检索结果-南通市图书馆

持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重庆医科大学学报 2022年第5期47卷 529-537页

作者：宋志靖张浩令蒋宇航王凯宁浩驰裴雪冬陈海亮宋敏王薇甘肃中医药大学中医临床学院兰州730000 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 甘肃中医药大学针灸推拿学院兰州730000

目的:通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法:采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、G... 详细信息

目的:通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法:采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、GSVA分析,利用NCBI GEO数据库、Genecards数据库、molecular signatures database数据库,分析对比持续静压力环境下MC3T3-E1细胞差异表达基因,筛选Hub基因,对比分析其与骨质疏松症信号通路关联的分子学机制。结果:在持续静压力环境下,MC3T3-E1细胞增殖显著降低,在1.0 MPa处理8 h和0.5 MPa处理24 h细胞模型组的细胞骨架中,微管蛋白和肌动蛋白的抑制作用显著。通过空白组与模型组基因测序对比后发现29164个差异基因,其中14489个上调、14675个下调。这些差异基因涉及1658个GO功能,包括1096 GO_BP(生物过程),255 GO_CC(细胞组分),307 GO_MF(分子功能),MC3T3-E1细胞在持续静压力作用下受到差异基因调控的信号转导通路有305个。最后筛选出的Hub基因为BTK、CSF1R、MATK、NOS1、PDGFRB,骨质疏松症中MATK表达显著(P持续静压力可降低MC3T3-E1细胞增殖活性,并降低细胞骨架中微管蛋白和肌动蛋白表达;MATK可能作为持续静压力环境下调控MC3T3-E1细胞成骨基因,并与骨质疏松症3个关键信号传导途径相关。

关键词： MC3T3-E1细胞持续静压力基因测序骨质疏松症

持续静压力作用下人牙周膜细胞OPG、RANKL表达的增龄性变化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

持续静压力作用下人牙周膜细胞OPG、RANKL表达的增龄性变化

作者：吴洁河北医科大学

学位级别：硕士

目的:通过细胞实验观察持续静压力作用下人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)表达骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的增龄性变化,探讨正畸牙移动过程中年龄因素对压力侧骨改建的影响及其分子生物学机制。方法:1.收集因治疗需要拔除的健康离体牙,分离根中1/3的牙周膜,组织块法原代培养获得HPDLCs。通过苏木素-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining solution,HE)观察细胞大小、形态,免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。2.根据受试者年龄将所获得HPDLCs分为A组(13-18岁)、B组(19-29岁)、C组(30-44岁),共三组。使用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)描绘细胞生长曲线以观察比较不同年龄组HPDLCs的增殖能力;β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色检测不同年龄组HPDLCs的衰老细胞比率。3.将A、B、C各组细胞均按加力时间进一步分为8小组,分别给予0,1.5,3,6,12,24,48,72小时持续静压力机械刺激,压力刺激去除后立即提取上清。每个小组均设有空白对照,与压力组加力同步计时,并提取上清。酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)检测上清液,并比较不同年龄组HPDLCs在持续静压力作用下OPG、RANKL的表达水平变化。结果:1.组织块法可成功培养出HPDLCs。培养3-15天后在倒置相差显微镜下可见不同年龄组组织块周围均有细胞爬出。三组细胞培养中,A组(13-18岁)细胞爬出时间为4±2天,B组(19-29岁)细胞爬出时间为7±2天,C组(30-44岁)细胞爬出时间为10±3天。A组、C组之间比较差异具有统计学意义(P>0.05),其余组间比较均无统计学意义(P>0.05)。2.HE染色光镜下观察可见胞体为长梭形或星形。胞质嗜伊红,胞核嗜碱性,符合HPDLCs形态学特征;免疫细胞化学染色光镜下观察可见细胞角蛋白(Cytokeration,CK)染色阴性,波形丝蛋白(Vimentin,VIM)染色阳性,结合取材部位,判定所培养细胞为HPDLCs。3.CCK-8细胞计数检测:各组HPDLCs数量均随时间增长而增加。培养7天后A、B、C三组细胞增殖能力A组(13-18岁)>B组(19-29岁)>C组(30-44岁),差异具有统计学意义(PB组(4.2%±0.5%)>A组(2.1%±0.2),三组两两比较均具有统计学意义(P压力组OPG、RANKL蛋白浓度均随加力时间延长而增加,相同时间点OPG蛋白表达水平随年龄增长而增加(P压力组与空白对照组比较:OPG加力前后比较,A、B、C三组差异均具有统计学意义(P持续静压力作用下增龄因素可下调RANKL蛋白表达。OPG蛋白表达随加力时间增加而上升,相同时间点蛋白表达量随年龄增长而增加,表明持续静压力作用下增龄因素可上调OPG蛋白表达。OPG/RANKL蛋白比值随加力时间呈先下降后增加趋势,相同时间点OPG/RANKL比值随年龄增长而增大,表明持续静压力作用下,增龄因素可上调OPG/RANKL比值,影响压力侧骨吸收,减慢成人正畸患者牙齿移动速度。

