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作者：侯林义山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨抗cd14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞(AM)内NF-κB(p65)的影响。方法:选用15只雄性SD大鼠(150±20)g随机分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗cd14单克隆抗体治疗组(Anti-cd14组),每组5只,选用... 详细信息

目的:探讨抗cd14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞(AM)内NF-κB(p65)的影响。方法:选用15只雄性SD大鼠(150±20)g随机分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗cd14单克隆抗体治疗组(Anti-cd14组),每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型。造模成功后6h,应用ELISA检测血浆MIP-2、IL-10浓度,左肺采用Western blot检测肺内NF-κB(p65)蛋白的入核表达情况,取右肺下叶行HE染色、切片后在光镜下观察肺脏病理形态变化。以Sham组作为对照组。统计方法采用SPSS13.0。结果:ELISA结果显示:CLP组的血浆MIP-2浓度显著高于Sham组和Anti-cd14组,Anti-cd14组的血浆MIP-2浓度低于CLP组,认为有统计学差异(Pcd14组的血浆IL-10浓度两两组间比较,认为无统计学差异(P>0.05);Western blot检测显示:CLP组和Anti-cd14组的NF-κB(p65)表达量高于Sham组(Pcd14组的NF-κB(p65)表达量低于CLP组(Pcd14组肺内均出现炎症细胞浸润、肺间质增厚、出血,Anti-cd14组肺组织炎性表现较CLP组显著减轻。结论:抗cd14单克隆抗体能同LPS竞争性的结合肺泡巨噬细胞膜表面受体cd14分子,阻止肺内NF-κB(p65)的核内移位,减少致炎因子生成和释放,抑制炎症细胞浸润,起到肺保护作用。

关键词：急性肺损伤肺泡巨噬细胞抗cd14单克隆抗体 NF-κB(p65)

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抗cd14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织KC和ICAM-1表达的影响

抗CD14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织KC和ICAM-1表达的影响

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作者：姜琴山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨抗cd14单克隆抗体（Anti-cd14 monoclonal antibody,Anti-cd14McAb）治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。方法:在体部分:18只雄性Wistar大鼠（200g-250g）随机均分为3组,脓毒症组（CLP组）、假手术组（Sham组）、抗cd14治疗... 详细信息

目的:探讨抗cd14单克隆抗体（Anti-cd14 monoclonal antibody,Anti-cd14McAb）治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。方法:在体部分:18只雄性Wistar大鼠（200g-250g）随机均分为3组,脓毒症组（CLP组）、假手术组（Sham组）、抗cd14治疗组（Anti-cd14组）。CLP组和Anti-cd14组,采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型,Sham组作为对照组,开腹后只翻动盲肠,不进行结扎穿孔。Anti-cd14组术后经股静脉注射Anti-cd14McAb 0.2ml（1ug/ml）,Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2ml,6小时后经腹主动脉抽血,测定3组大鼠血浆中KC、sICAM-1表达水平,右肺下叶HE染色,观察肺组织病理结构的改变。离体部分:将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板,分为3组,对照组（Ⅰ组）、脓毒症模型组（Ⅱ组）和Anti-cd14干预组（Ⅲ组）。Ⅰ组加入正常血浆,Ⅱ组加入脓毒症血浆,Ⅲ组加入脓毒症血浆和抗cd14单克隆抗体共同干预,37℃、5%CO2培养箱孵育1小时,刮取NR8383,采用Western blot测定NR8383内NF-κB（p65）蛋白的表达水平;另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上,分组及干预措施同上,采用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）检测NR8383内NF-κB（p65）蛋白入核情况。结果:在体实验提示:与Sham组[KC（pg/ml）:72.645±19.860,sICAM-1（pg/ml）:252.766±19.921]相比,CLP组血浆KC、sICAM-1水平[KC（pg/ml）:490.316±43.403,sICAM-1（pg/ml）:686.952±36.411]和Anti-cd14组血浆KC、sICAM-1水平[KC（pg/ml）:348.150±20.924,sICAM-1（pg/ml）:411.050±47.170]明显升高,而Anti-cd14组KC、sICAM-1水平明显低于CLP组,认为有统计学差异（P＜0.05）;肺组织病理结果提示CLP组肺间质明显增厚、肺间质及肺泡腔内有大量炎症细胞浸润,Anti-cd14组症状较CLP组明显减轻,但较Sham组有所增加;细胞实验Western blot检测显示:Ⅱ组（2.1903±0.1199）和Ⅲ组（1.3658±0.1018）NR8383的NF-κB（p65）入核量高于Ⅰ组（1.0122±0.0780）,Ⅲ组的NF-κB（p65）入核量低于Ⅱ组,差别有统计学意义（P＜0.05）。细胞实验CLSM检测结果提示:与Ⅰ组（0.131±0.009）相比,Ⅱ组（0.685±0.037）和Ⅲ组（0.210±0.008）NR8383NF-κB p65蛋白入核明显升高,而Ⅲ组NR8383NF-κB p65蛋白入核低于Ⅱ组（0.685±0.037）,差别有统计学意义（P＜0.05）。结论:Anti-cd14McAb在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB（p65）蛋白入核,使其趋化因子KC表达减少,进而减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用;同时Anti-cd14McAb能抑制内皮细胞表达sICAM-1,减少中性粒细胞对内皮细胞的粘附作用,起到肺保护作用。

