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整合素α5β1在Hartley豚鼠自发性骨关节炎关节软骨退变中的作用研究

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现代医药卫生 2023年第18期39卷 3082-3088页

作者：李远李忠刘俊才遂宁市中心医院骨科中心三病区-关节外科四川遂宁629000 西南医科大学附属医院骨科/四川省骨科置入器械研发应用技术工程实验室四川泸州646000

目的观察豚鼠原发性骨关节炎(OA)模型中疾病进展的相关病理改变,探究整合素α5β1对OA的关节软骨退变的初步作用,为OA的治疗提供参考。方法选取3周龄的SPF级Hartely雌性豚鼠24只,进行1周的适应性喂养并记录初始体重后对其进行编号,然后... 详细信息

目的观察豚鼠原发性骨关节炎(OA)模型中疾病进展的相关病理改变,探究整合素α5β1对OA的关节软骨退变的初步作用,为OA的治疗提供参考。方法选取3周龄的SPF级Hartely雌性豚鼠24只,进行1周的适应性喂养并记录初始体重后对其进行编号,然后采用随机分配法将24只豚鼠分为基线组、对照组、ATN-161治疗组、盐水治疗组4组,每组6只。其中基线组豚鼠在实验开始时处死,对照组豚鼠正常饲养3月龄时处死,ATN-161豚鼠在正常饲养3个月后开始予以ATN-161腹腔注射1 mg/(kg·3 d)直至3个月后处死,生理盐水治疗组豚鼠在正常饲养3个月后开始予以生理盐水腹腔注射1 mg/(kg·3 d)直至3个月后处死。取所有处死豚鼠的膝关节软骨标本,对其进行苏木精-伊红(HE)染色,观察并使用Mankin评分评估软骨退变程度;记录免疫组织化学染色分析力学传导分子(整合素α5β1)、氧化应急指标观察[基质金属蛋白酶(MMP)-13]以及细胞凋亡指标(Bax、bcl-2)在软骨中的表达情况。结果HE染色组织学和Mankin评分结果显示,对照组豚鼠在3月龄时即发生了OA样改变,并且随着月龄的增长退变逐渐加重,通过ATN-161治疗后,ATN-161治疗组在6月龄时Mankin评分明显降低(P5)。免疫组化结果证实,α5β1的表达在基线组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),之后随着月龄的增加,生理盐水治疗组中整合素α5β1的表达高于对照组(P5):与生理盐水治疗组比较,ATN-161组治疗后能明显降低整合素α5β1的表达(P5);随着豚鼠月龄的增加,MMP-3在软骨中的表达增多,对照组明显高于BL组,生理盐水组显著高于对照组(P5);细胞凋亡(Bax、bcl-2)免疫组化指标均显示:基线组、对照组、ATN-161治疗组三组之间差异有统计学意义(P5)。其中Bax在对照组中表达量最低,基线组中最高,ATN-161组表达量明显高于生理盐水治疗组(P5)。此外,bcl-2在对照组表达量最高,基线组中最低,ATN-161治疗组表达量明显低于生理盐水治疗组(P5)。结论3月龄DH豚鼠即具有OA表现且退变随着年龄的增长进行性加重。腹腔注射ATN-161[1 mg/(kg·3 d)]可通过抑制软骨内力学传导(整合素α5β1)、氧化应急速度下降(MMP-13下调)、细胞凋亡指标Bax上调、bcl-2下调阻止关节软骨的退变,表明ATN-161可能是针对整合素α5β1的一种潜在治疗药物。

关键词：整合素α5β1 豚鼠骨关节炎软骨

整合素α5β1在正畸大鼠牙龈组织改建过程中力学传导机制的初步研究

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整合素α5β1在正畸大鼠牙龈组织改建过程中力学传导机制的初步研...

