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全骨髓贴壁改良培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞

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广西医科大学学报 2013年第2期30卷 171-174页

作者：阳玉群莫雪安农伟东杨龙秀孔德燕张泰鹏刘金萍广西医科大学护理学院南宁530021 广西医科大学神经病学研究所广西医科大学研究生学院南宁530021 广西医科大学第一附属医院神经内科南宁530021 广西中医药大学附属瑞康医院南宁530021 广西医科大学第四附属医院柳州545005 桂林医学院附属医院桂林541000

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离、培养及鉴定方法。方法:应用改良的全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,进行形态学观察,绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标记物,对培养的细胞向成骨方向诱导进行鉴定。结果:体外培养... 详细信息

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离、培养及鉴定方法。方法:应用改良的全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,进行形态学观察,绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标记物,对培养的细胞向成骨方向诱导进行鉴定。结果:体外培养的原代BMSCs 9d左右融合,细胞生长以梭形为主,呈螺旋状且生长旺盛的细胞集落。生长曲线显示BMSCs符合正常细胞生长特征。第3代BMSCs CD29,CD90均呈阳性表达,而CD34,CD45几乎不表达。成骨诱导后,茜素红染色呈阳性。结论:全骨髓贴壁改良法简单实用,在体外容易分离培养和扩增BMSCs,对细胞活性影响小,是获得高纯度BMSCs的一种有效方法。

关键词：骨髓间充质干细胞改良培养法大鼠

新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定

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氨基酸和生物资源 2014年第1期36卷 27-31页

作者：连敏叶燕青汪甜刘冰武汉大学中南医院呼吸内科湖北武汉430071

探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定.用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺成纤维细胞,并纯化细胞,对肺成纤维细胞进行形态学观察,用HE染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线.倒置相... 详细信息

探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定.用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺成纤维细胞,并纯化细胞,对肺成纤维细胞进行形态学观察,用HE染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线.倒置相差显微镜下观察选用改良法获得的细胞,3d后可见组织块周边有少许细胞,5d后组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,10d接近融合.经改良后的方法纯化细胞,细胞活性状态较好的为3～5代,5代以后的细胞增殖能力下降.对第3代肺成纤维细胞进行HE染色,镜下可见形态典型的成纤维细胞,免疫组化结果显示波形蛋白(Vi-mentin)阳性表达,细胞角蛋白(cytokeratin)阴性表达.MTT法检测第3代细胞于3～5 d处于对数生长期.胰酶消化组织块结合法是一种可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化的培养方法,使用这种方法可得到具有典型形态特征且活性较好的肺成纤维细胞,初学者容易掌握.

关键词：肺成纤维细胞原代培养改良培养法细胞鉴定

OC-3-VGH卵巢癌细胞简捷培养方法的研究

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中国计划生育学杂志 2009年第7期17卷 424-426页

作者：刘向云杨荣富徐滢雯谢琛静王玖玖胡文娟蒋秀蓉孙祖越上海市计划生育科学研究所 200032

目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响。方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml... 详细信息

目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响。方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml/只接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2个月后处死,取肿瘤组织制片,并与传统培养方法结果进行比较。结果:两种方法培养的细胞均生长活跃,皮下接种7d左右,裸鼠长出肿瘤,组织学检查未见明显差异。结论:改良细胞培养方法减少了传统方法的繁琐步骤,方便细胞培养。

关键词：细胞培养癌细胞株改良培养法

人芽囊原虫纯培养的建立及SD大鼠感染模型Th1/Th2细胞因子表达变化的研究

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人芽囊原虫纯培养的建立及SD大鼠感染模型Th1/Th2细胞因子表达变...

作者：廖德君广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨碘染色法与改良培养法在人芽囊原虫(Blastocystis hominis,B.h)检出中的应用,并以此获得虫株后建立B.h纯培养体系,进而采用纯培养虫株建立SD大鼠感染模型,动态研究B.h感染大鼠的Th1/Th2平衡调节。方法:比较普通培养法和改良培... 详细信息

目的:探讨碘染色法与改良培养法在人芽囊原虫(Blastocystis hominis,B.h)检出中的应用,并以此获得虫株后建立B.h纯培养体系,进而采用纯培养虫株建立SD大鼠感染模型,动态研究B.h感染大鼠的Th1/Th2平衡调节。方法:比较普通培养法和改良培养法的最低检出限、生长曲线及厌氧环境形成时间;从广西医科大学附属肿瘤医院门诊检验科收取397份粪便样本,采用碘染色法和改良培养法对样本进行检测,对阳性标本采用碘染色法和三色染色法进行染色观察,比较阳性检出率,以改良培养法为金标准,计算碘染色法的灵敏度、特异度、一致率和kappa值,采用PCR方法进行基因分型;采用LES培养基进行带菌培养,联合使用青霉素(1000U/ml)、链霉素(1000ug/ml)、两性霉素B(2.5 ug/ml)、磷霉素(20ug/ml)、阿莫西林-克拉维酸钾混悬液(31.25ug/ml)、氯霉素(20ug/ml)等6种抗生素进行无菌纯培养,使用鸡蛋上清液-马血清-Bacto agar混合琼脂平板,进行单克隆试验;获取纯培养虫株后,取30只SD大鼠,分5组,每组6只,经地塞米松免疫抑制后,实验组经口感染107/只,对照组经口灌食等量灭菌PBS,分别于0d、3d、6d、9d和14d处死大鼠取材,酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA)检测大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-10的表达水平,比色法检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的含量,HE染色观察结肠组织病理损伤,荧光定量PCR检测结肠中IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-10 mRNA的表达水平。结果:改良培养法的最低检出限低于普通培养法,改良培养法在b.h的密度在前3天高于普通培养法;在粪便及短期培养的标本中,可观察到空泡型和颗粒型,在粪便标本中可以观察到包囊;碘染色法的阳性率为1.01%,改良培养法的阳性率为5.54%,两者的阳性率差别有统计学意义;以改良培养法结果为金标准,碘染色法的灵敏度为18.18%,特异度为100%,一致率为95.47%,kappa值为29.57%;带菌培养和纯培养的b.h均以空泡型为主,带菌培养和纯培养的密度到达峰值的时间基本相同,但是带菌培养的密度下降很快,纯培养的密度下降缓慢,维持较高的密度;在鸡蛋上清液-马血清-bactoagar混合琼脂平板表面可观察到“菌落状”白色圆点,倒置显微镜下可看到大量空泡型虫体;感染大鼠与对照组的结肠病理评分为0分,感染大鼠结肠的mpo含量与对照组相比无显著改变;感染大鼠血清中ifn-γ和il-4的表达水平与对照组相比无显著改变,14d组大鼠血清中tnf-α与对照组相比较有显著改变(p=0.002),3d组(p=0.003)、6d组(p=0.013)、9d组(p=0.004)、14d组(p=0.000)大鼠血清中的il-10与对照组相比较均有统计学意义;各组结肠中细胞因子ifn-γmrna表达比较具有统计学差异(f=144.979,p=0.000),其中3d组、6d组和14d组与对照组相比较均具有统计学意义(p改良培养法的灵敏度高于碘染色法,可用于b.h的实验室诊断;联合大剂量使用抗生素可以获得纯培养的虫株并用固体培养基实现b.h的单克隆,且体外纯培养的B.h虫株可成功感染SD大鼠;ST3型B.h感染可影响大鼠Th1/Th2的平衡调节。

关键词：人芽囊原虫改良培养法纯培养 Th1/Th2