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拟穴青蟹肌原纤维过敏原抗原表位的综合性分析

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拟穴青蟹肌原纤维过敏原抗原表位的综合性分析

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)六个地理群体肌肉氨基酸和脂肪酸的比较分析

中国食品科学技术学会第十八届年会

作者：李梦思夏菲刘光明集美大学食品与生物工程学院福建省海洋功能食品工程技术研究中心

蟹类作为一种营养价值高、肉质鲜美的水产品而广受消费者喜爱,但随之引起的食物过敏发病率持续上升,主要是由于过敏原序列上存在的抗原表位而导致的。目前,拟穴青蟹肌肉中热稳定的肌原纤维过敏原(原肌球蛋白TM,肌球蛋白轻链MLC)的抗原... 详细信息

蟹类作为一种营养价值高、肉质鲜美的水产品而广受消费者喜爱,但随之引起的食物过敏发病率持续上升,主要是由于过敏原序列上存在的抗原表位而导致的。目前,拟穴青蟹肌肉中热稳定的肌原纤维过敏原(原肌球蛋白TM,肌球蛋白轻链MLC)的抗原表位尚无系统性分析。本研究以蟹TM与MLC为研究对象,利用噬菌体展示技术与一珠一肽化合物技术对其抗原表位进行淘选;获得的肽段序列经生物信息学软件分析划分为模拟线性表位或模拟构象表位;合成肽结合血清学实验验证模拟线性表位,定点突变技术结合血清学试验验证模拟构象表位。利用两种淘选技术共获得TM的10条模拟线性表位与3条模拟构象表位,MLC则包含7条模拟线性表位与7条模拟构象表位;随后,抑制性Dot blot试验表明:TM与MLC的模拟线性表位肽段均能不同程度地抑制蛋白与血清中IgE的结合,其中TM线性表位区域R-T与L-R,MLC线性表位区域L-K、L-L与D-K更重要;对TM与MLC构象表位中的关键氨基酸进行突变而获得构象表位突变体。与野生型过敏原相比,圆二色谱与表面疏水性分析发现各个突变体的二级结构与三级结构都呈现不同程度地改变,ELISA试验发现各个突变体的IgE结合能力都有显著下降,进一步说明TM与MLC序列上构象表位的存在。拟穴青蟹TM与MLC抗原表位的定位分析有望为不同物种间存在的临床交叉反应研究奠定基础,同时有望为低致敏性免疫制剂的开发提供理论依据。

关键词：肌球蛋白轻链抗原表位拟穴青蟹食物过敏原肌球蛋白

来源： cnki会议评论

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海洋与湖沼 2019年第2期50卷 465-472页

作者：李永亮赵欢欢李荣华王春琳母昌考宋微微叶央芳宁波大学应用海洋生物学教育部重点实验室宁波315211 浙江海洋高效健康养殖协同创新中心宁波315211

本文对广西钦州(Gq)、福建霞浦(Fx)、浙江温州(Zw)、浙江三门(Zs)、浙江宁海(Zn)、浙江慈溪(Zc)等6个野生群体拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肌肉进行了氨基酸及脂肪酸分析。共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。氨基酸含量在80.94—19... 详细信息

本文对广西钦州(Gq)、福建霞浦(Fx)、浙江温州(Zw)、浙江三门(Zs)、浙江宁海(Zn)、浙江慈溪(Zc)等6个野生群体拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肌肉进行了氨基酸及脂肪酸分析。共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。氨基酸含量在80.94—191.39mg/g之间, Gq为最高;总脂肪酸含量在7.97—11.38mg/g之间,Zn为最高。主要氨基酸为甘氨酸和精氨酸;主要脂肪酸为C20:5n3(EPA),占总脂肪酸含量的平均值为(22.47±5.84)%。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸含量丰富,占总氨基酸比例(TDAA/TFAA)和总脂肪酸比例(PUFA/TFA)分别为(53.62±5.43)%和(59.27±5.29)%。Zs群体的必需氨基酸含量及C22:6n3(DHA)均为最高。主成分分析结果表明:各群体的氨基酸与脂肪酸组成与含量相似性与地理距离分布具有一定的相关性,特别是Gq群体,在氨基酸与脂肪酸的分类中与其他群体区分比较明显。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸的聚类分析结果均表明:Zw、Zc与Gq群体较为接近,具有较强的甜味; Fx、Zn与Zs群体较为接近,具有较强的香味及不饱和脂肪酸营养价值。

