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新乌头碱对K562细胞及耐柔红霉素的K562细胞凋亡的诱导作用及其机制

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华中科技大学学报（医学版） 2017年第3期46卷 281-284页

作者：关心杨同华张超然冯帅云南省第一人民医院血液科昆明650032

目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头... 详细信息

目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头碱作用72h对K562和K562/DNR细胞C/EBPα、Caspase-3、p53凋亡相关基因表达的影响。结果 K562和K562/DNR细胞的增殖抑制率随着新乌头碱浓度增加及作用时间延长而上升,呈浓度、时间依赖性(均P新乌头碱能引起K562和K562/DNR细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐升高,差异均有统计学意义(均P新乌头碱作用72h,K562和K562/DNR细胞的C/EBPα表达下调,Caspase-3、p53表达上调,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均P新乌头碱能够引起K562和K562/DNR细胞发生凋亡,并且凋亡机制可能与下调C/EBPa基因及上调Caspase-3、p53基因有关。

关键词：新乌头碱白血病细胞凋亡 C/EBPα基因 Caspase-3基因 p53基因

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附子中内源性组分新乌头碱的毒性作用

南昌大学学报（理科版） 2023年第4期47卷 368-373,382页

作者：陈锦萍徐梦佳郭娴万益群郭岚南昌大学化学化工学院江西南昌330031

探究了附子中内源性组分新乌头碱的急性毒性,为附子的安全使用提供一定的科学依据。将50只SPF级SD大鼠(雌雄各半),按体重随机分成10组,每组5只,即1个雄性对照组、4个雄性给药组(1.00、2.15、4.64和10.0 mg·kg^(-1));1个雌性对照组、4... 详细信息

探究了附子中内源性组分新乌头碱的急性毒性,为附子的安全使用提供一定的科学依据。将50只SPF级SD大鼠(雌雄各半),按体重随机分成10组,每组5只,即1个雄性对照组、4个雄性给药组(1.00、2.15、4.64和10.0 mg·kg^(-1));1个雌性对照组、4个雌性给药组(0.464、1.00、2.15和4.64 mg·kg^(-1))。给药组一次性灌胃各剂量新乌头碱,对照组一次性灌胃等体积食用级玉米油。连续观察14 d,并对大鼠的脏器指数、病理组织切片以及氧化应激能力进行分析。结果表明,新乌头碱对雄性大鼠和雌性大鼠的经口LD 50分别为3.16和1.26 mg·kg^(-1)。病理组织学分析结果表明,一定剂量的新乌头碱会对大鼠肝脏造成一定的损伤。氧化应激能力指标结果显示,雌性1.00 mg·kg^(-1)组、雄性1.00 mg·kg^(-1)组和雄性2.15 mg·kg^(-1)组大鼠的肝脏iNOS指标与对照组相比显著升高(0.01新乌头碱会对大鼠肝脏造成损伤。

关键词：附子新乌头碱大鼠毒性作用肝脏

静电离子色谱法测定草乌药材中新乌头碱、次乌头碱及乌头碱含量

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药物分析杂志 2020年第7期40卷 1319-1324页

作者：张玉荣王瑞忠何轶张聿梅鲁静西安医学院第一附属医院西安710077 西安大兴医院西安710016 中国食品药品检定研究院北京100050

目的:优化《中华人民共和国药典》2015年版草乌含量测定项下方法,并测定草乌中新乌头碱、次乌头碱及乌头碱的含量。方法:采用Xcharge C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱... 详细信息

目的:优化《中华人民共和国药典》2015年版草乌含量测定项下方法,并测定草乌中新乌头碱、次乌头碱及乌头碱的含量。方法:采用Xcharge C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长235 nm。结果:新乌头碱、次乌头碱及乌头碱的检测下限分别为2.68、3.49和7.14μg·g^-1,线性范围分别为20.9~1045μg·mL^-1(r=0.9999)、15.12~756μg·mL^-1(r=0.9999)、9.43~471.5μg·mL^-1(r=0.9999),回收率分别为98.3%、97.7%和97.6%;3批样品中新乌头碱、次乌头碱及乌头碱的含量范围分别为3.51~4.85、1.23~1.44、0.40~0.74 mg·g^-1。结论:本研究建立的高效液相色谱方法稳定可靠,分析时间短,可用于草乌药材中双酯型生物碱的含量测定。

