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肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型的建立以及疫苗候选株保护效果的评价

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世界华人消化杂志 2006年第28期14卷 2753-2758页

作者：王志斌姜普林曾年华李淑琴王令春李燕熊仕秋张兆山广州军区疾病预防控制中心广东省广州市510507 北京生物工程研究所北京市100071 中山大学基础医学院广东省广州市510089

目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价．方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;... 详细信息

目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价．方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;应用鼻饲小鼠模型观察疫苗候选株FE1,FE3,FE6保护效果．结果:鼻饲LD50剂量肠毒素大肠杆菌小鼠的病理特征是肺组织存在大量的淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞,为多病灶支气管肺炎,肺部细菌清除缓慢,至第7天仍能检测到105数量级的细菌．应用疫苗候选株免疫后进行攻毒,小鼠没有发病和死亡,病理特征主要是淋巴细胞少量增多,肺部细菌清除迅速,至第7天已检测不到细菌,与对照有显著性差异(0 CFU／g vs 6．2×105,5．4×105,2．3×105 CFU／g,P毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型能够为疫苗筛选和评价提供了有效途径,同时也证实了疫苗候选株FE1,FE3,FE6具有良好的免疫保护效果．

关键词：肠毒素大肠杆菌攻毒实验小鼠模型疫苗菌株保护效果

WSSV人工感染量和饵料对中国明对虾存活时间的影响

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水产学报 2013年第2期37卷 263-268页

作者：李旭鹏孟宪红孔杰曹宝祥刘宁罗坤李伟亚中国海洋大学海洋生命学院中国水产科学研究院黄海水产研究所

为揭示不同白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)病毒量对于中国明对虾存活时间和存活率的影响,实验设计了逐尾、定量人工感染实验,在确保每尾中国明对虾进食特定量WSSV毒饵后进行观察、分析。结果显示,分别喂食含5.2×108co... 详细信息

为揭示不同白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)病毒量对于中国明对虾存活时间和存活率的影响,实验设计了逐尾、定量人工感染实验,在确保每尾中国明对虾进食特定量WSSV毒饵后进行观察、分析。结果显示,分别喂食含5.2×108copies、1.0×109copies、2.1×109copies WSSV的毒饵,对虾平均存活时间分别是389.3、323.3和187.3 h,差异极显著(P实验组平均存活时间显著高于喂食配合饲料和鲜蛤肉的实验组(P0.05);3组累计死亡率都为100%,结果表明,与配合饲料和鲜蛤肉相比,喂食活卤虫更能增强对虾抗WSSV的能力。

关键词：中国明对虾白斑综合征病毒攻毒实验饵料存活率

聚β-羟基丁酸酯对中国明对虾抗WSSV能力的影响

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水产学报 2014年第8期38卷 1167-1174页

作者：邓康裕孔杰孟宪红罗坤曹宝祥刘宁栾生史晓丽李旭鹏曹家旺南京农业大学无锡渔业学院中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室

为探索聚β-羟基丁酸酯(PHB)对感染白斑综合征病毒(WSSV)的水生动物存活率、病毒含量的影响,实验采用单因子浓度梯度法,对感染WSSV的中国明对虾投喂添加了不同浓度聚β-羟基丁酸酯(0.0%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%)的饵料,统计相... 详细信息

为探索聚β-羟基丁酸酯(PHB)对感染白斑综合征病毒(WSSV)的水生动物存活率、病毒含量的影响,实验采用单因子浓度梯度法,对感染WSSV的中国明对虾投喂添加了不同浓度聚β-羟基丁酸酯(0.0%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%)的饵料,统计相同时间点对虾死亡数量、存活率、相对免疫保护率(RPS),并利用real-time PCR测定死亡对虾体内病毒绝对含量。结果显示,PHB对中国明对虾存活率、平均存活时间及体内病毒拷贝数均有一定影响,主要表现在与对照组(0.0%)相比,随PHB浓度的升高,实验组对虾存活率和平均存活时间呈现先上升后下降趋势。各组平均存活时间为82.23、90.71、95.55、91.15、85.56及79.40 h,1.0%浓度组实验对虾平均存活时间与0.5%及2.5%浓度组无显著差异(P>0.05),但是显著高于其余各组(P毒拷贝数为1.08×107,1.15×107,4.75×107,1.27×107,1.14×107,3.29×106个/ng DNA;对照组与1%浓度组病毒含量具有显著差异(P<0.05)。结果表明,PHB能提高中国明对虾抗WSSV的能力且1%PHB浓度为最适浓度。

