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植物保护 2010年第5期36卷 28-32页

作者：尹良芬胡勐郡金鑫 Guido Schnabel 罗朝喜华中农业大学植物科技学院武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 Clemson University Dept. of ESPS Clemson 29634 USA

桃褐腐病是严重危害桃生产的重要病害之一。在实际生产中,该病害的控制主要以化学防治为主。由于杀菌剂的大量使用,桃褐腐病菌已对几类常用的杀菌剂产生了不同程度的抗药性。本文就桃褐腐病菌(Moniliniaspp.)对生产上使用的几大类杀菌... 详细信息

桃褐腐病是严重危害桃生产的重要病害之一。在实际生产中,该病害的控制主要以化学防治为主。由于杀菌剂的大量使用,桃褐腐病菌已对几类常用的杀菌剂产生了不同程度的抗药性。本文就桃褐腐病菌(Moniliniaspp.)对生产上使用的几大类杀菌剂的抗药性情况及抗药性分子机制研究进展进行简单概述和分析,以供国内同行借鉴与参考。

关键词：桃褐腐病杀菌剂抗药性分子机理

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番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺的抗性风险研究

番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺的抗性风险研究

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作者：纪军建河北农业大学

学位级别：硕士

番茄灰霉病是一种世界性病害,对番茄造成严重危害。目前生产上以化学防治为主,但灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威、嘧霉胺等常用杀菌剂已产生抗性,使其防效大为降低,给番茄生产带来重大损失。据报道由瑞士先正达公司研发的苯基吡咯类... 详细信息

番茄灰霉病是一种世界性病害,对番茄造成严重危害。目前生产上以化学防治为主,但灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威、嘧霉胺等常用杀菌剂已产生抗性,使其防效大为降低,给番茄生产带来重大损失。据报道由瑞士先正达公司研发的苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈和由日本石原公司研发的吡啶胺类杀菌剂氟啶胺对番茄灰霉病有较好防效,在国内尚未普遍使用。为研究番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺的抗性风险,本研究进行了咯菌腈和氟啶胺对番茄灰霉病菌的生物活性、番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺的敏感性及对不同杀菌剂的交互抗性关系、室内获得抗性菌株的潜力和抗性突变体的生物学性状、抗药性机理、田间连续施药对番茄灰霉病菌对咯菌腈敏感性变异的影响等方面的研究。主要结果如下: 1.采用离体叶片法测定了咯菌腈和氟啶胺对番茄灰霉病的预防和治疗作用,咯菌腈浓度为2μg/mL时保护性防效为87.55%,20μg/mL时治疗性防效为96.23%。氟啶胺浓度为2μg/mL时保护性防效为82.10%,200μg/mL时治疗性防效为96.06%。咯菌腈兼有保护和治疗效果,而氟啶胺主要表现为保护作用。 2.测定了河北和山东不同地区的106株番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺的敏感性。其对咯菌腈的EC50值在0.0039.0449μg/mL之间,均表现对咯菌腈高度敏感。其对氟啶胺的EC50值分布在0.0016.0531μg/mL之间,不同区域间的EC50值存在较大差异。通过对不同药剂EC50值之间的线性回归分析,发现对咯菌腈、氟啶胺、啶菌噁唑、啶酰菌胺和嘧霉胺无交互抗性关系。 3.2个亲本敏感菌株经紫外诱导,获得6个抗咯菌腈突变体,其抗性水平在319～10000倍之间,抗性突变频率为3.13×10。30个敏感菌株经药剂驯化获得2个抗咯菌腈突变体,抗性水平分别为46倍及大于150000倍,抗性频率为0.3175%。然而,在同等条件下均未获得抗氟啶胺的突变体。8个抗性突变体中,7株抗药性可稳定遗传,有1株在PDA平板上继代培养11代后抗性消失。抗性突变体的菌丝生长速率、产孢量、产菌核数及致病力均低于其亲本菌株。 4.试验结果显示,所有突变体在高浓度NaCl培养基上表现极为敏感。紫外诱导获得的6个抗性突变体在高浓度的葡萄糖培养基上表现敏感,而药剂驯化获得的2个抗性突变体对高糖渗透压不敏感。 5.初步探讨了番茄灰霉病菌对咯菌腈的抗性分子机理。经PCR扩增后,咯菌腈抗感菌株的组氨酸激酶基因片段碱基大小在918～981bp之间。测序结果显示,只有突变体Rla-j与亲本敏感菌株的组氨酸激酶基因碱基序列有差异,第2205位碱基由G突变成A,导致由丝氨酸突变成天冬酰胺。其余抗性突变体与敏感菌株组氨酸激酶基因碱基序列完全相同。 6.在温室栽培番茄的1个生长季节中,按推荐剂量连续施用咯菌腈7次后,番茄灰霉病菌对其仍很敏感,其EC50值在0.0047～0.0462μg/mL之间,表明在田间单独使用咯菌腈时灰霉病菌对其不易产生抗性。因此推测,番茄灰霉病菌对咯菌腈存在较低或中等抗性风险。