关键词：草乌新乌头碱次乌头碱乌头碱双酯型生物碱含量测定静电离子色谱法

参附注射液中3种痕量成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的测定

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中国中药杂志 2013年第10期38卷 1521-1525页

作者：张盼盼张俊贞王朝虹卢永江蒋晔河北医科大学药学院河北石家庄050017 河北医科大学第四医院河北石家庄050011 最高人民检察院司法鉴定中心北京100040 山东莒县中医院山东日照276500

该文建立了参附注射液中3种痕量附子指标成分的含量测定方法,为评价君药附子的药效学作用提供了依据。样品经中空纤维液相微萃取(HF-LPME)进行纯化富集,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相乙腈-10 mmol.L-1... 详细信息

该文建立了参附注射液中3种痕量附子指标成分的含量测定方法,为评价君药附子的药效学作用提供了依据。样品经中空纤维液相微萃取(HF-LPME)进行纯化富集,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相乙腈-10 mmol.L-1碳酸氢铵溶液(pH 10),流速0.45 mL.min-1,梯度洗脱。电喷雾电离(ESI)、多反应监测(MRM)方式进行含量测定。结果表明,乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在0.1～100 ng.L-1线性关系良好,r>0.999,检测限分别为0.03,0.03,0.02 ng.L-1,平均加样回收率分别为100.1%,97.4%,97.5%,RSD分别为1.2%,1.1%,1.5%。该方法保证了参附注射液的用药安全,为正确评价附子的君药药效学作用提供了科学依据,为含有附子的中药制剂的质量控制提供了可靠方便而实用的检测手段。

关键词：乌头碱次乌头碱新乌头碱参附注射液中空纤维液相微萃取超高效液相色谱质谱

乌头碱、新乌头碱和次乌头碱代谢产物研究进展

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江西中医药 2024年第6期55卷 71-75页

作者：翟兴英杨文博李洋李佳曹浩时李冰涛江西中医药大学南昌330004

乌头类中药(川乌、附子和草乌等)被广泛地应用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛及麻醉止痛等。然而此类中药有大毒,其毒性成分主要为乌头碱、新乌头碱、次乌头碱,这些成分也是有效成分。为了对乌头类中药潜在的毒副作用与药效... 详细信息

乌头类中药(川乌、附子和草乌等)被广泛地应用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛及麻醉止痛等。然而此类中药有大毒,其毒性成分主要为乌头碱、新乌头碱、次乌头碱,这些成分也是有效成分。为了对乌头类中药潜在的毒副作用与药效机制进行更深入的研究,通过查阅相关资料对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的代谢产物进行综述。

关键词：乌头碱新乌头碱次乌头碱代谢产物

乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物在中毒家兔体内的死后再分布研究

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刑事技术 2023年第3期48卷 235-240页

作者：路晓君管青林梁嘉豪师燕华李蕊娟贠克明郭中元崔海燕山西医科大学法医学院法庭毒物分析公安部重点实验室山西晋中030600 绍兴文理学院医学院浙江绍兴312000

研究乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱和次乌头原碱)在中毒家兔体内的死后再分布规律,为乌头属中药中毒案件的检材选取提供依据。家兔18只,随机分成6组... 详细信息

