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人SATB1基因5′上游序列的转录激活功能分析

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 221-226页

作者：李颖戴冰冰蔡蓉仇全于丽莉卢健上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室上海200025

在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 ... 详细信息

在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 -pGL3 SP2 94 6 luc ,pGL3 SP1718 luc和pGL3 SP75 1 luc ,分别瞬时转染JurkatT ,K5 6 2 ,U937和HeLa细胞 ,通过测定荧光素酶的表达活性 ,观察SATB1基因 5′上游序列片段 3个删除突变体在不同细胞内活性的差异 .结果显示 ,SATB1上游序列- 2 95 5 - 9在 4种细胞中的转录激活能力为U937>JurkatT >K5 6 2 ,在HeLa细胞中基本无激活 ,提示SATB1的转录激活可能具有一定的细胞类型特异性 .3种 5′删除突变体转录激活性由大至小顺序为 - 76 0 - 9>- 2 95 5 - 9>- 172 7 - 9,提示SATB1的核心启动子可能存在于其 5′上游序列的- 76 0至 - 9bp区域中 .

关键词： SATB1基因启动子报告基因分析转录调控

CCR5基因5′侧翼区的克隆及调控功能初步研究

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湖南医科大学学报 2002年第2期27卷 162-164页

作者：沙新平胡国龄谢玉桃陈曦刘映霞龚环宇侯珏李萍中南大学湘雅医院传染病研究所湖南省疾病控制中心国家HIV确认实验室长沙410008

目的 :研究CCR5基因 5′侧翼区的调控序列。方法 :分段构建CCR5基因 5′侧翼区的pCAT报告基因载体 ;分析各片段在Hela细胞中的CAT调节活性。结果 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4 86bp序列的pCAT重组质粒在Hela细胞中能明显表现CAT... 详细信息

目的 :研究CCR5基因 5′侧翼区的调控序列。方法 :分段构建CCR5基因 5′侧翼区的pCAT报告基因载体 ;分析各片段在Hela细胞中的CAT调节活性。结果 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4 86bp序列的pCAT重组质粒在Hela细胞中能明显表现CAT上调活性 ,其活性比pCATenhancervector的活性高 3倍。结论 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4

关键词： 5′侧翼区克隆调控功能初步研究 CCR5基因启动子增强子报告基因分析

α-突触核蛋白抑制酪氨酸羟化酶基因-495^+25区调节活性

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基础医学与临床 2008年第5期28卷 497-498页

作者：高楠李尧华于顺李昕陈彪首都医科大学宣武医院老年医学研究所教育部神经变性病重点实验室北京100053

α-突触核蛋白（α-Synuclein，α-SYN）的生理功能尚不清楚，近年研究表明，α-SYN与帕金森病（Parkinson’s disease，PD）的发生发展密切相关。最近的研究显示，在α-SYN过表达的细胞系，酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）... 详细信息

α-突触核蛋白（α-Synuclein，α-SYN）的生理功能尚不清楚，近年研究表明，α-SYN与帕金森病（Parkinson’s disease，PD）的发生发展密切相关。最近的研究显示，在α-SYN过表达的细胞系，酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）的表达显著减少，提示α-SYN的功能与多巴胺代谢密切相关。α-SYN在氧化应激的状态下发生明显的核内转位现象，提示α-SYN可能参与一些基因表达的调控。本研究选择TH基因启动子区片段，采用荧光素酶报告基因分析方法，初步探讨了α-SYN下调TH基因表达的机制。

关键词： α-突触核蛋白酪氨酸羟化酶调节活性蛋白抑制酶基因 Parkinson 基因启动子区报告基因分析

一例先天性心脏缺损相关ISL1基因新变异的发现及功能分析

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中华医学遗传学杂志 2020年第9期37卷 972-975页

作者：董斌斌刘兴元王天明杨奕清复旦大学附属华山医院北院儿科上海201907 同济大学附属同济医院儿科上海200065 复旦大学附属上海市第五人民医院心血管研究室上海200240

目的分析与先天性心脏缺损(congenital heart defect,CHD)相关的ISL1基因变异及其功能特点。方法收集194例CHD患者和232名正常对照的临床资料和外周血样,提取基因组DNA。测序分析全部对象的ISL1基因的编码外显子及侧翼的部分内含子。构... 详细信息

