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拟穴青蟹PDI保守区域的克隆与序列分析

厦门大学学报（自然科学版） 2009年第6期48卷 895-899页

作者：刘元婧杨玉荣叶海辉黄辉洋王桂忠李少菁厦门大学海洋与环境学院厦门大学生命科学学院福建厦门361005

蛋白二硫键异构酶（PDI）是真核生物重要的多功能蛋白，其基因结构在虾蟹类尚未报道．从拟穴青蟹Scyllapa。ramamosain（Estampador，1949）脑组织中分离纯化总RNA，经逆转录得到cDNA第一条链，并以之为模板利用RACE（rapid—amplificat... 详细信息

蛋白二硫键异构酶（PDI）是真核生物重要的多功能蛋白，其基因结构在虾蟹类尚未报道．从拟穴青蟹Scyllapa。ramamosain（Estampador，1949）脑组织中分离纯化总RNA，经逆转录得到cDNA第一条链，并以之为模板利用RACE（rapid—amplificationofcDNAends）技术，扩增出一条950bp的cDNA．将所得cDNA克隆到质粒载体pTZS7R／T，转化大肠杆菌DH5a细胞并对筛选的阳性克隆测序．通过与目前数据库中序列的比较，在此cDNA编码蛋白中发现其中i01个氨基酸与其他物种已知蛋白二硫键异构酶（PDI）中的PDI_a_PDI_a＇_C保守区域相似率在64％～79％之间．确定此cDNA编码拟穴青蟹PDI_a_PDI_a＇_C保守区域．

关键词：蛋白二硫键异构酶 PDI_a_PDI_a'_C保守区域拟穴青蟹基因克隆序列分析

拟穴青蟹大眼幼体和第Ⅰ期仔蟹底质选择的研究

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台湾海峡 2009年第2期28卷 254-259页

作者：陈学雷李少菁林琼武王桂忠艾春香叶海辉张雪丽厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005

拟穴青蟹大眼幼体和仔蟹对海泥和泥沙底质的选择性显著高于各种粒径的沙底（粒度0.06～2.00mm）.其原因可能与海泥和泥沙底质在流动海水中物理稳定性高于沙砾有关.通过以埋栖选择性和相对埋栖率为指标考察了大眼幼体和仔蟹的栖息方式,... 详细信息

拟穴青蟹大眼幼体和仔蟹对海泥和泥沙底质的选择性显著高于各种粒径的沙底（粒度0.06～2.00mm）.其原因可能与海泥和泥沙底质在流动海水中物理稳定性高于沙砾有关.通过以埋栖选择性和相对埋栖率为指标考察了大眼幼体和仔蟹的栖息方式,发现白昼大眼幼体埋栖在底质中的比例显著高于夜间,也高于仔蟹;夜间大眼幼体栖息方式与仔蟹差别不明显;并发现大眼幼体栖息方式存在着昼夜差异和昼夜节律性.这揭示了拟穴青蟹大眼幼体对底质的选择性和在底质上栖息的方式表现出对FTT机制的适应.

关键词：海洋生物学拟穴青蟹大眼幼体第Ⅰ期仔蟹底质生境选择

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)两种Ⅰ型高血糖激素基因全长cDNA的克隆及组织表达分析

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海洋与湖沼 2012年第4期43卷 695-701页

作者：舒妙安张龙韬周宇芳胡杭娇徐宾朋郭晓令浙江大学动物科学学院杭州310058

采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种Ⅰ型高血糖激素CHH基因(分别命名为C1与C2)cDNA全序列。序列分析结果表明:C1基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15.326kDa,等电点为5.540;C2基因全长1739... 详细信息

采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种Ⅰ型高血糖激素CHH基因(分别命名为C1与C2)cDNA全序列。序列分析结果表明:C1基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15.326kDa,等电点为5.540;C2基因全长1739bp,开放阅读框长426bp,编码141个氨基酸,分子量为15.621kDa,等电点为7.618。与其它物种CHH氨基酸序列进行同源性比较分析显示,拟穴青蟹CHH基因与榄绿青蟹CHH基因同源性最高(92%),依次为日本鲟(80%)、三疣梭子蟹(78%)。聚类分析表明,拟穴青蟹CHH氨基酸序列与榄绿青蟹和日本鲟紧密聚为一支。经荧光定量检测,拟穴青蟹CHH基因在眼柄、肝胰腺、心脏、肠中表达量较高,鳃、胃中表达量很少,肌肉中表达极少。盐度骤变试验结果表明:盐度胁迫24h后,C2的表达量是C1的30倍以上;C2基因盐度5时与对照组的表达量差异不显著(P>0.05),盐度15时差异显著(P<0.05),盐度22、25、30时差异极显著(P<0.01);盐度变化越大,C2的表达量越大。上述结果为进一步深入研究CHH基因的功能及调控机理奠定基础。