作者：徐若君广西医科大学

学位级别：硕士

目的:通过构建正畸大鼠牙龈改建模型,在前期体外实验结果的基础上进一步探讨整合素α5β1参与正畸牙龈改建过程中力学信号传导的作用机制,初步研究正畸过程中牙龈组织感应和传导力学信号、引起组织改建的相关过程。方法:1.选取120只8-1... 详细信息

目的:通过构建正畸大鼠牙龈改建模型,在前期体外实验结果的基础上进一步探讨整合素α5β1参与正畸牙龈改建过程中力学信号传导的作用机制,初步研究正畸过程中牙龈组织感应和传导力学信号、引起组织改建的相关过程。方法:1.选取120只8-10周龄SPF级雄性SD大鼠(由广西医科大学动物实验中心提供)进行实验,实验分为两个部分。第一部分构建正畸牙龈改建动物模型,随机分为2组(各30只):A组-加力组、B组-不加力组(仅安放加力装置,不进行加力);通过将恒力Ni Ti拉簧固定于双侧上颌第一磨牙,以上切牙为支抗,50g力近中牵引第一磨牙,从而构建正畸牙龈改建模型。第二部分构建ATN-161药物干预的正畸牙龈改建动物模型,随机分为2组(各30只):C组-药物干预组、D组-非药物干预组(假处理组),分别于两组大鼠上颌第一磨牙近中局部注射ATN-161(2mg/kg)溶液和等量的生理盐水。分别于安放加力装置后第1、3、7、14、21、28天处死大鼠并取材和制作标本,每个时间点各处死5只。2.苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察不同处理条件下牙龈组织的形态学和病理学变化。3.抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phospha-tase,TRAP)染色判断模型构建情况。4.采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-q PCR)及免疫组化(immunohistochemistry,IHC)染色观测上颌第一磨牙近中牙龈组织中FN、整合素α5、整合素β1、FAK、TGF-β1及COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达情况。应用Image-pro-plus6.0图像分析系统对IHC结果进行蛋白含量的半定量分析,SPSS25.0统计软件和Graphpad prism绘图软件分析和处理实验结果。结果:1.成功构建正畸大鼠牙龈改建模型及其ATN-161药物干预模型。2.HE染色结果显示:A组大鼠在明显的牙移动后,牙龈顶部呈现膨大外观,出现增生,其底部缩窄,类似于“蒂部”;其内胶原纤维排列紊乱,部分大鼠的龈沟上皮出现上皮钉突,结缔组织内少量炎性细胞浸润,其牙龈增生部位出现新生血管。B组大鼠牙龈组织未见明显异常,胶原纤维排列整齐,龈沟上皮未见明显异常,结缔组织内少量炎症细胞浸润。C组和D组大鼠牙龈组织变化差异不大,除结缔组织底部出现大量炎症细胞浸润外,其余变化与A组相似。3.TRAP染色结果显示:A、C、D组大鼠上颌第一磨牙近中面牙槽骨从加力第三天起可见破骨细胞存在;而B组大鼠在牙根周围牙槽骨少见破骨细胞。4.RT-q PCR结果显示:(1)正畸力作用力下,大鼠牙龈组织中整合素α5、FAK、TGF-β1和COL-Ⅰ的m RNA表达量在加力7天和14天时均显示上调,而整合素β1的m RNA表达量在加力14天时显示上调,差异有统计学意义(P5);FN的m RNA表达量变化没有统计学意义(P>0.05);(2)ATN-161对正畸牙龈改建模型进行干预后,大鼠牙龈组织中,整合素α5的m RNA表达量在1天、3天、7天、14天和21天时显示下调,整合素β1的m RNA表达量在14天时显示下调,TGF-β1的m RNA表达量在3天和14天时显示下调,COL-Ⅰ的m RNA表达量在1天、7天、14天和21天时显示下调,差异有统计学意义(P5);FN和FAK的m RNA表达量变化没有统计学意义(P>0.05)。5.免疫组化结果显示:(1)正畸力作用下,大鼠牙龈组织中,FN的蛋白表达量在加力14天时升高,整合素α5、整合素β1、COL-Ⅰ的蛋白表达量分别在加力7天、14天和21天时升高,FAK、TGF-β1的蛋白表达量分别在加力7天和14天时升高,差异有统计学意义(P5);(2)ATN-161进行干预后,正畸大鼠牙龈组织在受力过程中,FN蛋白表达量在加力7天时降低,整合素α5、TGF-β1和COL-Ⅰ的蛋白表达量分别在加力7天、14天和21天时降低,整合素β1的蛋白表达量在加力7天和14天时降低,FAK的蛋白表达量在加力14天时降低,差异有统计学意义(P5)。结论:FN/整合素α5β1/FAK通路和TGF-β1共同参与了正畸过程中牙龈组织的力学信号传导和基质纤维化过程,且在此过程中TGF-β1的活化受到整合素α5β1功能状态的影响。