目的分析与先天性心脏缺损(congenital heart defect,CHD)相关的ISL1基因变异及其功能特点。方法收集194例CHD患者和232名正常对照的临床资料和外周血样,提取基因组DNA。测序分析全部对象的ISL1基因的编码外显子及侧翼的部分内含子。构建野生型ISL1基因表达质粒ISL1-pcDNA3.1,通过定位诱变获得相应的变异体。应用脂质体将基因表达质粒转染CHO细胞,应用双荧光素酶报告基因分析试剂研究变异型ISL1的功能特性。结果在1例散发性房间隔缺损患者中检测出1种新的杂合性ISL1基因变异c.499C>T(p.Q167X)。功能研究表明变异型ISL1对靶基因MEF2C启动子的转录激活功能丧失。结论发现了一个与CHD相关的ISL1基因新变异,ISL1基因的缺陷可能为部分CHD的分子病因。

关键词：先天性心脏缺损分子遗传学转录因子 ISL1基因报告基因分析

特发性扩张型心肌病相关GATA6基因新突变的识别

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特发性扩张型心肌病相关GATA6基因新突变的识别

作者：李文昭上海交通大学

学位级别：硕士

研究背景:扩张型心肌病以进行性左心室扩大及收缩功能减退为主要特征,是最常见的原发型心肌疾病,其在一般人群的发病率约为1/250。扩张型心肌病是心力衰竭以及心源性猝死的常见原因,也是进行心脏移植的首要指证。近来的研究发现遗传缺... 详细信息

研究背景:扩张型心肌病以进行性左心室扩大及收缩功能减退为主要特征,是最常见的原发型心肌疾病,其在一般人群的发病率约为1/250。扩张型心肌病是心力衰竭以及心源性猝死的常见原因,也是进行心脏移植的首要指证。近来的研究发现遗传缺陷是扩张型心肌病的重要病因。研究目的:该研究主要目的为识别特发性扩张型心肌病(idiopathic dilated cardiomyopathy,IDCM)相关GATA6基因新突变并揭示该突变的致病机制。研究方法:本研究入选132例IDCM患者和220名健康对照者,收集其临床资料和外周静脉血标本,使用DNA纯化试剂盒抽提基因组DNA,应用聚合酶链反应试剂扩增GATA6基因的整个编码区,应用循环测序试剂盒对扩增的GATA6基因片段进行测序,将所测序列与Nucleotide数据库中的GATA6基因序列进行对比分析以识别GATA6基因突变。检索美国的PubMed、SNP和我国的万方数据库以明确突变的新颖性。分别借助在线计算机软件MUSCLE和MutationTaste评估突变氨基酸进化上的保守性和突变的致病性。克隆野生型GATA6基因,构建其表达质粒GATA6-pcDNA3.1,通过定位诱变产生突变体,借助脂质体转染工具细胞,应用双荧光素酶报告基因分析试剂盒分析突变体对靶基因的转录激活功能。研究结果:在1例散发性DCM患者发现了1个新的GATA6基因杂合突变c.1165G>T,即p.E389X突变。该无义突变不存在于220名对照者,在美国的PubMed、SNP和我国的万方数据也无报道。多个物种的组成GATA6蛋白的氨基酸序列比对分析表明突变位点的氨基酸在物种进化上高度保守,致病性预测显示所识别的GATA6基因突变具有致病性。双荧光素酶报告基因分析显示E389X-突变型GATA6对靶基因ANF启动子的转录激活作用丧失。研究结论:本研究首次报道特发性DCM相关GATA6基因新突变,扩大了IDCM相关GATA6基因突变谱,并揭示了IDCM新的分子机制。

关键词：心肌病分子遗传学转录因子 GATA6 报告基因分析

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人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

中国生物化学与分子生物学报 1999年第6期15卷 871-875页

作者：彭白露周鸣曾朝阳李桂源湖南医科大学肿瘤研究所长沙410078

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ｋｂ片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行... 详细信息

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ｋｂ片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ｋｂ片段其启动子功能部位位于５′端２００ｂｐ范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ盒位于１５８～１６３ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义．

关键词： Cx26基因基因调控 CAT 报告基因分析乳腺发育

散发性扩张型心肌病相关ISL1基因突变分析

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国际心血管病杂志 2020年第3期47卷 162-167页

作者：乔祺杨晨曦顾佳宁邸若岷杨奕清徐迎佳复旦大学附属上海市第五人民医院心内科闵行区复杂心律失常中心心血管研究室上海200240

目的:分析散发性扩张型心肌病(DCM)相关ISL1基因突变谱。方法:收集226例散发性DCM患者和230名相匹配的健康人的血标本,抽提DNA。通过聚合酶链反应-测序分析ISL1基因的编码外显子及侧翼内含子。对所发现的ISL1基因突变,应用ClustalW2软... 详细信息

