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人AFP启动子操控的跨膜型抗cd3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达

山东医药 2019年第29期59卷 1-4,I0001页

作者：祁麟熊梦裳林芳珍卢杨熊冬生张砚君范冬梅张晴中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所天津300020 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所

目的设计肝癌特异性人甲胎蛋白启动子(hAFPp)操控的跨膜型抗cd3单链抗体(anticd3scfv),使其仅在AFP阳性(AFP+)肝癌细胞中特异性表达。方法利用分子克隆技术构建pAd-hAFPp-cd3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-anticd3scfv穿梭质粒载体,经测序... 详细信息

目的设计肝癌特异性人甲胎蛋白启动子(hAFPp)操控的跨膜型抗cd3单链抗体(anticd3scfv),使其仅在AFP阳性(AFP+)肝癌细胞中特异性表达。方法利用分子克隆技术构建pAd-hAFPp-cd3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-anticd3scfv穿梭质粒载体,经测序验证其基因序列的正确性。取AFP+人肝癌细胞HepG2、Huh-7及AFP阴性(AFP-)正常人肝细胞HL-7702、人乳腺癌细胞MCF-7,利用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定hAFPp的肝癌细胞转录特异性;通过Western blotting、免疫荧光、流式分析检测anticd3scfv蛋白在细胞的表达、定位及表达效率。结果构建的pAd-hAFPp-cd3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-anticd3scfv穿梭质粒载体,经测序后基因序列正确。hAFPp在AFP+的HepG2、Huh-7细胞中转录活性分别为160.86%±26.24%、80.08%±12.64%,而在AFP-细胞中转录活性均cd3scfv感染的细胞中,仅HepG2、Huh-7细胞中检测到anticd3scfv蛋白表达(36.7 kD),且表达于细胞膜表面,细胞中GFP+anticd3scfv+细胞群比例>90%,而HL-7702、MCF-7均无条带出现。结论携带anticd3scfv蛋白基因的腺病毒感染周围细胞后,hAFPp调控anticd3scfv在肝癌细胞的细胞膜特异性表达,进而可能实现anticd3scfv分子直接介导免疫杀伤的抗肿瘤效果。

关键词：肝癌肿瘤免疫治疗抗cd3单链抗体人甲胎蛋白启动子

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抗cd_3单链抗体基因克隆与表达

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中国生物制品学杂志 1999年第3期12卷 136-138页

作者：朱进张云郭恒彬李先富潘秀珍唐家琪高春芳李冬辉南京军区军事医学研究所南京210002 解放军150医院洛阳471000

采用重叠延伸拼接法 (SOE)连接抗cd3 抗体的重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VK)基因 ,构建单链抗体基因 (ScFv)并将其克隆于含Tac启动子质粒中 ,用斑点杂交法筛选出重组子 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 )

关键词：抗cd3单链抗体基因表达斑点杂交重组子

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抗人卵巢癌COC183B2/抗cd3单链双特异抗体的构建和表达

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北京大学学报（医学版） 2002年第4期34卷 358-361页

作者：赖娟李小平冯捷程洪艳姚煜叶雪北京大学人民医院妇科肿瘤中心北京100044

目的 :构建和表达一种可与卵巢癌细胞和淋巴细胞结合的双特异抗体。方法 :利用PCR分别扩增抗人cd3单链抗体 (singlechainvariablefragment,ScFv)重链可变区 (variableregionoftheheavychain ,VH)和轻链可变区 (variableregionofthelightchain ,VL) ,重组抗人cd3ScFv ,经测序后将其克隆入有链间连接肽基因序列的载体pALM中 ,再将抗人卵巢癌COC183B2ScFv克隆至紧邻链间连接肽前形成COC183B2 /抗cd3单链双特异抗体(single-chainbispecificantibody ,scBsAb)的重组。最后将COC183B2 /抗cd3scBsAb克隆入表达载体 pTMFC中进行表达 ,同时分别表达抗人卵巢癌单抗COC183B2和抗人cd3单抗的ScFv作为对照组。用ELISA、流式细胞学方法和玫瑰花环实验对scBsAb进行免疫学活性测定。结果 :成功构建抗人卵巢癌COC183B2 /抗cd3scBsAb ;其表达的蛋白链相对分子质量约 6 0 ;ELISA结果显示scBsAb可与抗原OC183B2结合 ,流式细胞学结果显示scBsAb可与抗原cd3结合 ,花环实验显示scBsAb在体外可引导效应细胞聚集在靶细胞周围。结论 :构建和表达抗人卵巢癌COC183B2 /抗cd3scBsAb成功 ,且具有与抗原OC183B2。

关键词：卵巢癌 COC183B2 双特异抗体淋巴细胞抗cd3单链抗体 PCR

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Anti-cd3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

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西安交通大学学报（医学版） 2003年第6期24卷 542-544,548页

作者：杨章民孔令洪来宝长王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所

目的　构建anti cd3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti cd3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础... 详细信息

目的　构建anti cd3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti cd3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcdNA/anti cd3scFv B7.1,并经脂质体法转染COS 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗cd3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在COS 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗cd3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗cd3scFv B7.

关键词： Anti-cd3 scFv-B7.1 COS-7细胞抗cd3单链抗体基因表达肿瘤生物治疗真核表达载体

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