关键词：正畸动物模型整合素α5β1 牙龈改建力学信号传导

整合素α5β1在膝骨关节炎不同退变程度关节软骨中的差异性表达

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中国组织工程研究 2017年第8期21卷 1155-1160页

作者：刘俊才陈友霞李忠吴绍军左银龙李文何克张志伟李仁明西南医科大学附属医院骨关与节外科四川省泸州市646000 西南医科大学附属医院ICU 四川省泸州市646000

背景:有研究提示整合素α5β1可能与发育性髋关节发育不良髋臼软骨的退变相关。目的:观察整合素α5β1在膝骨关节炎不同退变程度关节软骨中的表达情况。方法:选取全膝关节置换患者股骨内外髁负重面不同退变程度关节软骨(75个标本),结合B... 详细信息

背景:有研究提示整合素α5β1可能与发育性髋关节发育不良髋臼软骨的退变相关。目的:观察整合素α5β1在膝骨关节炎不同退变程度关节软骨中的表达情况。方法:选取全膝关节置换患者股骨内外髁负重面不同退变程度关节软骨(75个标本),结合Bobinac分期,将软骨标本分为4组,正常组(6个标本)、轻度退变组(24个标本)、中度退变组(26个标本)、重度退变组(19个标本)。采用Real-time PCR、免疫组织化学及Western blot分别检测整合素α5β1在4组标本中的表达情况。结果与结论:(1)各种检测方法结果一致,整合素α5β1在4组标本中均有表达,正常组呈低表达,轻、中度退变组表达逐渐增强,重度退变组表达较前3组明显增强,组间差异有显著性意义(P5);(2)结果说明,整合素α5β1在膝骨关节炎不同退变程度关节软骨中存在差异性表达;关节软骨退变越重,整合素α5β1在软骨中的表达越强。

关键词：整合素α5β1 骨关节炎骨关节炎,膝软骨,关节组织工程组织构建软骨组织工程膝骨关节炎整合素关节软骨

整合素α5β1-Ang1/Tie2受体交互对话调节缺血性脑卒中后脑内皮细胞的反应

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整合素α5β1-Ang1/Tie2受体交互对话调节缺血性脑卒中后脑内皮细...

作者：汪璐宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的我们之前的研究已经证实在脑缺血后,脑血管生长因子-血管生成素-1（Angiopoietin-1,Ang1）和促血管新生分子-整合素α5β1均在脑血管上表达上调,这有助于缺血性脑卒中后内源性血管新生,并具有血管保护作用。然而,脑缺血后血管内皮... 详细信息

