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中成药 2021年第7期43卷 1887-1894页

作者：王瑀譞曹文富崔世奎丁坤重庆医科大学中医药学院重庆400016 重庆市中医院重庆400021

目的基于NF⁃κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、M... 详细信息

目的基于NF⁃κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL⁃1β、TNF⁃α水平;Western blot及RT⁃PCR检测MMP⁃3、MMP⁃13、ADAMTS⁃5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF⁃κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL⁃1β、TNF⁃α水平上升(P散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平降低(P散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF⁃κB p65入核表达,阻止NF⁃κB信号通路激活,下调MMP⁃3、MMP⁃13、ADAMTS⁃5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL⁃1β、TNF⁃α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。

关键词：散寒化痰方膝骨关节炎 NF⁃κB信号通路基质金属蛋白酶聚蛋白多糖酶 Ⅱ型胶原

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基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷治疗兔模型膝骨关节炎的作用机理

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷治疗兔模型膝骨关节炎的作...

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作者：王瑀譞重庆医科大学

学位级别：硕士

目的本研究旨在探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）关节软骨保护作用及其机理。方法将雌雄各半的36只6月龄清洁级新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组（扶他林软膏）、散寒化痰方低、中、高剂量... 详细信息

目的本研究旨在探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）关节软骨保护作用及其机理。方法将雌雄各半的36只6月龄清洁级新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组（扶他林软膏）、散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只。除正常组外,其余5组新西兰兔均以改良Hulth法制备兔KOA模型。造模成功后,正常组、模型组予以空白药物基质外敷;阳性对照组予以扶他林软膏（双氯芬酸二乙胺乳胶剂）外搽;散寒化痰方低、中、高剂量组分别给予低、中、高浓度散寒化痰方制剂外敷,疗程均为6周。药物干预结束后取材留用。HE、MASSON染色法及电镜分别观察兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法检测兔血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;Western blot及RT-qPCR检测基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶-5（ADAMTS-5）和Ⅱ型胶原（Col-2）的蛋白表达和mRNA表达。IHC法检测核因子κB P65（NF-κB P65）表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨组织及膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α含量显著上升（P＜0.01）,MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达水平显著上调（P＜0.05,P＜0.01）,Col-2蛋白及mRNA表达水平显著下调（P＜0.01）,NF-κB P65表达明显升高（P＜0.05）。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨组织及膝关节软骨细胞结构损伤显著改善,血清IL-1β、TNF-α含量明显降低（P＜0.01）,MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达水平均显著下调（P＜0.05,P＜0.01）,NF-κB P65表达明显降低（P＜0.05,P＜0.01）;散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织Col-2蛋白及mRNA表达水平均明显上调（P＜0.05,P＜0.01）。结论散寒化痰方可保护兔膝骨关节软骨组织,延缓KOA发生与发展,其机理可能与抑制兔血清IL-1β、TNF-α升高,抑制膝关节软骨细胞NF-κB P65表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调Col-2蛋白及mRNA表达水平有关。

关键词：膝骨关节炎散寒化痰方 NF-κB信号通路基质金属蛋白酶聚蛋白多糖酶 Ⅱ型胶原

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