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一株麻鸡传染性法氏囊病毒新型变异株的分离鉴定

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 83-88页

作者：王艳孙文渊朱维王峰升孟德坤山东省枣庄市农业综合执法支队枣庄277800 山东省枣庄市畜牧渔业事业发展中心枣庄277800 山东省滕州市动物疫病预防控制中心枣庄277599 山东省动物卫生技术中心济南250010 山东省平度市农业农村局平度266700

近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行... 详细信息

近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行病毒鉴定,将分离毒株回归SPF鸡进行致病性试验,同时对其主要抗原基因VP2进行进化分析。结果发现,该毒株能致死鸡胚;对其VP2基因进行测序比对和进化树分析发现,其与近几年的新型变异株基因序列的进化关系较近,同源性为96.1%~99.2%;人工感染SPF鸡第7 d法氏囊即出现较为明显的萎缩,第14 d萎缩更为明显,囊体比显著小于对照组(P株属于新型变异株,能导致SPF鸡法氏囊显著萎缩。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒新型变异株麻鸡法氏囊萎缩

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传染性法氏囊病病毒新型变异株VP2蛋白原核表达及免疫效果评价

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南方农业学报 2023年第6期54卷 1876-1883页

作者：马景霞王常伟吴洪才何吉鑫牛晓赛段志强朱杰滨州市农业技术推广中心山东滨州256600 山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256600 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达... 详细信息

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定,并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡,通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达,获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达,大小约40 kD,且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应,其琼扩效价可达1∶32;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好,安全性高,无免疫引起的不良反应,剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8,而血清抗体效价均在1∶20000以上,表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应,抗体阳性率达100%;使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况,结果显示免疫组鸡只均未发病,其法氏囊也无明显萎缩现象,即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达,且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好,能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果,为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 新型变异株 VP2蛋白亚单位疫苗免疫效果

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青年鸡混合感染血清4型禽腺病毒和传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定与遗传进化分析

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中国家禽 2022年第5期44卷 38-46页

作者：张燕王威威陈果李秋红朱玮钰乔远征施俊何秀苗韦平广西大学养禽与禽病学研究所广西南宁530005 广西民族大学海洋与生物技术学院广西高校微生物与植物资源利用重点实验室广西南宁530006

为探究某青年鸡群临床突然发病死亡原因,试验通过病理剖检、实验室病原检测及序列测定进行可疑病原的鉴定与遗传进化分析。结果显示:病鸡心包有大量淡黄色清亮渗出液,肝脏肿胀,脾脏和肾脏肿大出血,胸肌出血和法氏囊萎缩;心肝病变组织FAd... 详细信息

为探究某青年鸡群临床突然发病死亡原因,试验通过病理剖检、实验室病原检测及序列测定进行可疑病原的鉴定与遗传进化分析。结果显示:病鸡心包有大量淡黄色清亮渗出液,肝脏肿胀,脾脏和肾脏肿大出血,胸肌出血和法氏囊萎缩;心肝病变组织FAdV-4 hexon基因PCR检测结果呈阳性(命名为毒株FAdV-QZ191002);法氏囊组织IBDV vVP2、VP1-b基因RT-PCR检测结果呈阳性(命名为毒株GX-QZ191002);细菌及其它禽类常见病毒检测结果均为阴性;序列分析结果发现FAdV-QZ191002的hexon基因与SD1601、CH/GDYF/201706等近几年的FAdV-4中国流行毒株同处于FAdV-C这个分支,核苷酸相似性为100%,并且具有与SD1601、CH/GDYF/201706等中国高致病性分离株一致的氨基酸突变位点;GX-QZ191002的vVP2和VP1-b基因与我国最近新发的新型变异株(A2dB1b)的核苷酸相似性分别高达96.0%~98.5%和97.0%~97.8%,系统进化树处于同一分支。除具有与新型变异株一致的独特氨基酸位点外,GX-QZ191002在vVP2中还存在2个氨基酸突变(N251S、T321A),VP1-b存在1个氨基酸突变(D444N)。确定该青年鸡群突然发病死亡为FAdV-4和IBDV新型变异株混合感染所致,研究结果为我国今后开展FAdV-4和IBDV的监测和综合防控具有重要的指导意义。