目的:分析散发性扩张型心肌病(DCM)相关ISL1基因突变谱。方法:收集226例散发性DCM患者和230名相匹配的健康人的血标本,抽提DNA。通过聚合酶链反应-测序分析ISL1基因的编码外显子及侧翼内含子。对所发现的ISL1基因突变,应用ClustalW2软件评估突变氨基酸在进化上的保守性,应用在线程序MutationTaster、PolyPhen-2和PROVEAN预测突变的致病性,应用双荧光素酶报告基因分析系统评估突变的功能效应。结果:在1例散发性DCM患者的ISL1基因中检测出1个新的杂合错义突变(c.706G>T即***236Tyr),该突变不存在于对照组。跨物种ISL1蛋白序列比对分析表明该被改变的氨基酸在进化上完全保守,致病性预测显示该基因突变具有致病性,生化分析表明突变体对靶基因的转录激活功能显著降低。结论:发现1个ISL1基因功能缺失性新突变,可能导致DCM,对DCM的早期个体化防治具有潜在的临床意义。

关键词：扩张型心肌病遗传学转录调节 ISL1 基因突变报告基因分析

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康柏西普质量标准优化和提高

药物分析杂志 2019年第1期39卷 1-12页

作者：张峰于传飞王文波武刚贺庆刘爱兵宋晓婕柯潇王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 成都康弘药业集团股份有限公司成都610000

目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西... 详细信息

目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西普生物学活性的荧光素酶报告基因分析(reporter gene assay,RGA)方法、唾液酸含量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定方法和糖谱的离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEX-HPLC)测定方法,并对非还原十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)纯度测定方法的凝胶浓度和上样量进行优化,按照2015年版《中华人民共和国药典》通则0903,采用光阻法测定不溶性微粒。结果:生物学活性测定中,RGA法在准确度、精密度和中间精密度等方面均优于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖抑制法,且能够更好地反映康柏西普生物学活性的变化;非还原SDS-PAGE纯度检测中,4%～15%梯度胶较10%固定浓度凝胶对主带和杂带的分离度高,3μg上样量时,能够更准确地测定康柏西普纯度;间苯二酚法测定唾液酸含量中,N-糖的非唾液酸单糖亦可与间苯二酚反应,产物在580 nm处有光吸收,从而影响检测结果,本研究建立的RP-HPLC法通过4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐酸盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)标记排除该影响,检测结果更准确;建立的IEX-HPLC糖谱测定方法可以有效控制影响康柏西普关键质量属性的N-糖基化类型;康柏西普成品的不溶性微粒检测结果能够满足USP要求。结论:所建立/优化的质控方法和提高的质量标准可在更高水平上对康柏西普质量进行控制。

关键词：康柏西普唾液酸糖谱不溶性微粒报告基因分析十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨电泳

先天性房间隔缺损相关TBX5基因新突变研究

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国际心血管病杂志 2020年第5期47卷 305-309页

作者：王珊珊王天明刘兴元同济大学医学院附属第一妇婴保健院新生儿科上海201204 同济大学医学院附属同济医院儿科上海200065

目的:研究先天性房间隔缺损(ASD)相关TBX5基因新突变。方法:从中国汉族人群入选62例ASD患者和108名健康对照者,提取基因组DNA。对全部研究对象的TBX5基因的整个编码区进行测序分析以发现新的致病突变。构建野生型及突变型TBX5的真核表... 详细信息

目的:研究先天性房间隔缺损(ASD)相关TBX5基因新突变。方法:从中国汉族人群入选62例ASD患者和108名健康对照者,提取基因组DNA。对全部研究对象的TBX5基因的整个编码区进行测序分析以发现新的致病突变。构建野生型及突变型TBX5的真核表达载体,利用脂质体转染COS-7细胞,同时转染报告质粒心房利钠因子-荧光素酶及内对照质粒,应用双荧光素酶报告基因分析试剂研究突变型TBX5的转录活性。结果:在1例散发型ASD患者中发现了1个杂合性TBX5基因新突变,即c.318C>G(p.Y106X)突变。该无义突变不存在于108名健康对照者。功能分析表明突变型TBX5对靶基因的转录激活功能丧失。结论:发现1个ASD相关TBX5基因功能缺失性新突变,对ASD的个体化防治具有潜在的临床意义。

关键词：房间隔缺损遗传学转录因子 TBX5 报告基因分析