型鹅细小病毒弱毒疫苗的研发提供了可靠的试验数据和理论依据。

关键词：新型鹅细小病毒传代致弱荧光定量PCR 致病性

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新型鹅细小病毒的分离、遗传进化及Rep1蛋白的表达研究

新型鹅细小病毒的分离、遗传进化及Rep1蛋白的表达研究

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作者：王昱扬州大学

学位级别：硕士

短喙与矮小综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)自2015年爆发以来,对我国樱桃谷鸭养殖业造成了很大损失,感染鸭以体型矮小、喙短、站立行走困难为特征。新型鹅细小病毒(Novelgooseparvovirus,NGPV)为SBDS的病原。先前研究显... 详细信息

短喙与矮小综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)自2015年爆发以来,对我国樱桃谷鸭养殖业造成了很大损失,感染鸭以体型矮小、喙短、站立行走困难为特征。新型鹅细小病毒(Novelgooseparvovirus,NGPV)为SBDS的病原。先前研究显示,早期的NGPV分离株与2019年后的分离株在樱桃谷鸭胚适应性上存在明显差异。NGPV在田间流行已有七年,近年来的流行株是否产生新的变异尚不清楚。非结构蛋白Rep1在NGPV致病性和SBDS特征性临床症状的呈现上发挥决定性作用,对Rep蛋白开展深入研究对揭示NGPV致病机制十分关键。本论文研究中,对2021-2022年的NGPV分离株进行了基因组测序和遗传进化分析,对Rep1蛋白全长及其亚片段开展了基于原核系统的表达并研制了针对表达产物的多克隆抗体,研究结果为进一步探究NGPV致病性和致病机理奠定了基础,具体内容如下:一、三株NGPV的分离、定序及遗传进化分析从2021-2022年间收集的三份疑似SBDS阳性的组织样品,通过接种樱桃谷鸭胚,分离到三株NGPV,分别命名为SDDY21、SDJN21和SDWF22株。三株病毒传代后稳定在69-142 h内致死鸭胚。SDWF22株第三代鸭胚传代毒的ELD50为5×105 26/mL,非常接近于2019年分离株SDJN19(5×105.5/mL),而明显高于2016年分离株SDHT16(5×102.5/mL)。三个分离株的基因组均由5 054个核苷酸组成,这三个分离株与2019年NGPV分离株SDLC19和SDJN19的同源性为99.5%-99.8%,而与2016年分离株SDHT16的同源性略低,为98.7%-98.8%。三个分离株的末端倒置重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)均由418个核苷酸组成,与SDJN19株ITR的同源性均为100%,而这四个毒株的ITR与2016年分离株SDHT16和AH1605的同源性略低,分别为98.1%和98.6%,后者的ITR由416个核苷酸组成。三个分离株的Rep1编码框均由1 884 nt组成,彼此同源性高达99.9%-100%。三个毒株Rep1蛋白与2015-2016年NGPV分离株的核苷酸同源性略低,为98.9%-99.1%,与2019年分离株SDJN19和SDLC19的同源性为99.5%-99.8%;相比之下,三个毒株与经典型GPV的Rep1蛋白核苷酸同源性仅为96.0%-96.8%,其中同源性最高的为来自匈牙利的GPV B株,同源性为96.8%。Rep1蛋白氨基酸序列比对显示,与经典型GPV毒株相比,包括三个新分离株在内的共15个NGPV毒株呈现出11个特征性的氨基酸点突变。三个新分离株,除了与其它NGPV毒株具有一致的特征性氨基酸位点外,还在7个位点上形成了自身的特征性氨基酸,而2019年分离株在这些位点上的氨基酸则呈现出过渡特征。SDDY21、SDJN21、SDWF22三个毒株的VP1 蛋白均由2 199个核苷酸组成,彼此间核苷酸同源性为99.7%-99.8%,与SDJN19和SDLC19的同源性为99.5%-99.8%,与 2015-2016 年间的 6 个分离株(JS1、SDLC01、AH1605、AH0606、QH15 和 ADHT16)的同源性为98.6%-98.9%。相比之下,这三个新NGPV分离株与大陆和台湾地区经典GPV毒株的VP1核苷酸同源性仅有94.4%-94.8%,而与欧洲的GPVB株的同源性则略高,为96.0%-96.1%。进一步的氨基酸序列比对显示,包括三个新分离株在内的共15个NGPV毒株与经典型GPV毒株之间具有14个特征性氨基酸差异,在这些差异氨基酸位点中,有9个位点(28、35、41、207、210、524、537、575和703位)与欧洲的B株相一致。结果提示,流行于我国樱桃谷鸭中的NGPV更有可能在欧洲的B株基础上演变而来。以Rep1和VP1构建的遗传发生树均显示所有NGPV毒株形成了不同于经典型GPV的独立分支,但同时也显示,三个新分离株与2019年的分离株处于一个亚分支,而SBDS爆发早期的分离株则处于另一个更为紧密的亚分支。二、NGPV Rep1蛋白及其亚片段的原核表达和多抗制备NGPV与经典型GPV的Rep 1蛋白之间存有特征性氨基酸差异,Rep 1蛋白在NGPV致病性上发挥关键作用。Rep1蛋白的N端和C端分布有不同的功能结构域。原核系统表达Rep1蛋白的研究已多有报道,但大多以包涵体状态存在。本研究中,通过对表达载体、诱导温度、IPTG浓度进行试验比较,最终选择以pET-28a载体表达Rep1的N端200个氨基酸片段(后文简称为Rep1N),以pGEX-6p-1为载