目的我们之前的研究已经证实在脑缺血后,脑血管生长因子-血管生成素-1（Angiopoietin-1,Ang1）和促血管新生分子-整合素α5β1均在脑血管上表达上调,这有助于缺血性脑卒中后内源性血管新生,并具有血管保护作用。然而,脑缺血后血管内皮细胞中Ang1与整合素α5β1的确切关系仍不清楚。方法对培养的脑内皮细胞（Brain endothelial cells,BECs）行氧-葡萄糖剥夺/恢复（Oxygen glucose deprivation/restoration,OGD/R）模拟在体脑缺血再灌注损伤,用线栓法建立一侧大脑中动脉栓塞（MCAO）缺血性脑卒中小鼠模型;以小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染敲减BECs上相关基因,或经由Ang1刺激BECs后观察下游分子事件和功能的变化;利用免疫荧光染色检测小鼠缺血半暗带脑血管上整合素α5与磷酸化酪氨酸激酶受体2（Phosphorylated tyrosine kinase receptor 2,P-Tie2）、酪氨酸激酶受体2（tyrosine kinase receptor 2,Tie2）共表达情况;用蛋白质印迹法（Western blot）检测脑缺血后的BECs中Ang-1、Tie2、整合素α5β1及其下游信号分子的表达;采用体外划痕实验和小管形成实验检测细胞迁移与管腔形成。结果免疫荧光实验证实整合素α5β1与Tie2/P-Tie2在缺血半暗带的脑血管上共表达。体外研究表明,OGD/R诱导BECs上Ang1受体Tie2表达上调,在表达方式上与OGD/R反应中整合素α5和Ang1的变化相似,同时还伴随着Tie2及下游效应分子-局部粘着斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）和蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）的激活增加。敲减整合素α5显著抑制BECs上OGD/R诱导的Tie2受体的激活,而以Ang1刺激OGD处理后的BECs,可促进整合素α5以及Tie2下游转录因子-E-26特异性转录因子（E26 transformation-specific-1,Ets-1）的表达增加。与此一致的是,敲减BECs上Ets-1基因后,则显著减弱了Ang1刺激介导的整合素α5的上调。在功能上,Ang1可诱导脑缺血后BECs的迁移加快,并促进管腔形成,但这些作用因BECs上整合素α5的表达下降而被抑制。结论我们的研究表明,在脑缺血后的BECs细胞上Ang-1/Tie2系统与整合素α5β1交互对话有助于脑缺血后内源性的血管保护反应。

关键词：葡萄糖剥夺/恢复小鼠脑内皮细胞整合素α5β1 血管生成素1（Ang1）酪氨酸激酶受体2（Tie2）

整合素α_5β_1蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

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临床与实验病理学杂志 2014年第10期30卷 1127-1130页

作者：王闯李键淇齐洁敏河北承德医学院病理学教研室承德067000

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervix squamous cell carcinoma,CSCC)中整合素α5β1蛋白和mRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法、RT-PCR技术检测60例CSCC及40例子宫颈正常组织中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达... 详细信息

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervix squamous cell carcinoma,CSCC)中整合素α5β1蛋白和mRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法、RT-PCR技术检测60例CSCC及40例子宫颈正常组织中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达。结果 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA表达均高于子宫颈正常组织,差异有统计学意义(P5);整合素α5β1蛋白及mRNA的表达均与CSCC分化程度、pTNM分期、淋巴结转移、浸润深度有相关性(P5),与患者年龄无相关性(P>0.05)。结论 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达与其生长、侵袭与转移密切相关。采用免疫组化SP法与RT-PCR技术联合检测CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA,有望成为评估CSCC恶性程度、侵袭、转移和临床预后的指标。

关键词：子宫颈肿瘤鳞状细胞癌整合素α5β1 免疫组织化学 RT-PCR

整合素α5β1在人冠状动脉粥样硬化斑块的表达及意义

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整合素α5β1在人冠状动脉粥样硬化斑块的表达及意义

作者：马占姝大连医科大学

学位级别：硕士

背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）引发的冠心病发病率逐年增高,已经严重危害生命健康。本组相关实验表明在AS发生及进展过程中与一些因子的表达有明显的相关性,如妊娠相关蛋白-A、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、白细胞介素... 详细信息