关键词：拟穴青蟹高血糖激素CHH 基因克隆表达分析

拟穴青蟹、斑节对虾和缢蛏不同混养系统氮、磷收支的研究

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水产科学 2021年第4期40卷 483-491页

作者：赵艳飞钟声平王贤丰黄凌光刘旭佳熊向英广西海洋研究所有限责任公司广西北海536000 北海市海城区国家海域动态监管中心广西北海536000

以海水池塘陆基围隔试验法比较研究拟穴青蟹、斑节对虾、缢蛏三元混养模式,以拟穴青蟹、斑节对虾为基础,作为对照组(CS),混以5个不同搭配比例的缢蛏,即5个处理组(CSR1、CSR2、CSR3、CSR4和CSR5),对各混养模式的养殖效果、氮磷收支及利... 详细信息

以海水池塘陆基围隔试验法比较研究拟穴青蟹、斑节对虾、缢蛏三元混养模式,以拟穴青蟹、斑节对虾为基础,作为对照组(CS),混以5个不同搭配比例的缢蛏,即5个处理组(CSR1、CSR2、CSR3、CSR4和CSR5),对各混养模式的养殖效果、氮磷收支及利用率等方面进行单因素方差分析和多重比较。试验结果显示,各混养模式下饲料是氮、磷主要输入方式,分别占氮、磷总输入的84.02%~86.31%与98.08%~98.83%,底泥沉积是氮、磷主要输出方式,分别占氮、磷总支出的44.21%~56.40%与50.38%~60.96%;不同混养模式下,养殖生物在规格、成活率、特定生长率、产量以及产值方面均存在差异,采用CSR3和CSR4混养模式可取得较高养殖效益;氮、磷利用率方面,各处理组氮利用率为12.35%~32.66%,且CSR5>CSR3、CSR4>CSR1、CSR2>CS,差异显著(PCS、CSR1、CSR2,差异显著(P蟹混养系统中加入适量密度缢蛏,可显著提高养殖系统养殖效益与氮、磷利用率。综上所述,结合养殖投入、养殖效益与氮、磷利用率等方面数据,CSR3处理组密度搭配最为合理,即在本试验条件下,青蟹、斑节对虾、缢蛏最优搭配为拟穴青蟹35只/25 m^(2)、斑节对虾300尾/25 m^(2)、缢蛏1000个/25 m^(2)。

关键词：拟穴青蟹斑节对虾缢蛏混养氮磷

拟穴青蟹两种新C-型凝集素基因的克隆与表达分析

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水生生物学报 2015年第2期39卷 321-330页

作者：段利朋黄贝周立红梁英聂品黄文树集美大学水产学院厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心厦门361021

为研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中C-型凝集素(C-lectin)的功能,从其肝胰腺中克隆获得全长858 bp和598 bp的两个C-型凝集素分子,分别命名为Sp-lectin3和Sp-lectin4,其推导的氨基酸序列含有信号肽和一个CRD,其中Sp-lectin4还具有糖... 详细信息

为研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中C-型凝集素(C-lectin)的功能,从其肝胰腺中克隆获得全长858 bp和598 bp的两个C-型凝集素分子,分别命名为Sp-lectin3和Sp-lectin4,其推导的氨基酸序列含有信号肽和一个CRD,其中Sp-lectin4还具有糖类结合的特征性基序"QPD"。Sp-lectin3和Sp-lectin4的开放阅读框分别由5个和4个外显子编码。在正常养殖青蟹的肝胰腺中该两个基因表达量最高,其次是射精管(Sp-lectin3)或肠(Sp-lectin4);除脑和储精囊外的所检测组织/器官中,Sp-lectin4表达量均高于Sp-lectin3。随着胚胎的发育,该两个基因表达量逐渐升高,峰期为溞状幼体,而大眼幼体期的表达量急剧下降,仔蟹期再回升;在胚胎发育阶段除囊胚期外,Sp-lectin4表达量极显著高于Sp-lectin3(P拟穴青蟹的抗细菌感染免疫反应,Sp-lectin3侧重于生殖系统如射精管和储精囊中发挥作用,而Sp-lectin4侧重于在肝胰腺。

关键词：拟穴青蟹 C-型凝集素胚胎发育副溶血弧菌

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)PP2A调节亚基B的基因克隆与表达分析

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海洋与湖沼 2012年第5期43卷 932-937页

作者：刘学良金朱兴黄辉洋叶海辉李少菁厦门大学海洋与地球学院厦门361005

采用RT-PCR、RACE等方法,获得了拟穴青蟹PP2A调节亚基B(PP2A-B)的cDNA全序列,全长2040bp,开放阅读框(ORF)为1332bp,可编码443个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其它一些物种具有很高相似性,推测PP2A-B基因具有很高的保守... 详细信息

采用RT-PCR、RACE等方法,获得了拟穴青蟹PP2A调节亚基B(PP2A-B)的cDNA全序列,全长2040bp,开放阅读框(ORF)为1332bp,可编码443个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其它一些物种具有很高相似性,推测PP2A-B基因具有很高的保守性。经荧光定量PCR检测,PP2A-B基因在拟穴青蟹多个组织中有表达,且在脑、卵巢、鳃中表达量较高。在拟穴青蟹卵巢发育过程中,PP2A-B基因在卵巢未发育期(I期)表达量最高,此后各期逐渐下降,推测PP2A-B在卵巢中可能以PP2A全酶的形式存在,抑制卵巢发育。

