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作者：刘殿玮山东大学

学位级别：硕士

第一部分：实验性蛛网膜下腔出血后海马在不同时间点凋亡相关因子(Caspase3、Bax、Bcl-2)的基因表达目的：探讨蛛网膜下腔出血后海马在不同时间点凋亡相关因子(Caspase3、Bax、Bcl-2)的基因表达变化,找出变化明显的时间点,予以药物干... 详细信息

第一部分：实验性蛛网膜下腔出血后海马在不同时间点凋亡相关因子(Caspase3、Bax、Bcl-2)的基因表达目的：探讨蛛网膜下腔出血后海马在不同时间点凋亡相关因子(Caspase3、Bax、Bcl-2)的基因表达变化,找出变化明显的时间点,予以药物干预。材料和方法： 1.实验材料成年雄性Wistar大鼠48只,年龄2个月,体重250-300g,由山东大学实验动物中心提供,实验动物单笼喂养,标准饲料喂养1周后再行枕大池二次注血。 2.实验方法实验用大鼠随机分成6组,每组各8只动物。选择体重250-300g健康成年雄性Wistar大鼠,采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立SAH鼠模型。将大鼠称重后用10%水合氯醛溶液400mg／kg腹腔注射麻醉后,仰卧位固定于鼠板上,沿右侧腹股沟切开皮肤皮下,钝性游离股动脉,抽取新鲜的动脉血0.5mL备用,结扎止血,逐层缝合。然后将大鼠俯卧位固定于脑立体定位仪,术区皮肤消毒,沿颈背部中线切开皮肤皮下,钝性分离肌层至显露寰枕膜,穿刺寰枕膜并抽出0.1mL脑脊液,5min内将自体动脉血0.3mL缓慢注入枕大池。头低位30°维持30min,使血液均匀地分布于基底池,首次注血48 h后同样方法第二次枕大池注血,制作大鼠SAH模型。用Real-Time PCR技术检测凋亡分子caspase-3和bax以及抗凋亡分子bcl-2在不同时间点的变化情况。结果： 1.大鼠SAH后有神经功能障碍,运动较前迟缓,触须反应减弱,进食量下降。 2.二次注血后,凋亡分子caspase-3表达量实验组较空白对照组均有所上升,以1d、2d、3d上升明显,与空白对照组相比有统计学差异(p抗凋亡分子bcl-2的表达量实验组与空白对照组相比差异无统计学意义。结论： 1.本实验通过枕大池二次注血法制作的大鼠SAH模型,行为学及饮食状况较空白对照组有明显的变化,凋亡分子的表达也有统计学差异并且组内数值的差异较小,实验结果提示此模型是一种稳定理想的SAH模型。 2.凋亡分子caspase-3、bax在二次注血后2d与空白对照组相比有统计学差异。第二部分：抗tnf-α单克隆抗体对实验性蛛网膜下腔出血大鼠不同脑区细胞Caspase3、Bax、Bcl-2的影响目的：研究tnf-α特异性抑制剂抗tnf-α单克隆抗体对SAH后不同脑区神经细胞Caspase3、Bax、Bcl-2影响,以探讨蛛网膜下腔出血后细胞凋亡部分信号转导通路机制。材料和方法： 1.实验材料成年雄性Wistar大鼠48只,由山东大学实验动物中心提供,实验动物单笼喂养,标准饲料喂养1周后再行枕大池注血,体重250-300g。 2.实验方法动物随机分成3组：①空白对照组：不做任何处理;②PBS组：SAH+PBS溶剂;③tnf组：SAH+anti-tnf-α,每组16只,如有死亡,及时予以补充。SAH前30min侧脑室注射抗tnf-α单克隆抗体：大鼠称重后,用10%水合氯醛溶液4ml／kg腹腔注射麻醉后,额顶部去毛,置于立体定位仪上,固定头部,头皮酒精消毒,矢状切开头皮,暴露顶骨,顶骨平行于水平面,用牙科磨钻在前囟点后0.8mm,中线旁1.5mm处钻一直径0.77mm骨窗。在同一骨窗里,用与10ul微量注射器穿刺右侧脑室,坐标：AP,-0.8mm;lateral,-1.5mm;vertical,-4.0mm,注射速度为0.5ul／min,留针10min, PBS组注射anti-tnf-α的溶剂PBS 10ul,tnf组注射tnf-α抗体anti-tnf-αlOul,拔针后,骨蜡封闭骨孔。SAH模型的具体制备方法详见第一部分。用Real-Time PCR技术检测凋亡分子caspase-3和bax以及抗凋亡分子bcl-2在SAH后2d各组基因表达的变化情况,用原位杂交技术验证caspase-3 mRNA表达的变化;用Western blot技术检测caspase-3、bax、bcl-2在SAH后2d各组蛋白表达的变化情况。 3.统计学处理所有实验数据采用均数±SEM,组间比较采方差分析,ptnf组较空白对照组均有明显增加,PBS组与其它两组相比有统计学差异(ptnf组较空白对照组均有增加且PBS组与空白对照组相比有统计学差异(p<0.05),caspase-3、bcl-2的基因及蛋白的表达三组无明