关键词：新型鹅细小病毒病毒分离遗传进化树原核表达 Rep1蛋白多克隆抗体

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新型鹅细小病毒广东分离株的鉴定及其结构蛋白VP3基因表达

新型鹅细小病毒广东分离株的鉴定及其结构蛋白VP3基因表达

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作者：黄惠兰佛山科学技术学院

学位级别：硕士

新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV),是“短喙侏儒综合症”(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的主要病原,主要导致患鸭翅骨和腿骨易断裂、羽毛脱落、生长发育受阻等症状。自2015年以来在我国安徽、江苏、山东和广东地... 详细信息

新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV),是“短喙侏儒综合症”(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的主要病原,主要导致患鸭翅骨和腿骨易断裂、羽毛脱落、生长发育受阻等症状。自2015年以来在我国安徽、江苏、山东和广东地区出现NGPV感染的疫情,已经对我国主要养殖水禽的相关省市造成巨大经济损失。目前的相关研究中对于NGPV致病性等方面的关注不足,且针对该病目前还没有相关商品化疫苗出售,故本研究首先通过建立水禽细小病毒SYBR Green实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q PCR)检测方法,筛选出一株来源于广东的NGPV分离株GDZQ-297并进行鉴定、全基因遗传进化分析及动物致病性研究。同时构建该毒株的重要结构蛋白VP3基因的表达载体并制备多克隆抗体。本研究通过对Gen Bank数据库中水禽细小病毒(Waterfowl parvovirus,WPV)的VP3基因的保守性分析,并设计特异性的检测引物,建立了WPV SYBR Green q PCR检测方法,该方法能特异性扩增WPV,而对其他病毒无特异性扩增;可检测到最低拷贝值为1.2×10～2 copies/μL,比普通PCR灵敏100倍;组内变异系数小于0.4%,组间变异系数小于1.2%,拥有较好的数据重现性和稳定性;随后,利用本检测方法检测实验室保存的病料,将q PCR阳性样本进行病原分离鉴定。将接种鸭胚尿囊腔分离的毒株命名为:GDZQ-297,并对该病毒进行全基因组扩增与遗传进化分析。针对GDZQ-297的重要结构蛋白VP3基因,构建p ET-32a-VP3和p ET-28b-VP3原核表达质粒,在大肠杆菌原核表达系统中进行表达,获得重组VP3蛋白。分别以灭活的GDZQ-297和纯化后的p ET-28b-VP3为免疫原制备兔源抗全病毒多克隆抗体和抗VP3多克隆抗体,以p ET-32a-VP3为包被抗原,通过间接酶联免疫吸附试验(indirect Enzyme-linked immunosorbent assays,i-ELISA)测定制备多克隆抗体效价前者可达1:102,400,后者能达1:409,600,Western blot验证两者均有较好的免疫原性。利用真核表达载体pc DNA3.1(+),构建重组质粒pc DNA3.1-VP3,并转染至BHK-21细胞,间接免疫荧光试验(Immunofluorescence assay,IFA)结果显示,制备的两种多克隆抗体均能特异性结合BHK-21细胞瞬时表达的VP3蛋白。为深入研究GDZQ-297对1日龄雏番鸭的影响,进行动物致病性试验。对48只1日龄雏番鸭设立对照组和攻毒组,攻毒组腿部肌注病毒含量10～5copies/μL的尿囊液1 m L,分别于攻毒后的4 d、7 d、11 d、14 d、17 d和20 d观察临床症状及解剖病变。结果显示在20天的观察期内雏番鸭未出现死亡,20dpi攻毒组雏番鸭出现明显的喙萎缩,舌头外伸,腿骨也比对照组短的症状;11dpi和14 dpi时解剖可见有心包积液、脾脏肿大充血、胰腺和胸腺均有出血点、肝脏有出斑块,采集不同时间段的不同器官组织,通过q PCR检测病毒拷贝数均在10～3copies/μL以上,其中心脏、脾脏、胰腺和盲肠的病毒载量最高;并且通过咽拭子和肛拭子检测,雏番鸭在感染病毒后,可通过呼吸道和消化道反复对外界环境排毒,在11 dpi时排毒量达峰值。综上所述,本研究通过建立的WPV SYBR Green q PCR检测方法,鉴定并分离了一株来源于广东省的NGPV命名为GDZQ-297,对该毒株的全基因序列进行分析,利用雏番鸭进行动物致病性试验。最后对GDZQ-297的结构蛋白VP3基因进行原核与真核表达,初步探究该蛋白的抗原性,为后续对VP3相关功能进一步研究奠定基础。

