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中国修复重建外科杂志 2014年第3期28卷 366-370页

作者：李晋辉陈大鹏唐军伍金林屈艺母得志四川大学华西第二医院儿科四川大学出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041

目的探讨星形胶质细胞与神经元共培养系统中，缺氧缺血后星形胶质细胞表达的整合素β8对神经元凋亡的影响。方法取新生1～3 d SD大鼠及孕16 d SD大鼠的胎鼠脑皮质，分别分离培养星形胶质细胞及神经元，免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度... 详细信息

目的探讨星形胶质细胞与神经元共培养系统中，缺氧缺血后星形胶质细胞表达的整合素β8对神经元凋亡的影响。方法取新生1～3 d SD大鼠及孕16 d SD大鼠的胎鼠脑皮质，分别分离培养星形胶质细胞及神经元，免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。取缺氧缺血培养复氧后12 h、1 d、2 d星形胶质细胞（实验组）以及正常星形胶质细胞（对照组），RT-PCR检测细胞整合素β8表达变化。利用整合素β8小干扰RNA （small interfering RNA，siRNA）感染抑制星形胶质细胞整合素β8表达，实时荧光定量PCR检测其抑制效率。取正常神经元及星形胶质细胞共培养（共培养缺氧缺血组）、经整合素β8 siRNA感染后2 d的星形胶质细胞与正常神经元共培养（β8 RNA干扰组）以及正常神经元（单纯缺氧缺血组），行体外模拟缺氧缺血处理；复氧后1 d收集细胞，TUNEL染色法检测整合素β8对神经元凋亡的影响；以正常神经元作为对照组。结果免疫细胞化学染色鉴定示，星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及神经元神经核阳性率均达90%以上。与对照组相比，实验组星形胶质细胞中整合素β8 mRNA表达在复氧后12 h即增加，1 d时达峰值，2 d时仍维持较高水平；各时间点实验组与对照组比较及实验组复氧后各时间点间比较，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）；整合素β8 siRNA感染后，实验组整合素β8 mRNA表达明显降低，感染后2 d降至最低值（P 〈 0.05）。TUNEL检测示，与对照组相比，单纯缺氧缺血组、共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组神经元凋亡明显增多（P 〈 0.05）；共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组细胞凋亡指数较单纯缺氧缺血组明显降低，共培养缺氧缺血组低于β8 RNA干扰组，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。结论缺氧缺血后，星形胶质细胞中整合素β8表达增高，神经元凋亡率下降，对受损神经元具有明显保护作用。

关键词：缺氧缺血性脑病整合素β8 星形胶质细胞神经元大鼠

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以慢病毒为载体的整合素β8 RNAi在新生鼠脑内干扰效率的研究

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四川大学学报（医学版） 2018年第3期49卷 325-330页

作者：唐彬秩屈艺赵凤艳童煜王德健四川省医学科学院.四川省人民医院/电子科技大学临床医学院儿科成都610072 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学) 成都610041 成都中医药大学药学院药理学教研室成都610075

目的制备稳定表达pSicoR-β8 shRNA的慢病毒载体系统,并评估其在新生鼠脑内RNA干扰(RNAi)效率。方法将慢病毒表达载体pSicoR-β8 shRNA、pSicoR-对照序列与慢病毒包装质粒系统pDM2G、g/pRRE和pRSV Rev分别进行扩增及质粒酶切鉴定,然后... 详细信息

