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siRNA靶向抗酶抑制剂下调前列腺癌细胞PC3中鸟氨酸脱羧酶表达

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基础医学与临床 2018年第4期38卷 475-479页

作者：金涛李倩欧洁王艳林吴红艳三峡大学人民医院(宜昌市第一人民医院) 三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室三峡大学医学院免疫学系湖北宜昌443002

目的探讨抗酶抑制剂(AZIN)对前列腺癌细胞PC3鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平及增殖的影响。方法将siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞,分别用RT-PCR及Western blot检测抗酶(AZ)、AZIN及ODC在mRNA和蛋白水平的表达,MTT检测细胞增殖。结果 siRNA-A... 详细信息

目的探讨抗酶抑制剂(AZIN)对前列腺癌细胞PC3鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平及增殖的影响。方法将siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞,分别用RT-PCR及Western blot检测抗酶(AZ)、AZIN及ODC在mRNA和蛋白水平的表达,MTT检测细胞增殖。结果 siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞后,AZIN RNA表达水平降低(P<0.01);PC3细胞AZIN蛋白表达水平降低(P<0.05),且使ODC的表达水平降低(P<0.05);PC3细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。结论 siRNA-AZIN可下调前列腺癌细胞PC3中ODC的表达。

关键词：抗酶抑制剂鸟氨酸脱羧酶抗酶 siRNA

利用多中心合成方法同步合成含N-取代甘氨酸的类肽化合物(英文)

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有机化学 1996年第5期16卷 445-449页

作者：刘刚王建新丁振闿军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 Chiron Mimotopes Pty. Ltd. Clayton Victoria Australia

N-取代甘氨酸聚合体是一类新的聚合体化合物,同多肽相比,N-取代甘氨酸聚合体具有抗酶解稳定性,同时使用市售的伯胺作为构建单元(building block)大大地扩展了天然多肽分子结构的多样性,本文报道了利用多中心多肽合成方法合成了九个含N-... 详细信息

N-取代甘氨酸聚合体是一类新的聚合体化合物,同多肽相比,N-取代甘氨酸聚合体具有抗酶解稳定性,同时使用市售的伯胺作为构建单元(building block)大大地扩展了天然多肽分子结构的多样性,本文报道了利用多中心多肽合成方法合成了九个含N-取代甘氨酸聚合体多肽杂合休,由于此类聚合体具有抗酶的能力,因此可用于蛋白酶抑制剂的研究。

关键词：类肽甘氨酸组合化学多中心多肽抗酶

外源性antizyme 1基因转染对SH-SY5Y细胞的生物学影响

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南方医科大学学报 2007年第11期27卷 1709-1713页

作者：姜立马文丽李晋彭翼飞徐兵郑文岭南方医科大学基因工程研究所南方医科大学人体解剖学教研室南方医院血液科广东广州510515

目的研究antizyme1(AZ1)基因对成人神经廇SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法将构建好的AZ1基因重组真核表达载体pAZ1m稳定转染SH-SY5Y细胞。通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析AZ1转染对细胞周期及凋亡的影响。RT-PCR... 详细信息

目的研究antizyme1(AZ1)基因对成人神经廇SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法将构建好的AZ1基因重组真核表达载体pAZ1m稳定转染SH-SY5Y细胞。通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析AZ1转染对细胞周期及凋亡的影响。RT-PCR与Western blotting检测AZ1基因转染对cyclin D1和caspase-3表达的影响,caspase-3试剂盒检测酶活性变化。结果稳定转染SH-SY5Y细胞后,检测结果显示AZ1基因转染能够减慢SH-SY5Y细胞增殖速度,并使细胞停滞于G0/G1期。在cyclin D1基因表达抑制的同时,caspase-3基因表达上调。酶活性测定显示Caspase-3活性上升。结论AZ1基因能够抑制SH-SY5Y细胞增殖,通过降低cyclin D1的表达阻滞细胞周期于G0/G1期,并上调caspase-3表达促进SH-SY5Y细胞凋亡。