关键词：中国明对虾聚β-羟基丁酸酯存活率白斑综合征病毒攻毒实验实时荧光定量

中华绒螯蟹二龄早熟和晚熟品系选育第四代在扣蟹阶段养殖性能和免疫性能的评价

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水产学报 2020年第5期44卷 816-826页

作者：王海宁姜晓东吴旭干邓登向朝林成永旭上海海洋大学农业农村部淡水种质资源重点实验室浙江澳凌水产种业科技有限公司上海海洋大学水产动物遗传育种上海市协同创新中心上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心深圳市澳华集团股份有限公司

本研究以中华绒螯蟹2龄早熟和晚熟群体选育第四代(G4)的扣蟹为对象,并以未经选育的养殖群体扣蟹为对照组,采用养殖实验、免疫指标测定和攻毒实验等方法,从生长性能和免疫抗病性能的角度分析并评价不同群体的蟹种质量。结果显示:①养殖... 详细信息

本研究以中华绒螯蟹2龄早熟和晚熟群体选育第四代(G4)的扣蟹为对象,并以未经选育的养殖群体扣蟹为对照组,采用养殖实验、免疫指标测定和攻毒实验等方法,从生长性能和免疫抗病性能的角度分析并评价不同群体的蟹种质量。结果显示:①养殖实验中两选育群体的最终体质量和特定增长率(SGR)均优于对照组,且2龄早熟群体在8—11月的平均体质量始终低于晚熟群体,但差异不显著;②养殖效果方面,三群体成活率和最终产量由大到小依次为早熟G4、晚熟G4和对照组,三群体1龄早熟率的大小次序与之相反,其中雌体产量和1龄早熟率差异显著;③免疫指标方面,两选育组碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)水平均高于对照组,其中雄体肝胰腺中AKP活性以及雌体血淋巴中T-AOC水平差异显著;④两选育群体在攻毒实验中最终死亡率均较低,分别比对照组低29.50%和22.94%。研究表明,选育G4扣蟹的生长性能和免疫抗病相关生理指标都表现出了比未选育群体优良的特性,市场应用和产业化前景广阔。

关键词：中华绒螯蟹扣蟹养殖免疫性能攻毒实验

饲料中添加重组抗菌肽对吉富罗非鱼生长性能及免疫力的影响

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中国水产科学 2011年第6期18卷 1308-1314页

作者：姜珊王宝杰刘梅蒋克勇宫魁王雷中国科学院海洋研究所中国科学院研究生院

以吉富罗非鱼(genetically improved farmed tilapia,GIFT)幼鱼(体质量10.68 g±0.53 g)为研究对象,在实验饲料中分别添加0、5、10、20、50 mg/kg重组中国明对虾抗菌肽以及100 mg/kg氟苯尼考,并于实验结束时进行注射攻毒(嗜水气单胞菌)... 详细信息

