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排斥性导向分子a抑制剂6FNⅢ对大鼠大脑皮质神经元缺血再灌注后自噬的作用

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解剖学报 2017年第4期48卷 381-386页

作者：谢扉秦新月张融融李敏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆400016

目的探讨排斥性导向分子a(RGMa)特异性抑制剂6FNⅢ对大鼠大脑皮质神经元缺血再灌注引发的自噬及对神经功能恢复的影响。方法雄性成年SD大鼠立体定位侧脑室注射不同浓度6FNⅢ后建立大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注模型,Western blotting检测... 详细信息

目的探讨排斥性导向分子a(RGMa)特异性抑制剂6FNⅢ对大鼠大脑皮质神经元缺血再灌注引发的自噬及对神经功能恢复的影响。方法雄性成年SD大鼠立体定位侧脑室注射不同浓度6FNⅢ后建立大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注模型,Western blotting检测RGMa下游分子脑衰反应调节蛋白-2(CRMP-2)蛋白表达水平,确定最佳6FNⅢ干预浓度。将72只雄性成年SD大鼠随机分成4组:假手术组(sham)、脑缺血再灌注组(I/R)、生理盐水干预组(I/R+NS)、6FNⅢ干预组(I/R+6FNⅢ),每组18只。缺血2h再灌注后24h,采用神经功能缺损评分评估各组大鼠神经功能恢复情况;Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ水平;免疫荧光双标检测LC3在神经元内的表达情况;透射电子显微镜观察自噬体的形成情况。结果根据各浓度6FNⅢ干预组CRMP-2表达,确定中浓度(0.5 g/L)为本实验的最适浓度。缺血再灌注后24h,I/R组较sham组神经功能评分降低(P0.05)。结论 RGMa特异性抑制剂6FNⅡ可在缺血再灌注急性期抑制自噬发生,促进神经功能恢复。

关键词：排斥性导向分子a 6FNⅢ 脑缺血再灌注自噬免疫印迹法大鼠

沉默排斥性导向分子a对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用

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解剖学报 2019年第3期50卷 269-274页

作者：李敏伏红霞张艳梅钟义良秦新月内蒙古自治区人民医院神经内科呼和浩特010017 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016

目的观察沉默排斥性导向分子a(RGMa)对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白的影响。方法雄性成年SD大鼠立体定位侧脑室注射腺病毒后建立大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注(I/R)模型。将成年雄性SD大鼠40只,分为空白对照组(sh-con)和R... 详细信息

目的观察沉默排斥性导向分子a(RGMa)对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白的影响。方法雄性成年SD大鼠立体定位侧脑室注射腺病毒后建立大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注(I/R)模型。将成年雄性SD大鼠40只,分为空白对照组(sh-con)和RGMa干扰组(sh-RGMa),分别在注射后1 d和3d观察腺病毒对RGMa的影响。将其余120只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、空病毒组(I/R+sh-con)及病毒组(I/R+sh-RGMa);I/R 72 h后采用神经功能缺损评分评估各组大鼠神经功能恢复情况;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量脑梗死体积;采用静脉注射伊文思蓝观察血脑屏障通透性的改变;应用Western blotting和免疫组织化学染色检测RGMa的变化;应用Western blotting检测血脑屏障完整性相关紧密连接蛋白5(claudin-5)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达。结果缺血再灌注后72 h,I/R组较sham组神经功能评分降低,沉默RGMa能改善血脑屏障通透性,减少脑梗死体积;可下调MMP-9及上调claudin-5和ZO-1的表达。结论沉默RGMa对脑缺血再灌注损伤大鼠的血脑屏障有保护作用。

关键词：排斥性导向分子a 缺血再灌注损伤血脑屏障免疫印迹法大鼠

大鼠脑缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子a的表达变化

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解剖学报 2019年第4期50卷 405-410页

作者：吴燕平秦新月张融融黄思源张磊重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室

目的探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子a(RGMa)的表达变化。方法取雄性SD大鼠30只,随机分成对照组,缺血再灌注损伤7 d、14 d模型组(I/R),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(t MCAO);Real... 详细信息