背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）引发的冠心病发病率逐年增高,已经严重危害生命健康。本组相关实验表明在AS发生及进展过程中与一些因子的表达有明显的相关性,如妊娠相关蛋白-A、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、白细胞介素1β、基质金属蛋白酶-9/12、基质金属蛋白酶抑制剂-1等。纤连蛋白（Fibronectin,Fn）与其受体整合素α5β1（Integrinα5β1）因在多种恶性肿瘤细胞的迁移、增殖中发挥重要生物学作用而备受关注。目前尚未有冠状动脉粥样硬化斑块局部整合素α5β1、纤连蛋白（Fn）表达情况的分析与报道。目的:通过检测CD68、actin、Fn与Integrinα5β1在主动脉、冠状动脉组织中的表达情况,分析Fn与Integrinα5β1与动脉粥样硬化发生发展的关系。方法:本次实验将获取的尸检蜡块标本采用免疫组织化学染色的方法,检测CD68,actin,Fn与Integrinα5β1在主动脉、冠状动脉组织中的表达情况。弹力纤维染色及NIH Scion Image（60.1）软件的检测确定冠脉狭窄程度,弹力纤维染色、CD68与actin用以辅助定位。依据粥样硬化斑块的不同时期分为脂纹组及粥样硬化斑块组;依据狭窄程度将冠脉分为A组（＜25%）、B组（25%-50%）、C组（50%-75%）、D组（＞75%）;依据是否有急性心梗发作的病史将病例分为ACS组、陈旧心梗组及正常组。结果:1.主动脉与冠状动脉粥样硬化斑块组平滑肌内膜近内弹力板处Integrinα5β1的表达强于中膜平滑肌（P=0.003,P=0.000）。2.主动脉近内弹力板处平滑肌Integrinα5β1表达脂纹组强于粥样硬化斑块组（P=0.000）。3.已发生动脉粥样硬化者,主动脉与冠状动脉中膜平滑肌Integrinα5β1表达强度无明显差别（P=0.227）,但两者表达强度均强于正常组（P=0.008,P=0.012）。4.不同狭窄程度冠状动脉非斑块处中膜平滑肌细胞Integrinα5β1表达情况:两两比较结果表明,除A组与B组（P=0.510）,C组与D组（P=0.520）间无明显差异外,其余各组间均存在显著差异（P值分别为A与C:0.000;A与D:0.000;B与C:0.075;B与D:0.001）。5.冠状动脉粥样硬化斑块处较大的钙化灶周边形成灶状Integrinα5β1的高表达区域强于无钙化形成的粥样硬化组冠脉（P=0.000）。6.ACS组、陈旧心梗组及无心梗组平滑肌细胞Integrinα5β1的表达情况经统计学分析无明显差异（P值分别为:ACS组与陈旧心梗组:0.754;ACS组与无心梗组:0.870;陈旧心梗组与无心梗组:0.805）,提示平滑肌细胞表达的Integrinα5β1并未参与ACS的发生,及在粥样硬化斑块的病变发展中不直接参与急性冠脉事件的发生。7.主动脉Fn表达情况:主动脉Fn的表达情况为内膜近内弹力板处表达较强,高于中膜间质内Fn的表达（P=0.000）;内膜近内弹力板处Fn的表达脂纹组强于粥样硬化斑块组（P=0.008）。8.冠状动脉冠状动脉粥样硬化组Fn在中膜平滑肌间质处的表达弱于内膜间质的表达（P=0.000）,即在内膜间质近内弹力板处表达增强,这一结果与之前近内弹力板处平滑肌细胞高表达Integrinα5β1相一致,且二者具有一定的正相关性（R=0.902,P=0.000）。结论:1.动脉粥样硬化过程中整合素α5β1参与调控平滑肌细胞向内膜的迁移及动脉粥样硬化的发生、发展过程。2.纤维连接蛋白与整合素α5β1协同作用促进动脉粥样硬化的发生发展,参与钙化的发生。3.整合素α5β1在冠脉局部的表达量呈现随冠脉狭窄程度的增加而减弱的趋势。4.整合素α5β1在冠脉局部的表达情况与急性冠脉综合征的发生无明显相关性。

关键词：整合素α5β1 纤维连接蛋白动脉粥样硬化平滑肌细胞狭窄程度

整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达及意义

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中国老年学杂志 2013年第11期33卷 2527-2529页