研究乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱和次乌头原碱)在中毒家兔体内的死后再分布规律,为乌头属中药中毒案件的检材选取提供依据。家兔18只,随机分成6组,采用灌胃方式建立乌头碱中毒家兔模型,2 h后气管夹闭处死,仰卧位置于25℃条件下保存,分别于死后0、4、8、12、24、48 h进行解剖取材,取心血、外周血、尿液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏,采用高效液相色谱-串联质谱法检测各生物检材中不同物质的含量。结果表明:尿液中苯甲酰新乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱48 h的含量分别是0 h的2.39倍和2.51倍;心血和外周血中苯甲酰新乌头原碱含量呈上升趋势,且在外周血中含量远高于心血;各物质在脾脏、肝脏、肾脏中的含量明显高于心脏和肺脏,次乌头碱和苯甲酰次乌头原碱在三者的含量呈上升趋势,且在脾脏中最高,12 h后苯甲酰新乌头原碱在三者中均呈上升趋势。乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物在家兔体内存在死后再分布现象,尿液、脾脏、肝脏、肾脏可作为乌头属中药中毒的优选毒物分析检材。

关键词：法医毒物学乌头碱新乌头碱次乌头碱代谢物死后再分布

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

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中药材 2011年第6期34卷 937-942页

作者：沈红朱玲英姚楠武洁江苏省中医药研究院江苏省现代中药制剂工程研究技术中心江苏南京210028

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合... 详细信息

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。

关键词：乌头碱新乌头碱次乌头碱 HPLC-MS法药动学附子甘草附子配伍

附子中的新乌头碱对K562细胞增殖和凋亡的影响

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北京中医药大学学报 2015年第7期38卷 467-472,I0002页

作者：关心杨同华张爱玲苏勉诚赵仁彬张超然贺利利云南省第一人民医院血液科云南650032

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞，电子显微镜下观察白血病细胞形态变... 详细信息

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞，电子显微镜下观察白血病细胞形态变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期状态、凋亡的情况。结果高效液相色谱法检测出附子中含有新乌头碱。25—50mg／L的新乌头碱对K562细胞增殖有明显的抑制作用，并呈剂量和时间依赖性（P〈0．05）。K562细胞在形态学上有明显的凋亡变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期和凋亡状态。S期比例上升，G。期比例降低（P〈0．05）。25～50mg／L的新乌头碱能不同程度地诱导K562细胞发生凋亡（P〈0．05）。结论附子中的新乌头碱具有抑制白血病K562细胞增殖、诱导其细胞凋亡的作用。

关键词：新乌头碱 K562细胞细胞增殖细胞周期细胞凋亡

中药附子成分新乌头碱对PML高表达的BCR-ABL阳性白血病细胞的作用研究

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中药附子成分新乌头碱对PML高表达的BCR-ABL阳性白血病细胞的作用...

作者：顾世安昆明理工大学

学位级别：硕士

背景:白血病通常被认为是一种克隆性干细胞疾病,在这种疾病中,自我更新的白血病干细胞(Leukemia stem cells,LSC)被认为是启动肿瘤形成的一个重要因素。目前,使用细胞毒性药物来破坏癌细胞的化学疗法是最有效的治疗方法。然而,多药耐药... 详细信息