关键词： PP2A-B 拟穴青蟹基因克隆荧光定量PCR 卵巢发育

拟穴青蟹线粒体COI基因序列克隆及SNPs位点分析

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生物技术通报 2011年第7期27卷 111-116页

作者：马群群马洪雨马春艳崔海玉马凌波中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海200090 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

根据拟穴青蟹(Scylla paramamosain)线粒体全序列设计引物,采用PCR产物双向测序法,克隆了线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因部分序列(761 bp),并筛选、分析了拟穴青蟹的SNPs位点。共分析了采自福建省宁德市的16只拟穴青蟹,另外,从Gen... 详细信息

根据拟穴青蟹(Scylla paramamosain)线粒体全序列设计引物,采用PCR产物双向测序法,克隆了线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因部分序列(761 bp),并筛选、分析了拟穴青蟹的SNPs位点。共分析了采自福建省宁德市的16只拟穴青蟹,另外,从GenBank数据库中下载了31条前人提交的拟穴青蟹COI基因序列(长度在425-522 bp之间)。利用MEGA4.0软件对所有序列进行比对分析,结果表明碱基T、C、A和G的平均含量分别为37.6%、17.8%、28.9%和15.7%,G+C的含量平均为33.5%。分析结果表明,在所克隆的761 bp的COI基因序列中共发现29个SNPs位点,其出现频率为3.8%。在这29个SNPs位点中,13个为C/T转换(占44.8%),12个为A/G转换(占41.4%),2个为A/T颠换(占6.90%),1个为G/C颠换(占3.45%),另有一个位点(201 bp处)发生了A/C颠换和C/T转换两种类型的碱基替换。氨基酸分析表明,在29个SNPs位点中,有9个位点属于非同义突变,引起了氨基酸的变化;其他20个位点属于同义突变,未引起氨基酸的变化。这将为拟穴青蟹遗传背景和群体遗传多样性研究提供新的分子标记。

关键词：拟穴青蟹 COI基因 SNPs 聚合酶链式反应

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拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究

海洋渔业 2010年第3期32卷 345-350页

作者：王建钢唐保军乔振国邹雄中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海200090 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

在盐度20、温度28.0±0.2℃条件下,采用密封流水方法进行了拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究。结果表明:拟穴青蟹Ⅴ期幼蟹的平均耗氧率高于Ⅵ期幼蟹,Ⅴ期幼蟹的窒息点也高于Ⅵ期幼蟹。其中,当蟹苗体质量为1.00±0.22 g时,耗氧率为0.43... 详细信息

在盐度20、温度28.0±0.2℃条件下,采用密封流水方法进行了拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究。结果表明:拟穴青蟹Ⅴ期幼蟹的平均耗氧率高于Ⅵ期幼蟹,Ⅴ期幼蟹的窒息点也高于Ⅵ期幼蟹。其中,当蟹苗体质量为1.00±0.22 g时,耗氧率为0.437 2±0.083 mg/(g.h),耗氧量0.423 7±0.080 mg/(ind.h),窒息点为0.716 0±0.017 mg/L;当蟹苗体质量为1.81±0.30 g时,耗氧率为0.381 6±0.081 mg/(g.h),耗氧量0.671 7±0.140 mg/(ind.h),窒息点为0.698 7±0.011 mg/L。实验发现,拟穴青蟹幼蟹的耗氧率和耗氧量具有比较明显的昼夜变化规律,其峰值出现在20∶00及02∶00左右,谷值出现在08∶00及16∶00。研究结果可为拟穴青蟹养殖生产中制定合理的苗种放养密度和养殖工艺提供参考依据。

关键词：拟穴青蟹幼蟹耗氧率窒息点

拟穴青蟹14-3-3ζ基因cDNA的克隆和表达分析

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上海海洋大学学报 2013年第4期22卷 496-501页

作者：王晓伟高洁张子平邹志华贾锡伟林鹏王艺磊集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室福建厦门361021

利用SMART RACE技术克隆得到拟穴青蟹ERK信号通路的酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白ζ(14-3-3ζ蛋白)基因。其cDNA全长1 092 bp,编码248个氨基酸。实时定量PCR结果显示14-3-3ζ基因在各组织器官均有表达,但在卵巢中的表达量... 详细信息

利用SMART RACE技术克隆得到拟穴青蟹ERK信号通路的酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白ζ(14-3-3ζ蛋白)基因。其cDNA全长1 092 bp,编码248个氨基酸。实时定量PCR结果显示14-3-3ζ基因在各组织器官均有表达,但在卵巢中的表达量显著高于其他组织(P青蟹卵巢中发挥重要作用。

关键词：拟穴青蟹 14-3-3ζ基因 ERK信号途径组织表达卵巢发育