目的制备稳定表达pSicoR-β8 shRNA的慢病毒载体系统,并评估其在新生鼠脑内RNA干扰(RNAi)效率。方法将慢病毒表达载体pSicoR-β8 shRNA、pSicoR-对照序列与慢病毒包装质粒系统pDM2G、g/pRRE和pRSV Rev分别进行扩增及质粒酶切鉴定,然后共转染293T包装细胞株,通过293T细胞的包装和分泌以收集携带目的干扰片段的慢病毒颗粒。利用PEG-it病毒浓缩试剂进行浓缩,50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。将浓缩后的慢病毒颗粒通过侧脑室注射对新生SD乳鼠中枢神经系统野生表达的整合素β8进行干扰,荧光显微镜下观察慢病毒侧脑室注射后脑组织中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,结合RT-PCR和Western blot方法检测β8 mRNA和蛋白在干预后表达水平的变化,以评估RNAi效率及选择最佳干预时间。结果质粒扩增及酶切结果显示各质粒片段大小分别与质粒图谱大小一致,浓缩后测得的病毒滴度为LV-对照序列:1.0×10~8 PFU/mL,LV-β8 shRNA:5.0×10~8 PFU/mL。慢病毒侧脑室注射后1d,侧脑室周围即可观察到携带GFP的慢病毒整合到宿主细胞基因组并发出绿色荧光,注射后2d、3d和5d可在脑组织切片中观察到较强的绿色荧光。β8 mRNA表达水平在RNAi后1~3d出现降低(P8 mRNA抑制率约为56%。β8蛋白表达变化趋势与β8 mRNA表达变化趋势基本一致,RNAi后第3天达到最大抑制作用,其β8蛋白抑制率约为51%。结论成功获得滴度达到体内实验要求的含有β8 shRNA的慢病毒颗粒,并具有较好的体内干扰活性,为进一步研究整合素β8在新生鼠脑组织中的生理功能奠定了基础。

关键词：整合素β8 慢病毒载体 RNAi 体内干扰

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ITGβ8在胃癌恶性进展中的临床价值：基于生物信息学与实验研究

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海南医学院学报 2024年

作者：章敬尧相世龙李春丫傅军蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科

目的：运用生物数据库与细胞实验探讨整合素β8（integrinβ8，ITGβ8）在胃癌（gastriccancer，GC）中的表达及临床价值。方法：基于TIMER2.0、UALCAN数据库检索ITGβ8在泛癌中的表达；GEO、GEPIA、HPA数据集检索ITGβ8在GC中的表达水... 详细信息

目的：运用生物数据库与细胞实验探讨整合素β8（integrinβ8，ITGβ8）在胃癌（gastriccancer，GC）中的表达及临床价值。方法：基于TIMER2.0、UALCAN数据库检索ITGβ8在泛癌中的表达；GEO、GEPIA、HPA数据集检索ITGβ8在GC中的表达水平；利用Kaplan-MeierPlotter数据库预测ITGβ8与GC患者的预后；UALCAN数据库分析ITGβ8与GC患者的肿瘤分期；生物富集数据集检索GC中ITGβ8的生物信号通路；通过IHC与qRT-PCR检测GC组织中ITGβ8的表达；采用siRNA转染的细胞实验研究ITGβ8对GC细胞表型的影响；Westernblot检测上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达。结果：生物数据库显示ITGβ8在泛癌中表达较高且在GC中表达显著上调（P8提示着GC患者的预后不良；UALCAN数据库显示ITGβ8的表达与GC患者肿瘤分期与转移密切相关（P8参与GC进展中多个生物过程及信号通路（P8在GC组织中表达更高（P8、细胞划痕、Transwell实验提示siRNA-ITGβ8组MKN-74细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显下调（P8组MKN-74细胞的凋亡能力显著增加（P8组细胞的E-cadherin蛋白表达明显上调（P8在GC中高表达，且与GC的发生发展密切相关，提示ITGβ8可作为GC早期诊断和预后标志物。

关键词：胃癌整合素β8 生物信息学细胞实验预后

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miR-26a靶向ITGβ8调控JAK2/STAT3信号通路促进肺癌细胞转移的作用机制研究

miR-26a靶向ITGβ8调控JAK2/STAT3信号通路促进肺癌细胞转移的作...

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作者：宋倩倩天津医科大学

学位级别：硕士

【目的】肺癌是全球范围内癌症新发病例和死亡病例较多的恶性肿瘤之一。肺癌极易发生转移,预后差,接受治疗后5年生存率不足1/3。大约80%的肺癌为非小细胞肺癌。miRNAs是一类由20-22个碱基组成的小RNA,它们参与包括肺癌在内的许多恶性肿... 详细信息