关键词：拟穴青蟹群体游离氨基酸脂肪酸

拟穴青蟹保幼激素酯酶结合蛋白(JHEBP)基因的克隆与表达分析

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中国水产科学 2019年第6期26卷 1086-1095页

作者：赵俊霞赵明张凤英蒋科技马春艳王伟马凌波中国水产科学研究院东海水产研究所农业农村部远洋与极地渔业创新重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

甲基法尼酯(MF)是甲壳类的保幼激素(JH), MF的代谢可能主要由保幼激素酯酶(JHE)催化完成,保幼激素酯酶结合蛋白(JHEBP)能紧密结合JHE,在JHE的代谢中具有重要作用,研究JHEBP对于MF降解通路的探究具有一定促进作用。本研究获得了拟穴青蟹J... 详细信息

甲基法尼酯(MF)是甲壳类的保幼激素(JH), MF的代谢可能主要由保幼激素酯酶(JHE)催化完成,保幼激素酯酶结合蛋白(JHEBP)能紧密结合JHE,在JHE的代谢中具有重要作用,研究JHEBP对于MF降解通路的探究具有一定促进作用。本研究获得了拟穴青蟹JHEBP基因的cDNA全序列,命名为Sp-JHEBP。Sp-JHEBP序列全长为1647 bp,包含一个891 bp的开放阅读框(ORF),可编码296个氨基酸,预测相对分子质量33.79 kD,等电点8.63。利用Target P预测Sp-JHEBP定位于线粒体, Mitoprot预测Sp-JHEBP的前31个氨基酸组成的肽段为线粒体定位信号肽。多重序列比对分析发现, Sp-JHEBP的氨基酸序列与多齿新米虾(Neocaridina denticulata)的一致度最高(67%),其次为黑脉金斑蝶(Danaus plexippus)(43%)。系统发育树分析JHEBP与物种分化并不一致,这表明JHEBP随着物种分化,功能上可能也出现了分化。Sp-JHEBP在所检测的9个组织中均有表达,在卵巢中的表达量远高于其它组织,其次是鳃、血淋巴、肝胰腺。在幼体发育过程中,Sp-JHEBP在受精卵时期最高,从Z1至Z5期逐渐升高,到Z5期达到最高,随后逐渐下降到C1期。体外处理MF和法尼酸(FA)显示Sp-JHEBP受高浓度MF上调,在0.1～5μmol/L之间随着FA浓度升高Sp-JHEBP表达量升高。综合分析我们认为Sp-JHEBP可能通过降解JHE来参与MF的代谢,该研究结果对青蟹MF降解分子网络的研究具有一定的推动作用。

关键词：拟穴青蟹甲基法尼酯保幼激素酯酶结合蛋白保幼激素酯酶基因表达

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拟穴青蟹人工繁育技术要点

科学养鱼 2022年第2期44卷 61-63页

作者：任志明刘磊吴清扬史策王春琳母昌考叶央芳宁波大学浙江宁波315211 水产生物技术教育部重点实验室浙江宁波315211

拟穴青蟹又称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹,属海产珍品之一。随着电子商务和物流行业的迅猛发展,青蟹借助其耐干露、易运输的特点,需求量迅速增加。目前,青蟹养殖所需的苗种多依赖自然海区的野生苗种,人工繁育的苗种数量较少,限制了青... 详细信息

拟穴青蟹又称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹,属海产珍品之一。随着电子商务和物流行业的迅猛发展,青蟹借助其耐干露、易运输的特点,需求量迅速增加。目前,青蟹养殖所需的苗种多依赖自然海区的野生苗种,人工繁育的苗种数量较少,限制了青蟹养殖业的发展。国内成功的拟穴青蟹育苗案例以室内水泥池工厂化育苗为主,有少量为室外土池生态育苗。我国虽未完全实现拟穴青蟹育苗的稳产高产,但育苗技术在全球范围内仍属领先水平。