关键词：新型鹅细小病毒分离鉴定序列分析 VP3 多克隆抗体制备

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致鸭短喙与侏儒综合征的新型鹅细小病毒不同传代毒株基因组分析

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病毒学报 2022年第2期38卷 394-401页

作者：郝雪飘王璐瑶雷白时张武超苗天姿庞洪泽赵款袁万哲河北农业大学动物医学院保定071001 河北省兽医生物技术创新中心保定071001

由新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)引起的鸭短喙与侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)给我国养鸭业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养鸭业的发展。而目前N-GPV的毒力关键基因位点尚不清楚。本... 详细信息

由新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)引起的鸭短喙与侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)给我国养鸭业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养鸭业的发展。而目前N-GPV的毒力关键基因位点尚不清楚。本研究将N-GPV(SD株)在SPF鸭胚上进行多次传代,对SD株F10、F20、F30、F40和F50进行全基因组测序,并选择F50进行致病性试验,结果表明,F50感染组与对照组相比体重与喙长有明显差异,但F50感染组无典型临床症状,表明SD-F50的致病性明显降低;F50与F5序列分析显示,5’和3’的反向重复末端(ITR)中均有4个碱基突变和2个碱基插入,且突变位置相对应;在非结构蛋白Rep中有1个氨基酸位点突变,结构蛋白VP中共有2个氨基酸位点突变。综上所述,N-GPV SD株经过鸭胚连续传代后出现了毒力下降,并且病毒基因组序列也出现了规律性变化,这些突变位点可能是影响N-GPV毒力的关键位点,为N-GPV毒力关键位点的研究提供参考依据。

关键词：新型鹅细小病毒鸭短喙与侏儒综合征序列分析

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携带遗传标记的新型鹅细小病毒感染樱桃谷北京鸭再现短喙与矮小综合征

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中国兽医学报 2023年第4期43卷 674-680页

作者：李勇霖王昱张伟周扬李玉峰蒋志伟张建军朱国强王建业扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 国药集团扬州威克生物工程有限公司江苏扬州225100 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023

为了阐明是否新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)单独感染樱桃谷北京鸭能够复制出短喙与矮小综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的所有临床症状,并进一步解析NGPV致病机理。本研究中,基于NGPV分离株SDJN19,构建... 详细信息

为了阐明是否新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)单独感染樱桃谷北京鸭能够复制出短喙与矮小综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的所有临床症状,并进一步解析NGPV致病机理。本研究中,基于NGPV分离株SDJN19,构建了携带遗传标记的感染性克隆质粒pJNm。pJNm质粒转染9日龄樱桃谷北京鸭胚拯救出感染性病毒rJNm。rJNm半数致死量(ELD_(50))达到5×10^(6.25)/mL,与亲本株接近。rJNm感染2日龄樱桃谷北京鸭,能够复制出SBDS的所有典型临床特征,包括短喙、舌头外伸、生长迟缓、站立行走困难等。试验还表明rJNm能够通过水平传播途径感染樱桃谷北京鸭,感染鸭依旧表现出典型的SBDS特征。水平接触组鸭在感染后31 d能够同时在体内检测出高的病毒载量和高水平血清沉淀抗体,预示着NGPV可以持续性感染樱桃谷北京鸭。本研究结果表明SBDS确系NGPV感染所致,为研制针对性的预防性生物制剂以及深入解析NGPV的致病机制奠定了坚实基础。