关键词：心包积液肝炎综合征 FAdV-4 IBDV 新型变异株混合感染

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传染性法氏囊病病毒新型变异株的分离和鉴定

动物医学进展 2023年第5期44卷 44-49页

作者：姜婷婷焦晓丽吴村刘东海马坤蔡梦雷娄路平李夫宏刘彦威崔国林河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 河北工程大学数理科学与工程学院河北邯郸056038 邯郸市动物医学重点实验室河北邯郸056038

为调查我国部分地区规模化养鸡场传染性法氏囊病病毒(IBDV)新型变异株流行现状,参考IBDV VP2蛋白高变区序列设计Taqman-MGB探针和引物,建立IBDV快速检测方法,利用其检测来自河北邯郸、江西宜春、重庆7家大型育雏场送检法氏囊病料,并对... 详细信息

为调查我国部分地区规模化养鸡场传染性法氏囊病病毒(IBDV)新型变异株流行现状,参考IBDV VP2蛋白高变区序列设计Taqman-MGB探针和引物,建立IBDV快速检测方法,利用其检测来自河北邯郸、江西宜春、重庆7家大型育雏场送检法氏囊病料,并对阳性病料进行病毒分离、测序和进化分析。成功建立了一种兼顾IBDV鉴定和测序分型的荧光定量PCR方法,该方法在10^(1)~10^(8)拷贝/μL范围内具有良好线性关系(相关系数为0.9963),扩增效率良好(扩增效率为109%),对其他常见病毒无扩增,最低检测限为1.25×10^(1)拷贝/μL;利用该方法检测邯郸地区4家育雏场送检样品均为阳性,测序均为IBDV新型变异株,采用鸡胚自阳性样品中分离到3株IBDV(T2021与T2022、J2021);对分离株A节段测序发现,3株IBDV分离株均属国内新型变异株,与国内新型变异株SHG19氨基酸同源性为100%,核苷酸同源性为98.0%~98.6%,T2021与T2022、J2021分属两个进化分支。建立了一种IBDV快速检测方法,发现IBDV国内新型变异株在我国部分地区仍存在。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒荧光定量PCR 鉴定新型变异株

我国部分地区A2dB1型传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定及序列分析

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中国家禽 2024年第9期46卷 194-200页

作者：张文英于航博姜楠王国栋牛鑫鑫黄萌萌张玉龙韩金泽许萌萌刘长军王素艳李凯高立崔红玉张艳萍陈运通高玉龙祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为持续了解传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant infectious bursal disease virus,nVarIBDV)在我国流行情况,研究收集2021—2022年6个主要养禽地区疑似传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)鸡病料,采用RT-PCR进行检测,并对11株IBDV代表毒株的基因组双节段代表区段VP2-HVR和VP1-B-marker进行基因测序及序列分析。结果显示:所检测病料的IBDV阳性率为20.65%(19/92),其中11株IBDV代表毒株均为A2dB1型nVarIBDV。研究表明,nVarIBDV在我国主要养禽地区仍持续流行,而且出现了值得注意的新的突变位点,有必要进行持续的IBDV流行病学监测。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株 A2dB1型流行病学

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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究

中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1164-1169页

作者：范林进王雨龙吴甜甜李凯姜楠高玉龙高立刘长军崔红玉潘青张艳萍刘玉凤孙先本刘俊启王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 法国诗华动物保健公司北京100102 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 详细信息

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。

关键词：非典型传染性法氏囊病传染性法氏囊病病毒新型变异株法氏囊半数萎缩量

蛋鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国家禽 2020年第5期42卷 36-40页

作者：王雨龙范林进姜楠高玉龙李凯高立刘长军崔红玉潘青张艳萍王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病蛋鸡群样品进行RT-PCR检测及相关分析,结果显示,引起该鸡群非典型IBD的病原是IBDV新型变异株。这是蛋鸡感染IBDV新型变异株的首次报道,对于更全面了解IBDV新型变异株的流行态势具有重要意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株蛋鸡

