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两株海洋放线菌次生代谢产物及其生物活性研究

两株海洋放线菌次生代谢产物及其生物活性研究

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作者：苑朕昱大连海洋大学

学位级别：硕士

海洋放线菌是一种单细胞,具有复杂的形态分化过程和能够产生种类丰富的次级代谢产物的能力的革兰氏阳性细菌。其次级代谢产物中蕴藏着大量的结构新颖,活性多样的化合物。本研究通过化学筛选和活性测试等方法,从15株从南中国海收集的放... 详细信息

海洋放线菌是一种单细胞,具有复杂的形态分化过程和能够产生种类丰富的次级代谢产物的能力的革兰氏阳性细菌。其次级代谢产物中蕴藏着大量的结构新颖,活性多样的化合物。本研究通过化学筛选和活性测试等方法,从15株从南中国海收集的放线菌中筛选出了2株潜力菌株5003和LJ25,并分别对这2株菌株的次级代谢产物进行了化学分离纯化和抗菌活性研究。对15株海洋放线菌进行筛选,选出抗细菌活性较强的菌株5003(AM6)和LJ25(AM6),对其进行扩大发酵得到浸膏,再将上述浸膏用正相硅胶(100-200目)干法拌样后,装入玻璃层析柱,以氯仿-甲醇作为洗脱剂,得到8个馏分(Fr.A1-Fr.A8),将Fr.A7和Fr.A8合并,进行梯度洗脱,得到6个亚馏分(Fr.B1-Fr.B6)。亚馏分Fr.B2-Fr.B5合并后,以干法拌样后装入C18反相硅胶柱,以乙腈-水为洗脱剂,得到7个馏分(Fr.C1-Fr.C7)。馏分Fr.C2-Fr.C5合并,经Semi-preparetive HPLC(C18 110A乙腈-水40:60)纯化,得到5003-A、5003-B和5003-C以及化合物5003-D、5003-E、5003-F和5003-G等。根据波谱数据及文献,5003-A、5003-B、5003-C分别为脂肽类化合物marihysin A、marihysin B、marihysin C,5003-D、5003-E、5003-F和500-G分别为cyclo(Ala-Ile)、cyclo(Ala-Leu)、cyclo(Ala-Tyr)和cyclo(Ala-Asn)。将菌株LJ25粗提物采用RP-HPLC column(Inertsil ODS-SP 5um 4.6×150mm),PDA检测。扩大发酵培养后得到的浸膏装入玻璃层析柱,以氯仿-甲醇作为洗脱剂,得到8个馏分(Fr.A1-Fr.A8)。将Fr.A7和Fr.A8合并,得到6个亚馏分(Fr.B1-Fr.B6)。Fr.B4-Fr.B6合并后,以干法拌样后装入C18反相硅胶柱,以乙腈-水为洗脱剂,得到6个馏分(Fr.C1-Fr.C6)。馏分Fr.C4-Fr.C6合并,经Semi-preparetive HPLC(C18 110A,乙腈-水50;50)纯化得到化合物LJ25-A,LJ25-B及LJ25-C。根据波谱数据及文献,LJ25-A、LJ25-B和LJ25-C分别为脂肽类化合物bacillomycin La、bacillomycin Lb和bacillomycin Lc。从放线菌5003和LJ25的发酵液中,分离得到的10个化合物对6株指示菌(大肠杆菌Escherichia coli ATCC 25922、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila ATCC 7966、金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus ATCC 29213、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、藤黄微球菌Micrococcus luteus、苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis)进行了抑菌活性实验。其中,5003-A有抗金黄色葡萄球菌活性;5003-B,5003-C,5003-D,5003-E,5003-F,5003-G有抗大肠杆菌活性;LJ25-A,LJ25-B,LJ25-C有抗嗜水气单胞菌活性。

关键词：放线菌5003 放线菌LJ25 海洋放线菌次生代谢产物脂肽

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