关键词：蛛网膜下腔出血细胞凋亡抗tnf-α单克隆抗体凋亡相关因子

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两步串联层析法纯化抗tnf-α单克隆抗体

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生物技术通报 2015年第12期31卷 75-80页

作者：杨辉杨彬马旭通孙文正林小鹊谭世杰广东东阳光药业有限公司东莞523000

旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗tnf-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗tnf-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后,用protein A填料捕获,阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用Do E的方法,采用CC... 详细信息

旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗tnf-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗tnf-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后,用protein A填料捕获,阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用Do E的方法,采用CCF(Central composite face)设计,探讨了洗脱p H值及盐浓度对纯化的影响。纯化后的抗tnf-α单克隆抗体经HPLC以及毛细管电泳,检测其浓度、纯度以及多聚体含量。结果显示,亲和层析的最佳洗脱条件为p H4.0。通过DOE优化,为达到质量目标(回收率90%以上,纯度97%以上,多聚体0.3%),筛选出最佳洗脱范围为0.05-0.13 mol/L Na Cl以及p H5.7-6.0,选定p H6.0与0.10mol/L Na Cl作为Source洗脱条件,此时回收率94.3%,纯度97.3%,多聚体0.3%,其质量与参比制剂接近。

关键词：两步抗体纯化平台抗tnf-α单克隆抗体亲和层析阳离子交换层析

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英夫利昔单克隆抗体联合糖皮质激素初治急性移植物抗宿主病

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中华移植杂志（电子版） 2010年第1期4卷 54-58页

作者：刘丽珍来晓瑜

移植物抗宿主病（graft—versus—hostdisease，GVHD）是异基因造血干细胞移植后严重的并发症，其中急性GVHD的发生率为20％-50％。糖皮质激素为急性GVHD的标准一线初治用药，但是约50％Ⅱ度以上的急性GVHD患者激素治疗无效。激素耐药... 详细信息

移植物抗宿主病（graft—versus—hostdisease，GVHD）是异基因造血干细胞移植后严重的并发症，其中急性GVHD的发生率为20％-50％。糖皮质激素为急性GVHD的标准一线初治用药，但是约50％Ⅱ度以上的急性GVHD患者激素治疗无效。激素耐药型急性GVHD患者预后差，死亡率高达70％。研究表明tnf-α在GVHD发生的病理过程中起重要作用。英夫利昔单克隆抗体（infliximab）为抗tnf-α单克隆抗体，对游离型和跨模型tnf-α均具有高亲和力。

关键词：抗tnf-α单克隆抗体急性移植物抗宿主病糖皮质激素初治急性GVHD 异基因造血干细胞激素耐药型激素治疗

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tnfα单克隆抗体对（狗）体外循环术后心肌细胞凋亡的影响

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中华国际医学杂志 2002年第1期2卷 65-69页

作者：张顺业哈斯朝鲁等华中科技大学同济医学院协和医院心脏外科，中国武汉430022 山西医科大学第一临床医院中心实验室

目的观察抗tnf－α单克隆体（MaTA)对（狗）常规CPB术后心肌细胞凋亡及其对caspase-3酶活性的影响。方法 10条用于模拟常规CPB手术的成年家犬随机分为对照组和MaTA处理组，每组各5条。MaTA处理组动物CPB前和开放升主动脉后分别经静... 详细信息

目的观察抗tnf－α单克隆体（MaTA)对（狗）常规CPB术后心肌细胞凋亡及其对caspase-3酶活性的影响。方法 10条用于模拟常规CPB手术的成年家犬随机分为对照组和MaTA处理组，每组各5条。MaTA处理组动物CPB前和开放升主动脉后分别经静脉注射MaTA(0.5μg/100ml）对照组动物不用MaTA处理。留取CPB前、中及CPB后3h的全层左心室标本，液氮保存，用原位TUNEL技术检测心肌细胞凋亡并记录每10^5个心肌细胞中凋亡阳性细胞数目。用Z－DEVD－AMC底物降解方法测定caspase-3酶活性。结果 CPB前手CPB中两组的心肌细胞凋亡数及caspase-3酶活性在组内和组间均无显著性差异（P＞0．05）。CPB术后3h两组的心肌细胞凋亡数均较CPB前和CPB中明显增高（P分别＜0．05），而处理组CPB术后心肌细胞凋亡数明显低于对照组（P＜0．05）；CPB术后3h两组的caspase-3酶活性也均较术前和术中显著性增高（P＜0．01，0．01，0．05和0．05），与对照组比较，MaTA处理组caspase-3活性也明显受到抑制（P＜0．02）。结论抗tnfα单克隆抗体可以明显地降低CPB术后心肌细胞凋亡。这一抑制作用伴随有对caspase-3酶活性的抑制。