关键词：物流行业海水养殖工厂化育苗电子商务拟穴青蟹自然海区人工繁育全球范围

拟穴青蟹受精膜形成过程中环形颗粒的发生与胞吐

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水产学报 2019年第4期43卷 867-874页

作者：陈锦民李少菁王桂忠叶海辉王艺磊集美大学水产学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室厦门大学海洋与地球学院

为了揭示拟穴青蟹受精膜形成机制,采用透射电子显微镜研究了其受精膜形成过程中环形颗粒的形成与胞吐。结果显示,拟穴青蟹精子入卵后,发生皮层反应而形成受精膜。皮层反应包括致密颗粒首先胞吐以及环形颗粒的相继多轮胞吐。每轮环形颗... 详细信息

为了揭示拟穴青蟹受精膜形成机制,采用透射电子显微镜研究了其受精膜形成过程中环形颗粒的形成与胞吐。结果显示,拟穴青蟹精子入卵后,发生皮层反应而形成受精膜。皮层反应包括致密颗粒首先胞吐以及环形颗粒的相继多轮胞吐。每轮环形颗粒的胞吐参与到受精膜的平缓期、增厚期和举起期3个阶段。环形颗粒的形成主要发生在受精膜的增厚期,受精卵的皮层和靠近皮层的内质中都在形成大量的环形颗粒,并且迅速移至皮层质膜附近发生爆发性胞吐,参与到受精膜的快速形成中。环形颗粒的形成与2种卵黄颗粒以及脂滴密切相关,在皮层中发现了线粒体参与其中,推测在拟穴青蟹受精卵的皮层和内质中可能存在环形颗粒合成的两套不同机制。研究表明,卵黄颗粒、脂滴及环形颗粒在拟穴青蟹受精膜形成过程中发挥重要作用。

关键词：拟穴青蟹受精膜环形颗粒胞吐

拟穴青蟹Cactus基因的cDNA克隆、序列及生物学功能

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水产学报 2020年第1期44卷 21-32页

作者：胡蕾邓恒为李晶晶刘姗姗何建国李海云翁少萍华南农业大学动物科学学院中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室

为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息,并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应,实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列,其cDNA全长为2 035 bp,开放阅读框(ORF)1 311 bp,编码436个氨基酸,... 详细信息

为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息,并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应,实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列,其cDNA全长为2 035 bp,开放阅读框(ORF)1 311 bp,编码436个氨基酸,分子量为46.01 ku。对蛋白理化性质进行预测发现,SpCactus为亲水性蛋白,等电点pI为4.91。经预测,SpCactus与其他物种的IκB蛋白具有相似的功能结构域。同源性比对结果显示,SpCactus与凡纳滨对虾和中国明对虾的Cactus蛋白同源性均高达62%,相似度为73%。系统进化树分析显示,SpCactus与甲壳动物聚为一支,与无脊椎动物聚为一大支。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现,SpCactus基因在拟穴青蟹不同组织中均有表达,肌肉中的表达量最高,其次为心脏、眼柄、血液和鳃,肝胰腺中的表达量最低。LPS和金黄色葡萄球菌刺激均能显著诱导SpCactus基因的表达。本实验成功扩增了SpCactus基因全长,并进行了生物信息学分析、理化性质预测,初步探讨了其生物学功能,为进一步研究其在免疫反应中的生物学功能提供参考依据。

关键词：拟穴青蟹 Cactus 基因克隆组织分布表达分析

单个拟穴青蟹核内多拷贝线粒体COI假基因序列的研究(简报)

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分子细胞生物学报 2008年第2期41卷 155-161页

作者：张凤英马凌波乔振国陈立侨中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业重点开放实验室上海200090 华东师范大学上海200062

线粒体DNA（mtDNA）因它的高拷贝数、易扩增、高突变率、中性、低重组和母系遗传等特征．已广泛应用在系统进化和群体遗传研究方面。但是．由于mtDNA本身的特征，如异质性，父系遗传泄漏和非中性以及核线粒体假基因（nuclear mitochondr... 详细信息