目的探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子a(RGMa)的表达变化。方法取雄性SD大鼠30只,随机分成对照组,缺血再灌注损伤7 d、14 d模型组(I/R),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(t MCAO);Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg-1)及CD206 mRNA的表达;免疫荧光检测缺血区小胶质细胞RGMa的表达;体外培养小胶质细胞,分别用M1或M2型小胶质细胞的诱导物脂多糖(LPS)或IL-4诱导24 h后,利用Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子IL-1β、i NOS、Arg-1、CD206 mRNA的表达;Western blotting检测M1、M2型小胶质细胞上RGMa的表达。结果缺血再灌注损伤后7 d、14 d,M1、M2型小胶质细胞的标记分子表达增加。缺血后7 d、14 d激活的小胶质细胞上RGMa大量表达。RGMa在体外培养的LPS诱导极化的M1型小胶质细胞和IL-4诱导极化的M2型小胶质细胞上表达均显著增加。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后,RGMa在缺血区M1型和M2型极化的小胶质细胞上均大量表达,RGMa可能在小胶质细胞激活极化过程中发挥重要作用。RGMa可能是缺血性脑卒中治疗的新靶点。

关键词：排斥性导向分子a 脑缺血再灌注损伤小胶质细胞极化免疫印迹法实时定量聚合酶链反应大鼠

TIA近期进展ACI患者血小板微粒和血清RGMa及CTP参数的变化及意义

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中国实用神经疾病杂志 2024年第7期27卷 831-836页

作者：李腾付厚秀韩荣坤河北省沧州中西医结合医院河北沧州061000

目的探讨短暂性脑缺血发作(TIA)近期进展急性脑梗死(ACI)患者血小板微粒和血清排斥性导向分子a(RGMa)及CT灌注成像(CTP)参数的变化及意义。方法选取2020-01—2023-06河北省沧州中西医结合医院收治的TIA患者118例,根据是否发生ACI将患者... 详细信息

目的探讨短暂性脑缺血发作(TIA)近期进展急性脑梗死(ACI)患者血小板微粒和血清排斥性导向分子a(RGMa)及CT灌注成像(CTP)参数的变化及意义。方法选取2020-01—2023-06河北省沧州中西医结合医院收治的TIA患者118例,根据是否发生ACI将患者分为ACI组(35例)及非ACI组(83例)。比较2组患者的基线资料、影像学结果、血小板微粒和血清RGMa水平,采用多因素Logistic回归分析TIA患者近期进展ACI的危险因素,采用受试者工作(ROC)曲线分析血小板微粒和RGMa诊断TIA患者近期进展ACI的临床价值。结果ACI组TIA发作次数、持续时间、血小板微粒计数以及血清RGMa水平均显著高于非ACI组(P<0.05),CBF、CBV均低于非ACI组(P<0.05),MTT、TTP均高于非ACI组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,发作次数≥3次、持续时间≥60 min、CBF和CBV降低、MTT和TTP升高、血小板微粒计数高以及血清RGMa水平高是TIA患者进展为ACI的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血小板微粒及血清RGMa对TIA患者近期进展为ACI的最佳截断点分别为8.84×10^(9)个/L、5.22μg/L,血小板微粒、血清RGMa及联合CTP检查的灵敏度分别为71.43%、74.29%、80.00%,特异度分别为91.56%、83.13%、95.18%,准确度分别为85.59%、80.51%、90.68%,AUC分别为0.849、0.825、0.912。结论TIA患者进展ACI后CBF、CBV降低,MTT、TTP升高,血小板微粒计数及血清RGMa水平显著升高,均对TIA患者进展ACI具有一定的预测价值,血小板微粒计数及血清RGMa联合CTP检测的价值更高。

关键词：短暂性脑缺血发作急性脑梗死血小板微粒排斥性导向分子a CT灌注成像危险因素预测价值

自身免疫性脑炎患者血清中RGMa的表达及临床特征分析

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自身免疫性脑炎患者血清中RGMa的表达及临床特征分析

作者：唐诗重庆医科大学

学位级别：硕士

背景:自身免疫性脑炎（Autoimmune encephalitis,AE）是由特异性自身抗体介导的中枢神经系统（CNS）自身免疫性疾病,严重者可造成患者死亡,危害重大,而复发型AE患者的生活质量受到影响,增加了家庭和社会负担。与脑脊液标志物相比,血清... 详细信息