作者：李桃齐洁敏承德医学院病理教研室河北承德067000

目的探讨整合素α5β1、CD151在胃癌组织中的表达特点、相互关系以及它们在胃癌的发生、发展中的作用。方法应用免疫组化方法同步检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织中的整合素α5β1、CD151的表达情况,分析二者在胃癌组织中表达的相... 详细信息

目的探讨整合素α5β1、CD151在胃癌组织中的表达特点、相互关系以及它们在胃癌的发生、发展中的作用。方法应用免疫组化方法同步检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织中的整合素α5β1、CD151的表达情况,分析二者在胃癌组织中表达的相关性以及和临床病理指标的关系。结果①胃癌组整合素α5β1、CD151的阳性表达率分别为60%、63.75%,均高于癌旁正常组(22%、18%)(P5)。②整合素α5β1、CD151在胃癌组织的表达与胃癌的不同分化程度密切相关(P5)。③整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达强度呈正相关关系(r=0.428,P5)。结论整合素α5β1、CD151在胃癌组织中呈高表达,且与胃癌的分化程度相关,二者在胃癌组织的表达具有正相关性,它们与胃癌的发生、发展密切相关,是胃癌早期诊断和抗转移治疗新的分子靶点,可为评估肿瘤的恶性进展、判断患者预后提供依据。

关键词：胃癌整合素α5β1 CD151 免疫组化

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整合素α5β1与缺血性卒中的研究进展

基础医学与临床 2013年第12期33卷 1630-1633页

作者：姚霞张明南昌大学第二附属医院神经内科江西南昌330006

缺血性卒中是当今世界范围内严重威胁人类生命和健康的疾病,具有高风险、高致残及高死亡的特点。近年研究发现,整合素α5β1与包括脑组织在内的多个部位的血管形成以及胶质细胞的活性调节等都有密切的关系,这种脑保护作用为脑梗死提供... 详细信息

缺血性卒中是当今世界范围内严重威胁人类生命和健康的疾病,具有高风险、高致残及高死亡的特点。近年研究发现,整合素α5β1与包括脑组织在内的多个部位的血管形成以及胶质细胞的活性调节等都有密切的关系,这种脑保护作用为脑梗死提供新的治疗方向。

关键词：缺血性卒中整合素α5β1 血管形成脑保护

整合素α5β1在苯妥英钠促进大鼠PDLSCs和BMMSCs黏附于牙骨质中的作用

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延安大学学报（医学科学版） 2021年第3期19卷 10-15页

作者：赵俪月巴晓晔王宝彦广州市第一人民医院口腔科广东广州510180 西安高新医院口腔科陕西西安710075 西安交通大学附属口腔医院牙周黏膜科陕西西安710004

目的探讨在苯妥英钠(Phenytoin,PHT)促进大鼠牙周膜干细胞(Rat periodontal ligament stem cells,rPDLSCs)、大鼠骨髓间充质干细胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,rBMMSCs)黏附于牙骨质过程中,整合素α5β1(Integrinα5β1)起到的作用。方法提取大鼠BMMSCs和PDLSCs,培养并纯化。通过细胞鉴定后,将获得的两种细胞各分为4组:40 mg/L PHT处理组、40 mg/L PHT+整合素α5抗体处理组、40 mg/L PHT+整合素β1抗体处理组、PBS处理组,每组细胞放入置有牙骨质片的96孔板处理4 h后,检测黏附于牙骨质片上的细胞量并做以比较。最后,利用qRT-PCR和Western blot检测40 mg/L PHT组与对照组细胞的整合素α5、β1亚基的mRNA与蛋白表达量。结果40 mg/L PHT可促进rBMMSCs及rPDLSCs黏附于牙骨质片,加入整合素α5、β1抗体后,均明显抑制了40 mg/L PHT对rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质的促进作用(P整合素α5、β1亚基表达量高于空白对照组(P5)。结论40 mg/L PHT能促进rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质,该作用与整合素α5β1的表达上调密切相关。

关键词：苯妥英钠牙周膜干细胞骨髓间充质干细胞黏附整合素α5β1