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牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验替代方法的研究

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兽医导刊 2023年第3期 43-46页

作者：柏庆鲁立柱刘宏吴升张常锁马关涛曹剑天康生物制药股份有限公司新疆乌鲁木齐830032

为筛选一种动物来源确定、个体差异较小、经济成本低的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验方法,选择3个批次的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗(Ⅰ型,NM01株)分别免疫牛、豚鼠,并在免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采血,用微量血清中和... 详细信息

为筛选一种动物来源确定、个体差异较小、经济成本低的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验方法,选择3个批次的牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗(Ⅰ型,NM01株)分别免疫牛、豚鼠,并在免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采血,用微量血清中和法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)中和抗体。通过比较牛与豚鼠免疫血清BVDV中和抗体效价,评价用豚鼠替代牛进行牛病毒性腹泻/黏膜病灭活疫苗效力检验的可行性。结果表明,牛和豚鼠接种疫苗后BVDV抗体水平结果相关性较好,证明该替代方法可行。

关键词：牛病毒性腹泻/粘膜病灭活疫苗效力检验方法

猪支原体肺炎疫苗效力检验常见问题与质量控制

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中国兽药杂志 2023年第7期57卷 51-55页

作者：刘博魏津马欣王甲赵浩然刘燕姚文生罗玉峰中国兽医药品监察所北京100081

为了更规范、标准地评价猪支原体肺炎疫苗,本研究对近年来猪支原体肺炎疫苗检验进行了系统性分析。结果发现,效力检验作为疫苗质量的核心内容,是检验中最易出现问题参数。对效力检验相关方法、常见问题进行分析,有助于研发过程中规避问... 详细信息

为了更规范、标准地评价猪支原体肺炎疫苗,本研究对近年来猪支原体肺炎疫苗检验进行了系统性分析。结果发现,效力检验作为疫苗质量的核心内容,是检验中最易出现问题参数。对效力检验相关方法、常见问题进行分析,有助于研发过程中规避问题,提高疫苗质量继而保障养殖业发展。

关键词：猪支原体肺炎疫苗效力检验替代方法

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猪丹毒灭活疫苗效力检验血清学方法建立

中国兽药杂志 2023年第8期57卷 1-11页

作者：张媛王甲张一帜李建赵浩然李巧玲王秀丽刘元杰冯妍李旭妮彭国瑞李俊平中国兽医药品监察所北京100081

建立了猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法,用于猪丹毒疫苗效力检验。用SpaA蛋白(纯度90%)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的SpaA蛋白单克隆抗体,建立猪丹毒丝菌竞争ELISA抗体检测方法,确定检测结果的判定标准,并对该方法的特异性、敏感性、重... 详细信息

建立了猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法,用于猪丹毒疫苗效力检验。用SpaA蛋白(纯度90%)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的SpaA蛋白单克隆抗体,建立猪丹毒丝菌竞争ELISA抗体检测方法,确定检测结果的判定标准,并对该方法的特异性、敏感性、重复性(批间重复性和批内重复性)等进行评价。建立效力检验血清学方法与免疫攻毒法的平行关系,并对两种方法符合率进行评价。结果表明,SpaA的最佳包被浓度为2.0 ng/μL,阴阳性对照血清的最佳稀释倍数为1∶75,HRP标记的单克隆抗体的最佳工作浓度为0.2 ng/μL。ELISA结果判定标准为血清样本抑制率PI≥8.0%时判定为阳性,PI效力检验免疫攻毒法具备平行关系,小鼠血清效价≥1∶100时可抵抗1000 MLD强毒攻击;对用不同冻干代次菌种制备的4批猪丹毒丝菌灭活抗原和来自4家企业的7批猪丹毒灭活疫苗进行检测并与免疫攻毒实验结果比较,总符合率为100%。建立的猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法可以作为猪丹毒疫苗的效力检验方法。

关键词：猪丹毒疫苗效力检验竞争ELISA

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)效力检验用实验动物抗体效价的对比研究

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黑龙江畜牧兽医 2018年第24期 181-183,262页