背景:自身免疫性脑炎（Autoimmune encephalitis,AE）是由特异性自身抗体介导的中枢神经系统（CNS）自身免疫性疾病,严重者可造成患者死亡,危害重大,而复发型AE患者的生活质量受到影响,增加了家庭和社会负担。与脑脊液标志物相比,血清标志物同样有助于AE的诊断,且更方便进行临床干预、采集和保存。我们的研究通过检测血清标志物,来研究其与AE的相关性,以期能为临床诊治提供新的思路和更便利的辅助性手段。分析影响AE预后的因素,可早期进行临床干预。排斥性导向分子a（Repulsive guidance molecule a,RGMa）是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白,具有抑制神经元轴突生长和免疫调节等多种功能。研究表明RGMa在多个CNS免疫性疾病中发挥着重要作用。目前RGMa与AE的关系尚未明确,亟待展开研究。血清RGMa可能作为反应CNS神经功能受损的标志物。目的:探讨RGMa在AE患者血清中的表达水平及其与临床特征的关系。了解AE的临床特征及影响预后的因素。方法:纳入2018年4月—2021年12月于重庆医科大学附属第一医院神经内科住院的首次诊断为AE的患者48例,收集并分析一般资料、临床表现、辅助检查、治疗及预后。收集同期性别、年龄相匹配的60例健康对照者作为对照组,采用酶联免疫法（Enzyme linked immune-assay,ELISA）检测AE患者及对照组血清中RGMa表达水平。采用线性回归分析RGMa表达水平与人口统计学特征,临床特点以及多个临床指标的相关性。分析AE的临床特征,采用Logistic回归分析影响预后的因素。结果:（1）AE患者血清中RGMa浓度为1448.29（790.26,2179.90）pg/ml,对照组血清中RGMa浓度为608.45（536.04,1243.70）pg/ml,AE患者与对照组血清中RGMa表达水平存在显著差异（P＜0.001）。（2）低RGMa组中合并睡眠障碍的患者比例明显高于高RGMa组（66.67%vs.25.00%,P=0.004）。（3）男性患者血清中RGMa表达水平普遍高于女性患者（R=-0.297,P=0.041）,合并言语障碍的患者血清中RGMa表达水平较其他患者高（R=0.451,P=0.001）。合并运动障碍的患者血清RGMa表达水平较其他患者低（R=-0.342,P=0.017）。AE患者血清甘油三酯含量与RGMa表达水平呈负相关（N=41,R=-0.359,P=0.021）。（4）AE平均发病年龄为34.46±14.59岁,男女比例为1:0.92。精神症状（93.75%）和癫痫发作（66.67%）是AE最常见的临床症状。（5）Logistic回归分析显示意识障碍（OR=6.723,95%CI:1.102-41.015,P=0.039）与AE预后不良相关。结论:本研究发现RGMa在AE患者血清中高表达,某些临床特征与RGMa表达具有一定关联,但RGMa与AE的具体关系尚不明确,未来仍需进行更深入的研究。AE患者精神症状突出。意识障碍是导致AE预后不良的独立危险因素。

关键词：自身免疫性脑炎排斥性导向分子a 临床特征预后机制

RNA干扰RGMa对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质血管再生的影响

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第二军医大学学报 2016年第4期37卷 441-445页

作者：王玉秦新月张融融幸享凤谢扉重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆400016

目的探讨RNA干扰排斥性导向分子a(repulsive guidance molecule a,RGMa)对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质血管再生的作用及其可能的机制。方法大鼠随机分为假手术组(S组)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组)、脑缺血再灌注损伤+RGMa特异性RNA... 详细信息

目的探讨RNA干扰排斥性导向分子a(repulsive guidance molecule a,RGMa)对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质血管再生的作用及其可能的机制。方法大鼠随机分为假手术组(S组)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组)、脑缺血再灌注损伤+RGMa特异性RNA干扰重组腺病毒干预组(I/R+rAd-shRGMa组)以及脑缺血再灌注损伤+空载体重组腺病毒注射组(I/R+rAd-HK组)。大鼠在脑缺血前接受腺病毒注射,然后采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。再灌注后2d免疫荧光双标法定位RGMa及其受体Neogenin在血管内皮细胞上的表达。腺病毒注射后7d,免疫组化标记CD31+的血管内皮细胞,计数大脑皮质缺血周围区微血管数;蛋白质印迹实验检测血管内皮生长因子a(VEGFa)蛋白表达水平;评估神经功能缺损。结果在缺血再灌注损伤后,RGMa及其受体Neogenin在CD31+细胞上均有表达。RNA干扰抑制RGMa表达后,微血管数量增多,VEGFa蛋白表达水平升高,神经功能缺损减轻。结论 RNA干扰RGMa表达可促进缺血再灌注损伤后缺血皮质周围区血管再生,该过程可能与脑组织VEGFa表达水平上调有关。