【目的】肺癌是全球范围内癌症新发病例和死亡病例较多的恶性肿瘤之一。肺癌极易发生转移,预后差,接受治疗后5年生存率不足1/3。大约80%的肺癌为非小细胞肺癌。miRNAs是一类由20-22个碱基组成的小RNA,它们参与包括肺癌在内的许多恶性肿瘤的转录后基因调控。已有研究报道miR-26a可以影响肿瘤细胞的侵袭和转移,但miR-26a对肺癌细胞的影响及作用机制尚不明确。本文致力于明确miR-26a对肺癌细胞体内外的增殖能力和侵袭转移能力的影响,并阐明其作用机制,进而为肺癌的诊断及临床治疗提供依据。【方法】1.运用瞬时转染的方法,在非小细胞肺癌细胞系A549、H1299和H661中过表达或降表达miR-26a,然后通过CCK-8、划痕实验、Transwell实验确定miR-26a对NSCLC细胞的增殖和侵袭转移能力的影响。2.使用生物信息学软件对miR-26a的靶基因进行分析预测,拟定ITGβ8作为miR-26a作用的靶点。通过构建ITGβ8的3’-UTR区荧光质粒,采用双荧光素酶报告基因实验和Western Blot方法分别从mRNA水平和蛋白水平验证ITGβ8是否为miR-26a的靶基因。3.对NSCLC细胞系A549、H1299和H661中ITGβ8进行过表达和降表达,采用划痕实验和Transwell实验研究ITGβ8对NSCLC细胞A549、H1299和H661迁移侵袭的影响。4.运用RT-PCR方法检测10个肺癌组织临床样本中ITGβ8和miR-26a的相对含量,并利用SPSS进行基因相关性分析;对NSCLC细胞系A549、H1299和H661中ITGβ8进行过表达,检测miR-26a的相对含量,确定ITGβ8对miR-26a是否具有负反馈调节作用。5.运用RT-PCR和Western Blot方法检测转移相关基因(CD44和MMP-9)及EMT相关蛋白(E-cadherin和Snail)的转录或表达水平,从而确定miR-26a对肿瘤转移相关基因及EMT相关蛋白的影响。采用Western Blot方法检测JAK2/STAT3通路中相关蛋白的表达水平,探究miR-26a调节NSCLC细胞迁移侵袭能力的分子机制。6.利用慢病毒包装系统构建miR Control和miR-26a的A549表达细胞系,经嘌呤霉素药物筛选得到A549-miR-Control-luc和A549-miR-26a-luc稳定表达细胞系。用以上稳定表达细胞系建立裸鼠皮下肿瘤模型,运用活体成像体统对原位瘤及转移瘤进行实时检测,研究miR-26a对体内肺生长及转移的影响。采用Western Blot方法检测JAK2/STAT3通路中相关蛋白的表达水平,明确miR-26a影响肺癌生长和转移的分子机制。【结果】***-26a对NSCLC细胞系A549、H1299、H661的增殖没有显著提高,然而明显促进肺癌细胞迁移侵袭能力。***β8是miR-26a的靶基因。***β8可以抑制NSCLC细胞系A549、H1299、H661的侵袭和转移,miR-26a和ITGβ8过表达质粒共转染的结果表明ITGβ8可以部分削弱miR-26a促进NSCLC细胞侵袭迁移的能力。***β8是miR-26a的作用靶基因。在肺癌组织标本中,miR-26a的水平和ITGβ8的水平成负相关性;在NSCLC细胞中,ITGβ8过表达可以负反馈调控miR-26a的表达。***-26a可以提高NSCLC细胞系A549、H1299、H661中转移相关基因CD44和MMP-9的转录水平;增加E-cadherin和Snail的表达进而促进NSCLC细胞的EMT。miR-26a增强JAK2/STAT3通路中p-JAK2、p-STAT3、MMP-2蛋白的表达,激活JAK2/STAT3信号通路,促进NSCLC细胞的转移。进一步研究显示靶基因ITGβ8介导miR-26a促进NSCLC细胞转移的作用。6.体内研究表明,miR-26a促进裸鼠体内肿瘤的生长和转移。机制研究显示,miR-26a调控转移相关基因MMP-2和C-myc,激活JAK2/STAT3信号通路。【结论】***-26a促进NSCLC细胞体外的侵袭迁移,同时促进NSCLC细胞的体内生长及转移。***β8是miR-26a的靶基因。ITGβ8介导了miR-26a促进NSCLC细胞侵袭转移的作用。3.机制研究显示,miR-26a通过调控转移相关基因,促进NSCLC细胞发生上皮间质转化,激活JAK2/STAT3信号通路,促进NSCLC细胞侵袭转移。***-26a有望成为肺癌侵袭转移的治疗新靶点。

关键词：肺癌 miR-26a 整合素β8 转移 JAK2/STAT3

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