关键词：抗酶细胞增殖细胞周期凋亡

非泛素化蛋白降解体系靶向敲减KRAS癌蛋白的初步研究

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中国肿瘤临床 2016年第21期43卷 937-942页

作者：马怡晖庞霞许晶晶夏培苡高汉青郑州大学第一附属医院病理科郑州市450052

目的:尝试构建能与KRAS癌蛋白相互作用的"RBD+ODC"融合蛋白,经由"鸟苷酸脱羧酶/抗酶"系统(onithine decarboxylase/antizyme,ODC/AZ)在蛋白水平直接实现对KRAS癌蛋白的降解。方法:应用分子克隆的方法构建AZ、ODC、"RBD+ODC"、突变体"RBD... 详细信息

目的:尝试构建能与KRAS癌蛋白相互作用的"RBD+ODC"融合蛋白,经由"鸟苷酸脱羧酶/抗酶"系统(onithine decarboxylase/antizyme,ODC/AZ)在蛋白水平直接实现对KRAS癌蛋白的降解。方法:应用分子克隆的方法构建AZ、ODC、"RBD+ODC"、突变体"RBD+ODC"、突变体KRAS等真核表达质粒,分别瞬时转染人HEK293T和胰腺癌细胞PANC-1,应用Western blot法在蛋白水平直接检测外源性和内源性KRAS表达水平的改变,应用Co-IP法检测到"RBD+ODC"能够与KRAS癌蛋白相互作用。结果:成功构建了AZ、ODC、"RBD+ODC"、突变体"RBD+ODC"、突变体KRAS等多个真核表达质粒,相较于对照组,"RBD+ODC"能够在蛋白水平直接实现对外源性和内源性KRAS癌蛋白的"敲减",并且能够与KRAS有效结合。结论:靶向敲减KRAS癌蛋白的非泛素化蛋白降解体系的构建,为下一步功能试验奠定了基础。

关键词：蛋白敲减结合结构域功能结构域鸟苷酸脱羧酶抗酶

Antizyme1基因转染对K562细胞增殖与凋亡的影响

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中国生物工程杂志 2007年第8期27卷 7-13页

作者：姜立马文丽李晋彭翼飞徐兵郑文岭南方医科大学基因工程研究所广州510515 南方医科大学人体解剖学教研室广州510515 南方医科大学附属南方医院广州510515

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白对人红白血病K562细胞增殖、三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡时的影响。方法:定点突变技术构建缺失frameshift位点的pEGFP-N1-AZ1-mutation重组表达载体。脂质体法转染K562细胞,通过G418筛选获得稳定表达antizy... 详细信息

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白对人红白血病K562细胞增殖、三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡时的影响。方法:定点突变技术构建缺失frameshift位点的pEGFP-N1-AZ1-mutation重组表达载体。脂质体法转染K562细胞,通过G418筛选获得稳定表达antizyme1的K562pAZ1m细胞系。采用不同浓度的As2O3处理细胞,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期及凋亡变化。并通过RT-PCR方法检测antizyme1转染对cyclinD1和survivin基因表达的影响。结果:获得稳定表达antizyme1的K562pAZ1m细胞株后,其增殖能力明显减慢。cyclinD1基因表达降低,细胞主要停滞于G0/G1期。在As2O3的诱导作用下,细胞凋亡增多,survivin基因表达降低。结论:AZ1基因能够抑制K562细胞增殖,通过对cyclinD1的负调控使细胞周期停滞于G0/G1期。并可能通过下调survivin表达来加强As2O3对其的诱导凋亡作用。

关键词：抗酶细胞增殖细胞周期凋亡

调控AZ-1/AZIN-1对非小细胞肺癌细胞A549作用的实验研究

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调控AZ-1/AZIN-1对非小细胞肺癌细胞A549作用的实验研究

作者：欧洁三峡大学

学位级别：硕士

目的:多胺（polyamines）是参与哺乳动物生长发育的有机小分子,其在细胞内的过度累积与多种疾病的发生发展有关,其中肿瘤的快速生长高度依赖细胞内多胺。由此,多胺合成途径成为抗肿瘤防治研究的重要靶点,尤其是多胺的关键合成限速酶鸟... 详细信息