作者：赵传芳张蕾赵旭贺实伟中国农业科学院特产研究所长春130112 吉林特研生物技术有限责任公司长春130122

为了变更“水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)”质量标准中效力检验用的试验动物,试验采用血凝抑制试验方法,对比检验水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)对水貂和兔产生的抗体效价水平。结果表明:水貂和兔接种疫苗后14~180天的血清H... 详细信息

为了变更“水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)”质量标准中效力检验用的试验动物,试验采用血凝抑制试验方法,对比检验水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)对水貂和兔产生的抗体效价水平。结果表明:水貂和兔接种疫苗后14~180天的血清HI抗体水平差异不显著(P>0.05),均达到效力检验质量标准要求。用兔替代水貂进行水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)的效力实验的抗体监测科学、方便、可行。

关键词：水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗效力检验实验动物抗体效价

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猪瘟活疫苗效力检验替代方法的研究

中国兽药杂志 2015年第3期49卷 1-6页

作者：王海光宁宜宝赖月辉吴文福王芳刘灿张文利黄秋雪陈坚林旭埜张毓金范学政徐璐王琴赵启祖丁家波中国兽医药品监察所北京100081 广东永顺生物制药股份有限公司广州511356

目前，我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量（ RID），但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法，本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接... 详细信息

目前，我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量（ RID），但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法，本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接种易感细胞，使用抗原捕获ELISA、RT－nestPCR和RT－PCR三种方法检测不同稀释度疫苗中活病毒在感染细胞后增殖的子代病毒，计算疫苗病毒的最高细胞感染剂量，建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量（ CID）的效力检验方法。结果显示：疫苗中活病毒粒子越多，CID就越高；对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明，该方法适用于传代细胞源和细胞源猪瘟活疫苗的效力效检。使用CID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源（传代细胞源）和3批牛睾丸原代细胞源（细胞源）猪瘟活疫苗进行了比对效检，结果表明，用CID测定方法检验，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份均含10^5 CID，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含量均为10^4 CID；用兔子感染体温测定法，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份含量在2．6×10^4～3．0×10^4 RID之间，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含7．0×10^3～8．0×10^3 RID。试验证明：本实验室建立的CID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性，能够较好反映疫苗中活病毒的含量，有望成为RID的替代方法。

关键词：猪瘟活疫苗效力检验替代方法兔体感染量细胞感染量抗原捕获ELISA RT—nestPCR RT—PCR

猪丹毒疫苗效力检验攻毒冻干培养物的制备与应用研究

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中国兽药杂志 2020年第6期54卷 14-19页

作者：彭国瑞张媛王秀丽辛凌翔张一帜彭小兵魏津李建李旭妮刘博马欣李俊平中国兽医药品监察所北京100081

为提高猪丹毒疫苗效力检验结果的稳定性、一致性和工作效率。本研究冻干制备了效力检验攻毒用猪丹毒丝菌培养物,对性状、纯粹、真空度、剩余水分、活菌计数、均一性等进行检测,测定在不同温度下短期存放的活菌数,监测在低温下长期保存... 详细信息

为提高猪丹毒疫苗效力检验结果的稳定性、一致性和工作效率。本研究冻干制备了效力检验攻毒用猪丹毒丝菌培养物,对性状、纯粹、真空度、剩余水分、活菌计数、均一性等进行检测,测定在不同温度下短期存放的活菌数,监测在低温下长期保存的活菌数和毒力,并将其应用于猪丹毒活疫苗和灭活疫苗的效力检验。结果显示,该攻毒培养物性状良好,纯粹生长,真空度合格率98.2%,剩余水分小于3.5%,活菌数均值为3.8×10^9 CFU/瓶,瓶间活菌数变异系数(C.V)为10.0%,37℃以下温度存放2.5~3.0 h活菌数稳定,变异系数(C.V)为4.9%,-20℃保存36个月活菌数为3.0×10^9 CFU/瓶,每只小鼠注射6 CFU活菌5/5死亡,应用于猪丹毒灭活疫苗和活疫苗效力检验结果与常规方法一致。结果表明,该猪丹毒丝菌冻干培养物状态良好,活菌数和毒力较为稳定,能够满足猪丹毒疫苗效力检验攻毒使用,且提高了检验结果的一致性和稳定性及工作效率。