关键词：急性肺损伤脓毒症 NR8383 NF-KB(p65) 抗cd14单克隆抗体

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抗cd14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织趋化因子和可溶性细胞间黏附因子-1表达的影响

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中华临床医师杂志（电子版） 2016年第21期10卷 3203-3209页

作者：姜琴付玉梅侯林义吕洁萍张文凯山西医科大学第二医院重症医学科太原030001 山西医科大学第一医院麻醉科太原030001

目的探讨抗cd14单克隆抗体(Anti-cd14Mc Ab)治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。方法在体部分:18只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机均分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗cd14治疗组(Anti-cd14组),CLP组和Anti-cd14组采用... 详细信息

目的探讨抗cd14单克隆抗体(Anti-cd14Mc Ab)治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。方法在体部分:18只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机均分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗cd14治疗组(Anti-cd14组),CLP组和Anti-cd14组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型,Sham组作为对照组,开腹后只翻动盲肠,不进行结扎穿孔。Anti-cd14组术后经股静脉注射Anti-cd14Mc Ab 0.2 ml(1μg/ml),Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2 ml,6 h后经腹主动脉抽血,测定3组大鼠血浆中趋化因子(KC)和可溶性细胞间黏附因子-1(s ICAM-1)表达水平,右肺下叶HE染色,观察肺组织病理结构的改变。离体部分:将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板,分为3组,对照组(Ⅰ组)、脓毒症模型组(Ⅱ组)和Anti-cd14干预组(Ⅲ组)。Ⅰ组加入正常血浆,Ⅱ组加入脓毒症血浆,Ⅲ组加入脓毒症血浆和Anti-cd14Mc Ab共同干预,37℃、5%CO2培养箱孵育1 h,刮取NR8383,采用Western blot测定NR8383内NF-κB(p65)蛋白的表达水平;另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上,分组及干预措施同上,采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测NR8383内NF-κB(p65)蛋白入核情况。结果在体实验提示:(1)与Sham组[KC:(72.645±19.860)pg/ml;s ICAM-1:(252.766±19.921)pg/ml]相比,CLP组血浆KC、s ICAM-1水平[KC:(490.316±43.403)pg/ml;s ICAM-1:(686.952±36.411)pg/ml]和Anti-cd14组血浆KC、s ICAM-1水平[KC:(348.150±20.924)pg/ml;s ICAM-1:(411.050±47.170)pg/ml]明显升高,而Anti-cd14组KC、s ICAM-1水平明显低于CLP组,差异有统计学意义(Pcd14组症状较CLP组明显减轻,但较Sham组有所增加;细胞实验Western blot检测显示:Ⅱ组(2.190 3±0.119 9)和Ⅲ组(1.365 8±0.101 8)NR8383的NF-κB(p65)入核量高于Ⅰ组(1.012 2±0.078 0),Ⅲ组的NF-κB(p65)入核量低于Ⅱ组,差别有统计学意义(Pcd14Mc Ab在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白入核,使其KC表达减少,进而减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用;同时Anti-cd14Mc Ab能抑制内皮细胞表达s ICAM-1,减少中性粒细胞对内皮细胞的黏附作用,起到肺保护作用。

关键词：脓毒症急性肺损伤 NR8383 抗cd14单克隆抗体 NF-κB(p65)

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抗cd14单克隆抗体对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)影响的研究

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中华临床医师杂志（电子版） 2015年第11期9卷 114-117页

作者：侯林义张紫琦张继峰姜琴吕洁萍张文凯山西医科大学第二医院重症医学科太原030001 太原市第五中学 030001 山西医科大学第一医院麻醉科太原030001

目的探讨抗cd14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)的影响。方法 15只雄性SD大鼠,体重(150±20)g,随机分为3组,Sham组、CLP组和Anti-cd14组,每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型... 详细信息

目的探讨抗cd14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)的影响。方法 15只雄性SD大鼠,体重(150±20)g,随机分为3组,Sham组、CLP组和Anti-cd14组,每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型。造模成功后6 h,应用ELISA检测血浆MIP-2、IL-10浓度,左肺采用Western blot测定肺内NF-κB(p65)蛋白的表达水平,取右肺下叶行HE染色、切片后在光镜下观察肺脏病理形态变化。以Sham组作为对照组。结果 ELISA结果显示:CLP组的血浆MIP-2浓度显著高于Sham组和Anti-cd14组,Anti-cd14组的血浆MIP-2浓度低于CLP组,有统计学差异(P0.05);Western blot检测显示:CLP组和Anti-cd14组的NF-κB(p65)表达量高于Sham组(Pcd14组的NF-κB(p65)表达量低于CLP组(Pcd14组肺内均出现炎症细胞浸润、肺间质增厚、出血,Anti-cd14组肺组织炎性表现较CLP组显著减轻。结论抗cd14单克隆抗体能同脂多糖竞争性地结合肺泡巨噬细胞膜表面受体cd14分子,阻止肺内NF-κB(p65)的核内移位,减少致炎因子生成和释放,抑制炎症细胞浸润,起到肺保护作用。

关键词：巨噬细胞肺泡急性肺损伤抗cd14单克隆抗体 NF-κB(p65)

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