以吉富罗非鱼(genetically improved farmed tilapia,GIFT)幼鱼(体质量10.68 g±0.53 g)为研究对象,在实验饲料中分别添加0、5、10、20、50 mg/kg重组中国明对虾抗菌肽以及100 mg/kg氟苯尼考,并于实验结束时进行注射攻毒(嗜水气单胞菌)。通过8周的养殖实验,研究了饲料中添加抗菌肽对吉富罗非鱼幼鱼的生长性能、免疫指标以及攻毒实验的影响。结果显示,饲料中添加5～10 mg/kg抗菌肽可以显著提高罗非鱼的增重率、红细胞总数以及过氧化氢酶的活性,当添加量为5 mg/kg时,特定生长率最高;当添加量为50 mg/kg时,肝脏的超氧化物歧化酶与血清中溶菌酶活性较对照组显著降低(P攻毒后的死亡率显著降低(P攻毒后的存活率,但过高剂量的抗菌肽对幼鱼的生长与部分酶指标有一定的负面影响,因此建议抗菌肽的添加量不超过20 mg/kg。本研究旨为对虾抗菌肽在罗非鱼饲料中的合理应用提供实验依据。

关键词：重组抗菌肽吉富罗非鱼生长免疫攻毒实验

中华绒螯蟹2龄早熟、晚熟选育群体和非选育群体蟹种免疫性能的比较

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海洋渔业 2017年第2期39卷 181-189页

作者：姜晓东吴旭干何杰刘青王幼鹏葛永春成永旭上海海洋大学农业部淡水种质资源重点实验室上海201306 江苏省宿迁旭邦水产科技有限公司泗洪223900 上海登瀛水产养殖专业合作社上海202164 上海海洋大学上海市教委水产动物遗传育种协同创新中心上海201306

免疫性能是评价中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis,以下简称河蟹)蟹种质量的重要指标,采用攻毒实验和非特异免疫指标测定方法,以常规养殖未经遗传选育的养殖群体蟹种为对照组,评价了河蟹2龄早熟、晚熟选育群体第2代(G2)扣蟹的攻毒成活率和... 详细信息

免疫性能是评价中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis,以下简称河蟹)蟹种质量的重要指标,采用攻毒实验和非特异免疫指标测定方法,以常规养殖未经遗传选育的养殖群体蟹种为对照组,评价了河蟹2龄早熟、晚熟选育群体第2代(G2)扣蟹的攻毒成活率和非特异性免疫指标。结果显示:(1)嗜水气单胞菌攻毒注射后,整体上未选育组扣蟹的死亡率略高于两选育群体,但是雌雄个体间具有一定的性别差异,2龄晚熟群体雄蟹和2龄早熟群体雌蟹攻毒后死亡率分别最低;(2)就肝胰腺中非特异性免疫指标而言,无论雌蟹还是雄蟹,2龄早熟群体肝胰腺中的碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于对照组(P<0.05),酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于2龄晚熟组(P<0.05);此外,两个选育组雄体肝胰腺中的总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化物酶(POD)活性均显著高于对照组,2龄早熟G2雌体肝胰腺中的丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)均显著高于其它两组雌体;(3)就血清中非特异免疫指标而言,无论雌蟹还是雄蟹,2龄早熟G2扣蟹血清中的ACP活性均显著高于对照组,2龄晚熟G2扣蟹血清中的谷胱甘肽还原酶(GR)活性均显著低于其它两组扣蟹,此外,2龄早熟G2雌蟹血清中的γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)和T-AOC活性均显著高于2龄晚熟G2。综上,两个选育群体子二代扣蟹具有较强免疫性能及抗病力,其中2龄早熟群体扣蟹的免疫性能和抗氧化能力略强于2龄晚熟选育群体。

关键词：中华绒螯蟹遗传选育蟹种质量免疫性能攻毒实验比较研究

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转人乳铁蛋白基因草鱼抗GCHV的初步研究

水生生物学报 2001年第5期25卷 528-530页

作者：钟家玉朱作言中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

摘要: 草鱼出血病是由草鱼出血病病毒(GCHV,Grass carpHaemorrhage Virus)引起的爆发性疾病,在草鱼鱼种饲养阶段危害极大,迄今尚无有效的防治方法.人类乳铁蛋白(hLF,human lactoferrin)是人类非特异免疫系统中的重要成员1.它不仅有抑制... 详细信息