鸡传染性法氏囊病病毒新型变异株衣壳蛋白重组真核表达质粒的免疫原性分析

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中国家禽 2022年第6期44卷 31-35页

作者：张文英姜楠王雨龙马广斌牛鑫鑫黄萌萌王国栋宋桂才李凯琳刘爱晶王素艳高立崔红玉刘长军李凯潘青张艳萍王笑梅高玉龙祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病团队黑龙江哈尔滨150001 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150001 山东信得科技股份有限公司山东诸城262200 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为了研究针对传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株的特异性防控技术,试验通过RT-PCR方法扩增IBDV新型变异株代表毒株SHG19的衣壳蛋白VP2基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCA-SHG19 V... 详细信息

为了研究针对传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株的特异性防控技术,试验通过RT-PCR方法扩增IBDV新型变异株代表毒株SHG19的衣壳蛋白VP2基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCA-SHG19 VP2,将重组质粒以100μg/只的剂量在聚乙烯亚胺(PEI)的作用下免疫4周龄BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)和ELISA对血清抗体进行检测。结果表明:免疫鼠血清可特异性识别IBDV,ELISA抗体效价高达1∶16000以上,重组真核表达质粒pCA-SHG19 VP2的基因免疫在BALB/c小鼠模型上产生了良好的特异免疫应答。研究结果对IBD的综合防控研究具有参考意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株衣壳蛋白基因免疫

一株IBDV新型变异株的分离、VP2蛋白单抗的制备及其与Bcl-2相互作用的初探

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一株IBDV新型变异株的分离、VP2蛋白单抗的制备及其与Bcl-2相互作...

作者：黄远玲四川农业大学

学位级别：硕士

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)导致的一种高度传染性疾病,主要引起雏鸡法氏囊萎缩。目前,IBDV新型变异株引发的IBD感染病例在我国迅速扩散并呈现流行趋势... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)导致的一种高度传染性疾病,主要引起雏鸡法氏囊萎缩。目前,IBDV新型变异株引发的IBD感染病例在我国迅速扩散并呈现流行趋势,严重影响该病的防控。因此了解当前IBDV新型变异株的流行情况,研究其分子特性及蛋白的生物学功能,对IBD疫情预警及生物安全风险防控至关重要。为了给IBDV的流行动态监测提供参考,同时探究IBDV的致病性和致病机制,本研究内容如下:一、传染性法氏囊病毒新型变异株的分离鉴定从IBD疫苗免疫失败的病鸡样本中分离得到一株IBDV新型变异株,命名为IBDV-LY21/2;对其主要结构蛋白VP2进行遗传进化分析,结果显示IBDV-LY21/2与我国流行的新型变异株处于同一分支,同源性可达98.6%;IBDV-LY21/2能够适应鸡胚和MC38细胞,感染雏鸡后导致法氏囊萎缩并发生凋亡。二、抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定以新型变异株IBDV-LY21/2 VP2蛋白为免疫原制备单克隆抗体。对筛选得到的三株单克隆抗体1G10F2、3E3E9、4D12G12细胞株进行生物学鉴定,结果显示1G10F12、3E3E9能同时用于VP2蛋白的ELISA、Western blot和IFA鉴定,而4D12G12仅能用于ELISA和IFA鉴定。三、VP2蛋白与宿主Bcl-2蛋白的相互作用对传染性法氏囊病毒复制的影响通过GST-pull down和亚细胞共定位技术验证新型变异株IBDV-LY21/2 VP2蛋白与宿主抗凋亡蛋白Bcl-2之间的关系,结果显示二者存在相互作用,而且过表达Bcl-2蛋白能够抑制IBDV的复制,而抑制Bcl-2蛋白能够促进IBDV的复制。综上所述,本研究成功分离一株能造成雏鸡法氏囊萎缩的IBDV新型变异株,给IBDV的防控提供数据支持;制备的三株单克隆抗体能专一识别VP2蛋白的特定表位,为IBDV的鉴定及其与Bcl-2蛋白相互作用的探究奠定基础;VP2蛋白与宿主蛋白Bcl-2存在相互作用,调控Bcl-2的表达能够影响IBDV的复制,为探究IBDV的致病机制奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病毒新型变异株 VP2蛋白