关键词：新型鹅细小病毒短喙与矮小综合征感染性克隆拯救樱桃谷北京鸭

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新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

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福建农业学报 2022年第1期37卷 1-6页

作者：李海琴傅光华康昭风韦启鹏谭美芳黄江南季华员黄瑜杨群江西省农业科学院畜牧兽医研究所江西南昌330200 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒新型鹅细小病毒鸭坦布苏病毒多重PCR

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鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定与VP1基因序列分析

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中国家禽 2022年第12期44卷 34-39页

作者：刘博祖立闯魏中锋谷英华毕研丽王文秀山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 淄博市动物疫病预防与控制中心山东淄博255000 菏泽市动物疫病预防控制中心山东菏泽274006 山东省院士工作站山东滨州256600

为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(5... 详细信息

为确定发病鸭场的致病原,掌握该致病原的遗传进化特征,研究从山东省某鸭场采集到1份短喙与矮小综合征(SBDS)疑似病例病料,采用永生化鹅胚上皮细胞系(GEEC)对病料进行病毒分离培养,观察细胞病变,测定分离毒株的血凝性、病毒滴度(TCID_(50))、对鸭胚的致病性,并进行VP1基因序列比对及相似性分析。结果显示:临床病料分离培养的病毒可引起GEEC出现细胞明显皱缩、聚集、折光性增强等典型细胞病变,表明分离到一株鸭源NGPV毒株,命名为SDHZ株,该病毒对1%鸡红细胞无凝集性,TCID_(50)高达10^(-6.25)/mL,鸭胚半数致死量(ELD_(50))为10^(-4.5)/mL,接种鸭胚死亡出现全身及肝脏出血、短喙、发育迟缓等典型症状,VP1基因序列与樱桃谷鸭中分离的新型鹅细小病毒(NGPV)相似性为95.3%~98.0%,与GPV经典毒株的相似性为89.3%~94.6%。表明该鸭场本次疫病病原为NGPV,为进一步研究NGPV致病机制及制定综合防控措施提供参考。

关键词：新型鹅细小病毒永生化鹅胚上皮细胞系分离鉴定 VP1基因序列分析

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鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2023年第10期43卷 2042-2049页

作者：马瑶汪宏才唐晟姚伦曾哲罗青平曾驰商雨温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 武汉轻工业大学生命科学与技术学院湖北武汉430023 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室湖北武汉430064 畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北武汉430064 湖北洪山实验室湖北武汉430070

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大... 详细信息

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大的经济损失。为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测,本研究利用生物信息学预测了NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位,选择了抗原富集区域(aa250~525)进行原核表达,经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr。以VP3-tr为包被抗原,经过棋盘滴定方法优化各个反应条件,建立了NGPV抗体的间接ELISA检测方法。利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.219。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性良好,不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于6%,重复性良好。用该方法与Western blot检测方法分别对147份临床血清样品进行检测,结果表明ELISA检测阳性率为85.0%,Western blot检测率为69.4%,两者符合率为84.4%。综上所述,本研究成功建立了鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,为鸭感染NGPV后的感染情况监测以及疫苗免疫评估提供了更简便可靠的方法。

关键词：新型鹅细小病毒 VP3蛋白间接ELISA

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新型鹅细小病毒病研究进展

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云南畜牧兽医 2022年第3期 16-18页

作者：包涛涛汪忠荣吴通奎杨先富彭彩丽杨政益黔东南州农业农村局贵州凯里556000

自2015年以来,我国华东地区陆续暴发樱桃谷鸭及半番鸭以生长迟缓,短颈,短喙,舌外露,胸骨及翅、腿易发生骨折等为主要症状的疾病,研究发现引起该病的病原为鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)。为更好地掌握该病相关知识,就该病的病原特征、流行... 详细信息

自2015年以来,我国华东地区陆续暴发樱桃谷鸭及半番鸭以生长迟缓,短颈,短喙,舌外露,胸骨及翅、腿易发生骨折等为主要症状的疾病,研究发现引起该病的病原为鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)。为更好地掌握该病相关知识,就该病的病原特征、流行病学、临床症状、病理剖检及诊断方法做概述,以期为该病的防治提供参考依据。

关键词：鸭新型鹅细小病毒鹅细小病毒番鸭细小病毒

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