摘要: 草鱼出血病是由草鱼出血病病毒(GCHV,Grass carpHaemorrhage Virus)引起的爆发性疾病,在草鱼鱼种饲养阶段危害极大,迄今尚无有效的防治方法.人类乳铁蛋白(hLF,human lactoferrin)是人类非特异免疫系统中的重要成员1.它不仅有抑制细菌生长乃至杀死各种细菌的功能2,还能提高机体抵抗病毒的能力3.转hLF基因烟草的抗病研究已经取得可喜的进展4.那么,hLF是否具有提高低等脊椎动物鱼类的抗病毒能力,是一个具有理论和应用意义的课题.通过转人类乳铁蛋白cDNA(hLFc)的研究,有可能就这个问题提供某些有价值的资料.

关键词：草鱼精子电脉冲介导转基因法人类乳铁蛋白出血病攻毒实验

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猪链球菌2型病理学研究及其双重荧光PCR检测方法的建立

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猪链球菌2型病理学研究及其双重荧光PCR检测方法的建立

作者：王伟伟四川农业大学

学位级别：硕士

本实验通过猪体攻毒实验，系统研究了猪链球菌2型引起的病理学变化;并建立了快速、准确检测猪链球菌2型的方法—双重荧光PCR检测方法。试验选用9头30日龄SPF仔猪，分成3组(每组3头)，利用中国动物卫生与流行病学中心实验室保存的猪链球... 详细信息

本实验通过猪体攻毒实验，系统研究了猪链球菌2型引起的病理学变化;并建立了快速、准确检测猪链球菌2型的方法—双重荧光PCR检测方法。试验选用9头30日龄SPF仔猪，分成3组(每组3头)，利用中国动物卫生与流行病学中心实验室保存的猪链球菌2型阳性菌株，通过口服、肌注、静注等方法，对试验猪进行攻毒试验，研究猪链球菌2型对健康仔猪各器官的病理学损伤情况。试验结果表明：1．猪链球菌2型能够对健康仔猪有很强的致病作用，其中通过肌注途径进行攻毒实验猪发病明显比其它途径攻毒猪快。2．该菌主要通过黏附、侵袭、毒素等作用，侵害大部分组织器官的细胞而造成损伤。3．主要病理学变化是肺泡壁水肿增宽、聚集了多量的炎症细胞，毛细血管内有大量纤维素性血栓生成;肝细胞变性坏死，肝窦内有纤维素性渗出物;肾小球扩张、出血，肾小管呈大面积坏死;其它器官病理变化并不很严重。运用BEACON Desigener 2.0软件设计了针对CPS2J、MRP的特异性扩增引物和其相应探针(CPS2J用HEX标记，MRP用ROX标记)，通过对各个参数的优化选择，建立了能同时检测这两个基因的双重荧光PCR检测方法，运用该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验，并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明：1．本方法具有特异性好(与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应)、敏感性高(最低检测细菌数为24CFU／ml)、稳定性好、重复性高(8个样品在三个不同时期的CPS2J的CT值和MRP的CT值均无显著性差异，P＞0.05)等特点，说明该方法是检测猪链球菌2型的可靠方法。2．运用该方法检测从动物攻毒实验所取得的病变组织，显示该方法能够快速、准确地从病料组织中检测出猪链球菌2型。3．从CT值判断该菌在肝脏中含量最高，大脑和心脏的含量相对较低，且同一样品的CPS2J与MRP两个基因的检测CT值基本相同，因此，在生产中可以应用该方法可准确诊断猪链球菌2型。

关键词：猪链球菌2型猪攻毒实验病理双重荧光PCR CPS2J MRP

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H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究

H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究

作者：张强哲西北农林科技大学

学位级别：硕士

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，严重威胁世界各地的养禽业，常常造成巨大的经济损失，尤其是H5、H7亚型引起的高致病力禽流感是养禽业的一种毁灭性疾病。血凝素(Hemagglutinin，HA)是禽流感病毒的重要的保护性抗原，是构... 详细信息