关键词：增龄正畸人牙周膜细胞持续静压力 OPG RANKL

持续静压力作用下内质网应激对牙周膜细胞成骨分化的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

口腔疾病防治 2019年第8期27卷 485-489页

作者：任庆源何武林王庆褚洪星林海燕南方医科大学口腔医院正畸科广东广州510280 南方医科大学口腔医院牙周种植科广东广州510280

目的研究持续静压力(continuously compressive pressure,CCP)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)内质网的影响及成骨分化的机制。方法用定制圆形玻璃片对体外培养的hPDLCs施加1 g/cm2CCP,分别加力0、2、4、6 h后,进行碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况,以及实时定量PCR检测蛋白激酶受体样内质网激酶(protein kinase receptorlike ER kinase,PERK)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、转录激活因子4(transcription activation factor 4,ATF4)的表达情况,以加力0 h为对照组。结果hPDLCs经CCP处理后,其碱性磷酸酶染色呈蓝紫色,与对照组相比显著加深;经CCP处理后的各组hPDLCs,PERK、ATF4表达量均较对照组增高(P<0.05),且表达量随时间递增(P<0.05),eIF2α表达量均较对照组降低(P<0.05),且表达量随时间降低(P<0.05)。结论机械力刺激可促进内质网应激,激活PERK-eIF2α–ATF4信号通路,从而促进hPDLCs成骨分化。

关键词：人牙周膜细胞 PERK-eIF2α-ATF4通路内质网应激持续静压力成骨分化

持续静压力对成骨样细胞整合素a5和整合素β1mRNA表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

持续静压力对成骨样细胞整合素a5和整合素β1mRNA表达的影响

作者：王明朗中南大学

学位级别：硕士

目的：观察单层培养的成骨样细胞加载不同持续静压力后，细胞形态学变化，探讨不同静压力对成骨样细胞整合素a5、β1mRNA表达的影响。方法：1．复苏MG-63细胞株，对其进行培养传代。2．把细胞接种于培养皿中，分为对照组和压力组，对照... 详细信息

目的：观察单层培养的成骨样细胞加载不同持续静压力后，细胞形态学变化，探讨不同静压力对成骨样细胞整合素a5、β1mRNA表达的影响。方法：1．复苏MG-63细胞株，对其进行培养传代。2．把细胞接种于培养皿中，分为对照组和压力组，对照组不加力，压力组细胞又分为15kpa、30kpa、45kpa三个力值组，每个力值组共有15个样本，每次取3个样本进行加压，分别加压1hr、4hr、8hr、12hr、24hr。加压完成后收集细胞，用RT-PCR检测整合素a5、β1mRNA表达变化。结果：1．在自制加压装置内培养细胞后，细胞的形态学未见到明显改变。2．加力15kpa、30kpa时成骨样细胞整合素a5、β1 mRNA表达随时间延长而增加，与阴性对照组和45kpa组有显著性差异，30kpa组24hr表达量最高，45kpa组加力1hr、4hr后整合素a5、β1mRNA表达增加，随加力时间延长而表达下降。结论：1．自制加压装置能够对细胞进行持续静压力实验。2．在生理应变范围内，成骨样细胞整合素α5和β1 mRNA的表达随压力及时间的增加而表达增加，当压力应变超过细胞的生理应变范围后，整合素α5和β1 mRNA表达会降低。

关键词：成骨样细胞持续静压力整合素压力装置

持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28表达的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牙体牙髓牙周病学杂志 2008年第2期18卷 61-64页

作者：冯元轩昆杨富生樊淑梅第四军医大学口腔医院陕西西安710032

目的:研究持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28(ADAM28)表达的影响。方法:通过自制的细胞体外加载装置,将MC3T3-E1成骨样细胞分别施加50、100、150kPa的持续静压力1h,再分别培养24h、48h后,观察细胞在形态上的相应变化,... 详细信息

目的:研究持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28(ADAM28)表达的影响。方法:通过自制的细胞体外加载装置,将MC3T3-E1成骨样细胞分别施加50、100、150kPa的持续静压力1h,再分别培养24h、48h后,观察细胞在形态上的相应变化,并用免疫组织化学染色的方法检测受力作用后ADAM28的染色情况。结果:细胞受力后,其ADAM28免疫组化染色强度随压力值的增大而明显降低;加压后细胞培养24h和48h两组染色强度无明显差异。结论:不同大小的静压力可以影响成骨细胞系MC3T3-E1上ADAM28金属蛋白酶解离素28表达强度,进而影响骨改建。