关键词：抗tnf-α单克隆抗体心肌细胞凋亡体外循环 Caspase-3酶活性

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肛周手术和抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体序贯治疗成人克罗恩病肛瘘的疗效和安全性的Meta分析

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中华炎性肠病杂志（中英文） 2018年第4期2卷 284-291页

作者：徐萍萍邱云崔秀秀贾玉良何池义韩真皖南医学院附属弋矶山医院中山大学附属第一医院

目的比较抗肿瘤坏死因子(tnf)-α单克隆抗体、肛周手术及肛周手术后抗tnf-α单克隆抗体序贯方式治疗成人克罗恩病(CD)肛瘘的疗效及安全性.方法检索PubMed、EMBASE和Cochrane等数据库,查找相关的临床研究(试验性研究及观察性研究).研... 详细信息

目的比较抗肿瘤坏死因子(tnf)-α单克隆抗体、肛周手术及肛周手术后抗tnf-α单克隆抗体序贯方式治疗成人克罗恩病(CD)肛瘘的疗效及安全性.方法检索PubMed、EMBASE和Cochrane等数据库,查找相关的临床研究(试验性研究及观察性研究).研究的首要观察目标为肛瘘的应答率,次要观察目标为肛瘘复发率.结果 8个对照研究被纳入,包括3项前瞻性研究和5项回顾性研究,共纳入研究对象688例.Meta分析结果显示,序贯治疗组相比于单纯肛周手术组未显著提高肛瘘愈合率(78.5％比65.2％,OR=2.21,95％ CI:0.83～5.90,P=0.11);分层分析发现两组在肛瘘完全愈合率及部分愈合率之间差异无统计学意义,但序贯治疗组的肛瘘复发率较单纯肛周手术组低(20.8％比76.1％,OR=0.10,95％ CI:0.03 ～ 0.37,P=0.0006).序贯治疗组与单纯抗tnf-α单克隆抗体组的肛瘘愈合率及不良反应发生率差异无统计学意义,但前者预防瘘管复发的风险较低(30.0％比69.2％,OR=0.24,95％ CI:0.06～0.93,P=0.04,n=57).序贯治疗常见的不良反应有头疼、轻微胸痛、轻微输液反应、过敏反应、肌肉乏力、腹痛及败血症,主要为抗tnf-α单克隆抗体相关的不良反应.结论肛周手术和抗tnf-α单克隆抗体的序贯治疗并未显著提高肛瘘愈合率,但相比于单一治疗方法可降低肛瘘复发率,同时并不增加不良反应发生率.

关键词：抗tnf-α单克隆抗体肛周手术序贯治疗克罗恩病肛瘘 Meta分析

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抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的实验研究

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广东医学 2006年第2期27卷 169-171页

作者：韩述岭于立新南方医科大学南方医院器官移植中心广州510515

目的研究抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体(Anti-tnf-αmAb)对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及机制。方法SD大鼠80只,体重(250±20)g,随机分为受体组与供体组。两两随机配对后再随机分为实验组和对照组,建立原位肝移植模型。实验组供肝经... 详细信息

目的研究抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体(Anti-tnf-αmAb)对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及机制。方法SD大鼠80只,体重(250±20)g,随机分为受体组与供体组。两两随机配对后再随机分为实验组和对照组,建立原位肝移植模型。实验组供肝经门静脉冷灌注20ml4℃的生理盐水+抗tnf-α单克隆抗体(0.1mg/kg);对照组供肝经门静脉冷灌注20ml4℃的生理盐水。采用全自动生化分析仪,酶联免疫吸附实验(ELISA)法,HE染色,TUNEL法分别测定血肝功能酶(ALT,AST),血浆tnf-α,肝组织病理改变及肝细胞凋亡情况。结果实验组应用抗tnf-α单克隆抗体后血ALT,tnf-α水平显著低于对照组(P抗tnf-α单克隆抗体能有效减轻大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤,缓解肝功能下降。