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，严重威胁世界各地的养禽业，常常造成巨大的经济损失，尤其是H5、H7亚型引起的高致病力禽流感是养禽业的一种毁灭性疾病。血凝素(Hemagglutinin，HA)是禽流感病毒的重要的保护性抗原，是构建DNA疫苗的首选基因。本实验对禽流感HA DNA疫苗做了研究，主要包括HA基因真核表达质粒的构建表达、HA DNA疫苗的BALB/C小鼠免疫和攻毒保护实验、HA DNA疫苗的SPF鸡免疫和攻毒保护实验等三方面的内容。 1．禽流感病毒HA基因真核表达质粒的构建与表达。HA基因是禽流感病毒重要的保护性抗原基因。为了研究HA基因疫苗，用PCR扩增H5亚型禽流感病毒HA基因，将其克隆到质粒pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒pC4H5和pCMVH5。采用Tfx-20、Superfect转染试剂和电转染法转染Hela细胞，转染后的Hela细胞经Western Blotting和血凝试验检测HA蛋白及其活性。结果表明，Superfect转染和电转染均能正确表达HA蛋白并具有生物学活性，Western Blotting检测到HA和HA裂解的HA1和HA2，与禽流感病毒的HA、HA1、HA2蛋白的分子量一致。从血凝试验结果看，Superfect和电转染表达的HA均具有血凝活性，而经Superfect转染的pC4H5的表达量是pCMVH5的8倍，表明pC4H5是一高效的真核表达质粒。 ***疫苗的小鼠免疫和攻毒保护实验。将构建好的真核表达质粒pC4H5和pCMVH5采用电击和肌肉注射免疫小鼠，电击条件为电压200V/cm，脉冲数8个(+4，-4)，脉冲时间40ms,质粒用量为30μg/只。第3周以相同的条件加强免疫一次，第5周用戊巴比妥(50mg/kg)麻醉小鼠，以10ELD的H5亚型的禽流感病毒经滴鼻进行攻毒。在实验期间进行了小鼠抗HA的IgG抗体、淋巴增值实验。CTL实验、CD4和CD8分型、IFN-γ及IL-4细胞因子等免疫指标的检测。结果为，电击组小鼠在第2周产生抗体，肌肉注射组在第4、5周产生抗体，电击组优于肌肉注射组，淋巴增值实验和CTL实验表明，第4周机体的细胞免疫被激活，攻毒后细胞免疫进一步活化。CD/CD比率及血清中细胞因子IFN-γ、IL-2随着免疫次数的增加，呈现逐步升高趋势，2种质粒免疫鼠之间差异不显著(p＞0.05)，但实验组与对照组相比差异显著(p＜0.05)，说明构建的DNA疫苗能激活机体的免疫系统。攻毒后，对照组小鼠在攻毒后第9、10d死亡，并且自始至终均能分离到病毒。而电击组和肌肉注射组小鼠均能获得保护，但电击组在攻毒后第5、7、16d肺脏中均分离不到病毒。肌肉注射组在第5d均能分离到病毒，第7d部分小鼠能分离到病毒，第16d分离不到病毒。结果表明，电击免疫明显优于肌肉注射，说明电击免疫是一种比较理想的免疫方法。 H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究 *** DNA疫苗的sPF鸡免疫和攻毒保护实验。我们采用30林岁只和50林留只两个剂量，经肌肉注射和电击法免疫SPF鸡，每周检测SPF鸡的HA抗体，二免后第二周用 1价ZELDS。的HS亚型禽流感病毒攻毒。结果为，电击法免疫sPF鸡在第2周产生抗体，再次免疫后抗体水平明显升高，50卜留只的肌肉注射组在第4周产生微量抗体。攻毒保护结果为，30林岁只和50“g/只两个剂量的电击免疫组对鸡的保护率分别为 83.3%和100%，而肌肉注射组不能保护攻毒剂量的HS亚型禽流感病毒的攻击。说明电击免疫是一种比较理想的免疫方法。

关键词：禽流感病毒 DNA疫苗 HA基因构建表达免疫试验攻毒实验