线粒体DNA（mtDNA）因它的高拷贝数、易扩增、高突变率、中性、低重组和母系遗传等特征．已广泛应用在系统进化和群体遗传研究方面。但是．由于mtDNA本身的特征，如异质性，父系遗传泄漏和非中性以及核线粒体假基因（nuclear mitochondrial pseudogenes，Numts）的存在，可能限制mtDNA的应用。Numts是位于核DNA中与mtDNA具有高度相似性的序列,是线粒体基因向核基因组转移造成的,从低等的真菌和无脊椎动物到高等的脊椎动物和植物都发现有Numts的存在。

关键词：拟穴青蟹核线粒体假基因 COI基因核整合事件

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拟穴青蟹PHGPx基因的克隆及其表达分析

水产学报 2015年第2期39卷 161-173页

作者：刘春云傅明骏张子平邹志华贾锡伟王艺磊集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室中国水产科学研究院南海水产研究所

为了探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase,PHGPx)在拟穴青蟹免疫防御反应和精巢发育中的作用,实验从拟穴青蟹转录组数据库中筛选出PHGPx基因的EST序列,利用SM ART-RACE技术克隆得到该基因... 详细信息

为了探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase,PHGPx)在拟穴青蟹免疫防御反应和精巢发育中的作用,实验从拟穴青蟹转录组数据库中筛选出PHGPx基因的EST序列,利用SM ART-RACE技术克隆得到该基因的全长cDNA,命名为SpPHGPx。通过相关生物信息学软件对该序列进行分析,运用实时荧光定量技术对Sp-PHGPx mRNA在成熟雌雄拟穴青蟹各组织、性腺不同发育时期以及H2O2和脂多糖(LPS)应激下鳃和肝胰腺组织中的表达情况进行分析。结果发现,Sp-PHGPx基因的cDNA全长为1 024 bp,编码180个氨基酸。同源性分析和系统进化树分析表明,Sp-PHGPx与其他物种的PHGPx(GPx4)亲缘关系较近。实时定量PCR结果显示,Sp-PHGPx在成熟拟穴青蟹雌雄各组织中均有不同程度的表达,其中精巢的表达量最高。在性腺不同发育阶段,Sp-PHGPx在卵巢发育过程中的表达量差异不显著;而在精巢发育过程中,其表达量在精子细胞期(T2期)显著高于精母细胞期(T1期)和成熟精子期(T3期),同时也显著高于卵巢发育各时期的表达量。在LPS应激下,鳃和肝胰腺中Sp-PHGPx的表达量分别在6和12 h显著上调;H2O2应激下,鳃中的表达量在3 h显著升高,肝胰腺中的表达量在被检测的各时相中无显著差异。研究表明,Sp-PHGPx可能在免疫防御反应以及精巢的发育和成熟等过程中发挥着重要作用。

关键词：拟穴青蟹磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx) 基因克隆表达性腺发育

拟穴青蟹3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆与表达

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水产学报 2013年第1期37卷 55-62页

作者：付春茹叶海辉陈学雷黄辉洋李少菁厦门大学海洋与地球学院

3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatede hydrogenase,GAPDH)是维持生命最基本活动的关键酶之一。采用RT-PCR、RACE等技术,获得了拟穴青蟹gapdh基因全长cDNA序列。该序列全长1 440 bp,开放阅读框(ORF)为1 008 bp,编码335个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其他一些物种具有很高相似性,推测gapdh基因具有很高的保守性。经荧光定量PCR检测,gapdh基因在拟穴青蟹多个组织中均有表达,且在胸神经团、眼柄神经节、卵巢、表皮中表达量较高。在拟穴青蟹卵巢发育过程中,gapdh基因在卵巢发育早期(Ⅱ期)表达量最高,在卵巢发育成熟期(Ⅴ期)表达量最低,由此推测GAPDH主要参与了卵巢的细胞分裂增殖过程。

关键词：拟穴青蟹 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因克隆荧光定量PCR 卵巢发育