关键词：肝移植缺血再灌注损伤抗tnf-α单克隆抗体

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抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体治疗炎症性肠病的专家共识（2017）

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中华消化杂志 2017年第9期37卷 577-580页

IBD是一组病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括UC和CD。治疗IBD的抗tnf-α单克隆抗体包括人鼠嵌合体IgG1单克隆抗体英夫利西单克隆抗体（infliximab，IFX）、全人源化单克隆抗体阿达木单克隆抗体（adalimumab，ADA）和聚... 详细信息

IBD是一组病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括UC和CD。治疗IBD的抗tnf-α单克隆抗体包括人鼠嵌合体IgG1单克隆抗体英夫利西单克隆抗体（infliximab，IFX）、全人源化单克隆抗体阿达木单克隆抗体（adalimumab，ADA）和聚乙二醇人源化单克隆抗体的抗原结合片段（fragmentofantigenbinding，Fab）赛妥珠单克隆抗体（certolizumabpegol，CZP）。

关键词：单克隆抗体治疗抗肿瘤坏死因子-α 炎症性肠病全人源化单克隆抗体抗tnf-α单克隆抗体专家肠道炎性疾病慢性非特异性

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471例克罗恩病患者治疗方案分析

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中国现代医学杂志 2019年第17期29卷 63-70页

作者：邬思远杨川华孙伟力孙筱张尧戈之铮上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海200001 麦吉尔大学实验医学部魁北克蒙特利尔H3A0G4

目的回顾分析患者临床表现和治疗方案,为根据病情选择合理治疗方案提供依据。方法根据诊断年份分为2005 ~ 2009 年和2010 ~ 2014 年两组。结果两组临床表现无差异(P >0.05),2010 ~ 2014 年的手术率低于2005 ~ 2009 年(P <0.05),合并肛... 详细信息

目的回顾分析患者临床表现和治疗方案,为根据病情选择合理治疗方案提供依据。方法根据诊断年份分为2005 ~ 2009 年和2010 ~ 2014 年两组。结果两组临床表现无差异(P >0.05),2010 ~ 2014 年的手术率低于2005 ~ 2009 年(P 抗tnf-α单克隆抗体(英夫利昔)的使用率2010 ~ 2014 年也高于2005 ~ 2009 年(P <0.05),≤ 16 岁、非狭窄非穿透行为和肛周疾病者使用率高。结论诊断时无并发症的患者多采用经典的“升阶梯”方案,而应用英夫利昔的“降阶梯”方案选择的是≤ 16 岁合并肛周疾病的非狭窄非穿透患者;已发生并发症的患者手术率降低,更多狭窄患者使用免疫抑制剂控制疾病活动性;如果条件不允许,则换用加速的“升阶梯”方案,等待时机。总之,针对不同病情采用不同治疗方案最大可能惠及患者。

关键词：克罗恩病/胃肠道硫唑嘌呤抗tnf-α单克隆抗体

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强直性脊柱炎及脊柱关节病

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中华风湿病学杂志 2004年第3期8卷 187-189页

作者：黄烽解放军总医院风湿科北京100853

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, AS）是炎症性关节炎并以异位骨形成导致骨硬化为特征。典型的新骨形成通常是沿着肌腱炎症部位形成肌腱骨化。肌腱附着点通常被认为是提供新骨形成所需的基质以及前体细胞奥秒小的生长平台。

关键词：强直性脊柱炎脊柱关节病沙立度胺抗tnf-α单克隆抗体治疗

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中医药治疗强直性脊柱炎临床研究新进展

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中医正骨 2004年第10期16卷 52-54页

作者：刘宏潇冯兴华中国中医研究院广安门医院

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis AS)是一种主要侵犯中轴关节,以骶髂关节炎和脊柱强直为主要特点的风湿性疾病,为自身免疫病,属祖国医学'骨痹'、'大偻'范畴 .因本病免疫与遗传发病机制至今不明,西医缺乏特异的治疗方法,仍以非甾体... 详细信息

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis AS)是一种主要侵犯中轴关节,以骶髂关节炎和脊柱强直为主要特点的风湿性疾病,为自身免疫病,属祖国医学'骨痹'、'大偻'范畴 .因本病免疫与遗传发病机制至今不明,西医缺乏特异的治疗方法,仍以非甾体类抗炎药和缓解病情药物为主,虽有抗tnf-α单克隆抗体、可溶性tnf-α受体、帕米膦酸盐、反应停等新疗法的报道,但并未使AS的治疗出现根本性改观.

关键词：强直性脊柱炎治疗临床研究骶髂关节炎新疗法 α受体抗tnf-α单克隆抗体优势主要特点范畴

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