背景:白血病通常被认为是一种克隆性干细胞疾病,在这种疾病中,自我更新的白血病干细胞(Leukemia stem cells,LSC)被认为是启动肿瘤形成的一个重要因素。目前,使用细胞毒性药物来破坏癌细胞的化学疗法是最有效的治疗方法。然而,多药耐药性(Multidrug resistance,MDR)是肿瘤难以治愈的重要原因,是癌症治疗中亟需解决的主要问题。其中,白血病干细胞的存在是导致白血病多药耐药性产生和疾病复发的主要原因。因此,寻找针对白血病干细胞(LSCs)的新型治疗方法是治愈白血病的关键。早幼粒细胞白血病蛋白(Promyelcocytic leukemia protein,PML)基因在20世纪90年代初首次被描述为急性早幼粒细胞白血病中的染色体易位t(15;17)的靶点,它产生了致癌的PML-视黄酸受体α(RARα)融合蛋白(PML-RARα)。据报道,PML在MDR慢性粒细胞性白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)中过表达。因此,PML可能是MDR白血病中的关键分子。并且,PML在调节对抗癌药物的抗性中起重要作用。然而,PML对白血病细胞的耐药调节机制仍然不是很清楚。为了解决多药耐药性的问题,近年来研究发现,新乌头碱是中药附子中存在的主要生物活性成分,具有强效镇痛,抗风湿及抗肿瘤等药理作用。前期的研究已经表明新乌头碱对白血病细胞K562的生长有明显的抑制作用。因此,本实验主要以耐药的慢性髓系白血病细胞系K562-ADR为研究对象,探讨PML基因是否参与CML耐药性的发生。并以此为基础,进一步探讨通过新乌头碱的作用能否降低CML细胞系K562-ADR耐药性。目的:探讨BCR-ABL阳性的慢性髓系白血病细胞K562和K562-ADR中的PML的表达量;并探索中药附子成分新乌头碱对K562-ADR细胞耐药性的影响。方法:首先将两种慢性髓系白血病细胞K562和K562-ADR培养一段时间使其稳定,并用CCK8法检测K562-ADR细胞株对ADR(阿霉素)的耐药性。其次,利用RQ-PCR和Western Blot技术检测K562和K562-ADR细胞之间的PML表达量。第三,采用CCK8法检测不同浓度的新乌头碱作用于K562和K562-ADR细胞株24h、48h和72h后的生长抑制率,并选取50μg/mL、75μg/ml和100μg/ml三种新乌头碱浓度用于后续实验。第四,将实验分为五组:A:K562-ADR;B:K562-ADR+ADR;C:K562-ADR+50μg/ml新乌头碱;D:K562-ADR+75μg/ml新乌头碱;E:K562-ADR+100μg/ml新乌头碱;阿霉素均为3μg/ml,每孔加入5×10个细胞,并加入药物分别处理细胞48h和72h后,用RQ-PCR和Western Blot技术检测PML的表达量。第五,将实验分为另外五组:A:K562-ADR;B:K562-ADR+ADR;C:K562-ADR+50μg/ml新乌头碱+ADR;D:K562-ADR+75μg/ml新乌头碱+ADR;E:K562-ADR+100μg/ml新乌头碱+ADR;阿霉素均为3μg/ml,每孔加入5×10个细胞,并加入药物处理细胞48h后,用RQ-PCR和Western Blot技术检测PML的表达量。第六,将实验分为七组:A:K562 B:K562+ADR C:K562-ADR D:K562-ADR+ADR E:K562-ADR+50μg/ml新乌头碱+ADR F:K562-ADR+75μg/ml新乌头碱+ADR G:K562-ADR+100μg/ml新乌头碱+ADR;阿霉素均为3μg/ml,每孔加入1500个细胞,并加入药物分别处理细胞24h、48h和72h后,用CCK8法检测细胞抑制率。最后,再将实验分为四组:A:K562-ADR+ADR;B:K562-ADR+50μg/ml新乌头碱+ADR;C:K562-ADR+75μg/ml新乌头碱+ADRD:K562-ADR+100μg/ml新乌头碱+ADR;阿霉素均为3μg/ml,每孔加入5×10个细胞,并加入药物处理48h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果如下:通过CCK8法验证K562-ADR的耐药性,结果发现阿霉素对K562呈浓度依赖性,随着阿霉素浓度的增加,抑制作用增强,IC为2.521μg/mL。然而,阿霉素对K562/ADR没有浓度依赖性,抑制作用随着阿霉素浓度的增加没有显著变化,并且没有一定的IC;通过RQ-PCR和Western blot检测PML在K562-ADR细胞内的表达情况,结果发现K562-ADR细胞中的PML表达高于K562细胞;通过CCK8法检测不同浓度的新乌头碱对K562和K562-ADR两种细胞增殖的抑制状况,结果发现,在50-100μg/ml的浓度范围内,新乌头碱对K562和K562-ADR细胞增殖的抑

关键词：白血病早幼粒细胞白血病蛋白(PML) 慢性粒细胞白血病 BCR-ABL 新乌头碱