关键词：排斥性导向分子a 脑缺血再灌注损伤血管再生

运动锻炼对局灶性脑缺血大鼠脑皮质RGMa表达的影响

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重庆医科大学学报 2011年第5期36卷 578-582页

作者：郭振委秦新月孔渝菡重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市高校神经病学重点实验室重庆400016

目的:探讨运动锻炼对卒中后大鼠缺血侧脑皮质排斥性导向分子a(RepulsiveguidancemoleculeA,RGMa)表达的影响。方法:选用SD大鼠120只,随机分为5组,正常组,假手术组,MCAo模型7、14、28 d组,以上各组再分为:非运动、低运动量、中动量、高... 详细信息

目的:探讨运动锻炼对卒中后大鼠缺血侧脑皮质排斥性导向分子a(RepulsiveguidancemoleculeA,RGMa)表达的影响。方法:选用SD大鼠120只,随机分为5组,正常组,假手术组,MCAo模型7、14、28 d组,以上各组再分为:非运动、低运动量、中动量、高动量锻炼组,每组6只。应用线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,用实时定量PCR和免疫组化方法检测缺血侧脑皮质RGMa的表达。结果:①实时定量PCR:低运动量模型各组与对应时间点非运动模型组比,RGMa相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。中运动量模型各组与各对应时间点非运动模型组相比,前者表达量显著下降(P0.05)。中运动量模型各组与对应时间点各非运动模型组相比,前者RGMa表达明显下降(P0.05),高运动量模型各组与对应时间点各非运动模型组相比,RGMa表达明显增加(P性脑缺血大鼠患侧皮质RGMa的表达,改善神经功能。

关键词：运动锻炼脑缺血排斥性导向分子a 实时定量PCR

RGMa在视神经脊髓炎谱系疾病的表达及临床相关性分析

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RGMa在视神经脊髓炎谱系疾病的表达及临床相关性分析

作者：汤金华重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在研究排斥性导向分子a(Repulsive Guidance Molecule a,RGMa)在视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)中的表达,并探讨RGMa与NMOSD临床特征之间的相关性。方法:纳入2017年10月至2020年1月的54例NMOSD患者和22例性别、年龄相匹配的健康对照者(healthy controls,HC)的临床资料,并通过酶联免疫法(enzyme linked immune-assay,ELISA)检测血清RGMa的表达。然后通过线性回归分析了RGMa表达水平与人口统计学特征,扩展残疾状态量表(Expanded Disability Status Scale,EDSS)评分,MRI增强程度和水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)滴度等临床指标间的相关性。结果:54例NMOSD患者中男14例,女40例。对于RGMa的表达,NMOSD组高于HC组(P性期组高于慢性期组(P性组高于AQP4阴性组(P=0.002)。NMOSD患者中RGMa表达与入院EDSS评分或MRI增强程度,脊髓病变长度,AQP4滴度之间呈正相关(P性分析提示,RGMa可能是反映NMOSD严重程度和疾病活动性的潜在生物标志物。RGMa可能通过影响血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性和AQP4参与NMOSD的发病机制,但有待进一步研究以证实。

关键词：视神经脊髓炎谱系疾病排斥性导向分子a 相关性分析

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RGMa在多发性硬化中的研究进展

现代医药卫生 2021年第17期37卷 2947-2951页

作者：汤金华杨军鞠露(综述) 冯金洲(审校) 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016

排斥性导向分子a(RGMa)属糖基磷脂酰肌醇锚定的蛋白家族成员,具有轴突生长抑制功能,广泛参与中枢神经系统(CNS)发育及病理各个过程。多项研究表明,RGMa参与多发性硬化(MS)的发病机制,靶向抑制RGMa可增强MS的神经系统功能恢复,可能成为治... 详细信息

排斥性导向分子a(RGMa)属糖基磷脂酰肌醇锚定的蛋白家族成员,具有轴突生长抑制功能,广泛参与中枢神经系统(CNS)发育及病理各个过程。多项研究表明,RGMa参与多发性硬化(MS)的发病机制,靶向抑制RGMa可增强MS的神经系统功能恢复,可能成为治疗MS的非常有前景的靶点。该文就RGMa在MS中的最新研究进展进行综述。

关键词：排斥性导向分子a 多发性硬化神经再生综述