目的:多胺（polyamines）是参与哺乳动物生长发育的有机小分子,其在细胞内的过度累积与多种疾病的发生发展有关,其中肿瘤的快速生长高度依赖细胞内多胺。由此,多胺合成途径成为抗肿瘤防治研究的重要靶点,尤其是多胺的关键合成限速酶鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）。细胞内鸟氨酸脱羧酶与鸟氨酸脱羧酶抗酶（antizyme-1,AZ-1）和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子（antizyme inhibitor-1,AZIN-1）之间具有精密的负反馈调节机制以调节细胞内多胺的水平,但在肿瘤中这种调节作用失衡。由此,本研究的目的在于以非小细胞肺癌细胞株A549为模型,通过上调细胞内鸟氨酸脱羧酶抗酶表达和下调细胞内鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子表达,分析其对鸟氨酸脱羧酶表达的调节作用,以及对细胞内多胺水平的干扰和对A549生长的抑制作用。方法:1)应用基因克隆技术大量制备pc DNA3.1-HOAZ-1质粒,并用酶切、PCR和DNA测序验证所制备的质粒;2)通过RT-PCR和Western blot法检测pc DNA3.1-HOAZ-1在A549细胞内的表达和筛选有效的AZIN-1-si RNA;3)应用RT-PCR和Western blot法检测A549细胞内转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RNA对ODC的m RNA和蛋白表达水平影响;4)应用HPLC检测A549细胞转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RNA后多胺水平改变;5)应用流式细术检测A549细胞内转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RNA对A549细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:1)通过基因克隆技术制备出表达人源性AZ-1的pc DNA3.1-HOAZ-1质粒,通过酶切、PCR和DNA测序验证其正确,并且在A549细胞内能够在m RNA和蛋白水平上调AZ-1表达;并筛选出有效下调AZIN-1表达的AZIN-1-si RNA672;2)在A549细胞内转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RN672在m RNA和蛋白水平能有效下调ODC的表达;3)在A549细胞内转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RNA672能有效降低A549细胞内多胺水平;4)在A549细胞内转染pc DNA3.1-HOAZ-1质粒和（或）AZIN-1-si RNA672有效促进A549细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞。结论:本研究证实上调功能性AZ-1和（或）下调AZIN-1的表达可抑制A549细胞内ODC的表达,并干扰细胞内多胺水平,引起细胞周期阻滞和促进细胞凋亡。上述研究结果为肿瘤治疗提供了新的思路和新途径。

关键词：多胺抗酶抗酶抑制因子鸟氨酸脱羧酶非小细胞肺癌

PAP法和双桥PAP法检测乙型肝炎核心抗原的比较

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上海第一医学院学报 1982年第1期 49-54页

作者：叶诸榕张秀荣翟为溶上海第一医学院基础医学部病理解剖学教研室

近十余年发展起来的“非标记酶技术”,尤其是酶抗酶可溶性复合物法(简称PAP法)是比间接酶标法更敏感的免疫酶染色技术。本文介绍了兔抗辣根过氧化物酶(HRP)血清以及PAP的制备方法,讨论了PAP制备过程中使用的酶及其用量,简化了酶/抗酶克... 详细信息

近十余年发展起来的“非标记酶技术”,尤其是酶抗酶可溶性复合物法(简称PAP法)是比间接酶标法更敏感的免疫酶染色技术。本文介绍了兔抗辣根过氧化物酶(HRP)血清以及PAP的制备方法,讨论了PAP制备过程中使用的酶及其用量,简化了酶/抗酶克分子比值计算公式。并以制得的PAP用于检测肝组织内的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)。通过对20例各种肝病共71只蜡块的检查比较,认为双桥PAP法敏感性比PAP法更高,并具有节约第一抗体用量的优点。

关键词： PAP HRP 抗酶复合物肝炎核心抗原双桥乙型