关键词：猪丹毒丝菌疫苗活菌计数效力检验攻毒

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兽用狂犬病灭活疫苗效力检验参考疫苗的研制

中国兽医杂志 2013年第8期49卷 73-76,80页

作者：李宁支海兵张伟薛青红李润印春生赵德明中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京海淀100193 中国兽医药品监察所北京海淀100081 北京出入境检验检验局北京朝阳100026

将试制的狂犬病灭活疫苗效力检验参考疫苗分别采用NIH和ELISA方法进行了标定,并组织人员进行了协作标定,确定参考疫苗的效价为5.44IU。对标定后的参考疫苗进行了均一性和稳定性试验,结果参考疫苗的均一性好,在-20℃放置15个月和4℃放置... 详细信息

将试制的狂犬病灭活疫苗效力检验参考疫苗分别采用NIH和ELISA方法进行了标定,并组织人员进行了协作标定,确定参考疫苗的效价为5.44IU。对标定后的参考疫苗进行了均一性和稳定性试验,结果参考疫苗的均一性好,在-20℃放置15个月和4℃放置2个月效价稳定,在37℃放置2个月效价大于2.00IU,符合我国和WHO对动物用狂犬灭活疫苗效力的要求。本课题为进一步自主研发检验用标准品提供了试验依据,同时也响应了WHO狂犬病委员会敦促各国研制和标定参考品的要求,填补了我国兽用狂犬病灭活疫苗效力检验标准品的空白。

关键词：狂犬病灭活疫苗效力检验标准品

我国猪瘟疫苗效力检验的替代方法研究与应用进展

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家畜生态学报 2014年第8期35卷 86-89页

作者：张占龙宋永鸿李敏李梅霞青海省化隆县畜牧局青海化隆810900 青海省动物疫病预防控制中心青海西宁810003 青海省贵南县过马营乡畜牧兽医站青海贵南813101

我国兽药典中现行的猪瘟疫苗效力检验方法存在试验成本较高、周期较长、操作较繁琐、重复性较差、敏感性较低等缺点,随着分子生物学与免疫学技术的日臻发展与应用,猪瘟疫苗效力检验的新兴替代检验方法不断发展和完善。论文就我国近年来... 详细信息

我国兽药典中现行的猪瘟疫苗效力检验方法存在试验成本较高、周期较长、操作较繁琐、重复性较差、敏感性较低等缺点,随着分子生物学与免疫学技术的日臻发展与应用,猪瘟疫苗效力检验的新兴替代检验方法不断发展和完善。论文就我国近年来针对猪瘟疫苗毒种、半成品、成品效力检验的新兴分子生物学和免疫学检测方法的研究与应用进展做一简要综述,旨在为提升我国猪瘟疫苗效力检验水平提供合理的科学依据。

关键词：猪瘟疫苗效力检验替代方法研究与应用

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一种猪瘟兔化弱毒活疫苗效力检验方法的研究

中国兽药杂志 2019年第12期53卷 7-11页

作者：郑朝朝刘云涛李倬邹立宏郁宏伟瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000 河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071000 吉林省进出口检验检疫局长春130062

为克服兔体定型热反应法(RID)检验猪瘟活疫苗效力的过程中存在的缺陷,建立了一种快速、准确、稳定检测猪瘟病毒含量及疫苗效力的间接免疫荧光法(IFA).该方法以出现特异性荧光作为检测标准,通过添加促细胞感染剂聚乙二醇10000(PB)增加特... 详细信息

为克服兔体定型热反应法(RID)检验猪瘟活疫苗效力的过程中存在的缺陷,建立了一种快速、准确、稳定检测猪瘟病毒含量及疫苗效力的间接免疫荧光法(IFA).该方法以出现特异性荧光作为检测标准,通过添加促细胞感染剂聚乙二醇10000(PB)增加特异性荧光数量,可以在4 d内检测出猪瘟活疫苗成品或半成品效力.该方法检验周期短、结果准确、重复性好,为猪瘟活疫苗效力检验方法的完善提供了数据支持.

关键词：间接免疫荧光猪瘟活疫苗效力检验