关键词：成骨细胞持续静压力金属蛋白酶解离素28

压力与牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西安交通大学学报（医学版） 2009年第3期30卷 318-322页

作者：吴承琼周洪王晓荣西安交通大学医学院附属口腔医院正畸科口腔医学研究中心陕西西安710004

目的研究持续静压力和人牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响,初步探讨静压力和牙周膜细胞在正畸性骨改建中的作用机制。方法密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。用组织块酶消化法培养获得牙周膜细胞。建立tra... 详细信息

目的研究持续静压力和人牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响,初步探讨静压力和牙周膜细胞在正畸性骨改建中的作用机制。方法密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。用组织块酶消化法培养获得牙周膜细胞。建立transwell共培养系统,下层接种脐血单个核细胞,上层接种牙周膜细胞。A组为单核细胞与牙周膜细胞共培养加力;B组为单核细胞培养加力,另设不加力对照组A’、B’组。采用倒置相差显微镜观察及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞的形成及功能。结果A组下层细胞在加力后第2天出现细胞融合现象,3 d时可见明显的多核破骨样细胞,TRAP染色阳性,骨磨片染色可见典型的骨吸收陷窝。其他组仅有极少量多核细胞形成,未见骨吸收陷窝。结论静压力作用下,牙周膜细胞可以刺激脐血单核细胞分化为破骨样细胞。

关键词：脐血单核细胞牙周膜细胞持续静压力破骨样细胞

Adam28在小鼠成骨细胞样细胞系MC3T3-E1中的表达研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Adam28在小鼠成骨细胞样细胞系MC3T3-E1中的表达研究

作者：冯元第四军医大学

学位级别：硕士

牙齿萌出,牙槽骨改建都是牙齿发育中的正常生理现象,其中萌出通道的形成及牙槽骨改建都是发育过程中的重要环节,在这些过程中成骨细胞发挥重要作用,它通过释放细胞因子及自身感受内外环境等刺激因素,与破骨细胞相互调节,从而使牙槽骨改... 详细信息

牙齿萌出,牙槽骨改建都是牙齿发育中的正常生理现象,其中萌出通道的形成及牙槽骨改建都是发育过程中的重要环节,在这些过程中成骨细胞发挥重要作用,它通过释放细胞因子及自身感受内外环境等刺激因素,与破骨细胞相互调节,从而使牙槽骨改建过程中的骨吸收和骨形成达到一种动态平衡,以保证牙齿发育过程处于正常状态。ADAM28是ADAM家族最近发现的一种跨膜分泌型糖蛋白,它同样具有ADAM家族的生理功能:参与细胞增殖,分化,胞外基质分泌﹑裂解基质蛋白和细胞迁移等。研究显示,ADAM28基因参与了牙胚的发育过程,并在牙源性间充质细胞的增殖﹑分化和凋亡中发挥重要的调控作用。同时ADAM28基因具有金属蛋白酶活性,因而它对于细胞外基质的形成和很多分子的外功能区处理有重要的调节作用。本课题的研究目的是从蛋白和mRNA水平探讨adam28对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的生物学特性的影响,并从中分析它可能的作用机制,为今后对ADAM28功能的深入研究提供可靠的实验和理论依据。本课题的主要研究内容和结果如下: 实验一:采用细胞培养,免疫组织化学和免疫荧光染色方法检测ADAM28在成骨细胞的染色情况。结果证实:adam28在体外培养小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1上有表达;提示其可能参与了成骨细胞的生物学功能。实验二:采用细胞培养,RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测adam28mRNA在小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的表达情况。结果证实:adam28mRNA表达于小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1;提示成骨细胞样细胞MC3T3-E1可能自身分泌adam28。实验三:通过自制的细胞体外加载装置,对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1依次施加50KPa,100KPa,150KPa的持续静压力1h后,分别培养24h和48h;观察细胞在形态学上的相应变化,并通过免疫组织化学染色方法检测受力作用后adam28蛋白的表达情况。结果显示:细胞受力后, adam28免疫组化染色强度随压力值的增大而明显降低;加压后细胞培养24h和48h无明显差异;提示不同大小的静压力可以影响成骨细胞样细胞MC3T3-E1上adam28蛋白表达强度,并对成骨细胞的一些生物学活动起到一定作用。实验四:通过自制的细胞体外加载装置,对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1依次施加50KPa,100KPa,150KPa的持续静压力1h,分别培养24h和48h;使用RT-PCR的方法在mRNA水平上检测受力作用后adam28mRNA的表达情况。结果显示:细胞受力后,其adam28在mRNA水平上的表达随压力值增大而明显降低,提示在应力状态下,小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的生物学功能发生一定的改变,进而影响了合成adam28的过程。

关键词：金属蛋白酶解离素28 小鼠成骨细胞细胞培养持续静压力