关键词：番茄灰霉病菌咯菌腈氟啶胺交互抗性抗性风险抗药性分子机理

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桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因SDHA、SDHB的克隆

桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因SDHA、SDHB的克隆

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：周洁向书芹沈锦张娜罗朝喜华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室

桃褐腐病是由子囊菌链核盘菌（Monilinia spp.）引起的严重为害桃生产的重要病害。褐腐病遍布全球,其中以亚洲、澳洲、欧洲及美洲为害最为严重。为害桃的链核盘菌已报道的主要有3个种:核果链核盘菌（Monilinia laxa）、果生链核盘菌（Mo... 详细信息

桃褐腐病是由子囊菌链核盘菌（Monilinia spp.）引起的严重为害桃生产的重要病害。褐腐病遍布全球,其中以亚洲、澳洲、欧洲及美洲为害最为严重。为害桃的链核盘菌已报道的主要有3个种:核果链核盘菌（Monilinia laxa）、果生链核盘菌（Moniliniafructigena）、美澳型核果链核盘菌（Monilinia fructicola）。我国从20世纪20年代初对此病开始有报道,至20世纪90年代初已遍及16个省（区）。***及***国内很早就已有记载。然而,据本研究室2008～2010年的调查研究,我国的***及***和欧美的***及***虽有类似之处,但在一些形态上像芽管形状,每个孢子产生的芽管数量等有明显区别。比对其ITS序列,Tub2基因,G3PDH基因序列也发现我国种与传统的已报道种在分子水平上存在很大差别,我们已将我国的***列为新种,命名为Moniliayunnanensis以区别于欧美的***,同时修订我国的***为***（论文已投稿）。目前使用杀菌剂仍然是控制该病的主要手段。生产上常用于控制桃褐腐病的杀菌剂类型中,桃褐腐病菌已对苯并咪唑类（BZIs）,二甲酰亚胺类（DCFs）及甾醇脱甲基化酶抑制剂类（DMIs）产生了抗药性。甲氧基丙烯酸酯类呼吸抑制剂（QoIs）是目前尚未发生抗药性的唯一类型,由于对其过分依赖,抗药性发生风险越来越高,急需寻找可与其交替使用的杀菌剂类型。琥珀酸脱氢酶抑制剂（SDHIs）类杀菌剂是近年世界各大农业公司的主要开发杀菌剂类型。SDHI杀菌剂的作用机理为专化性地抑制真菌线粒体三羧酸循环呼吸链上的琥珀酸脱氢酶。该酶为呼吸链中辅酶Q的结合位点,在电子传递中起重要作用。琥珀酸脱氢酶是由4个亚基（A,B,C和D）组成的复合体,其中与辅酶Q,同时也与SDHI杀菌剂结合的位点由B,C和D三个亚基组成。经过数年的使用,目前在其他病原真菌中已经出现一些对SDHI杀菌剂的抗性菌群。分子水平的研究发现这些抗性菌株主要是其琥珀酸脱氢酶B亚基的碱基突变所致,据相关报道,2010年夏在美国的东南部已检测到了对SDHI杀菌剂啶酰菌胺具有抗性的桃褐腐病菌。所以本实验将通过研究桃褐腐病菌对SDHI杀菌剂的抗性分子机理,开发出抗性菌株的快速检测方法,快速、简便地检测我国桃褐腐病菌群体将来可能出现的抗性菌株比率,监测其消长情况,实现及时调整,完善抗性菌群的治理策略,保障桃产业的安全生产。所有这些工作的基础就是必须首先从桃褐腐病菌的3个种中克隆出琥珀酸脱氢酶基因,而本实验的任务是克隆其中的2个基因SDHA和SDHB基因。本实验就我国桃褐腐菌3个种中琥珀酸脱氢酶的SDHA和SDHB基因进行克隆。现已成功地从桃褐腐病菌***,***中克隆了SDHA基因,全长分别为2389bp、2399bp。同时从***中分离到了一个大小为1564bp的SDHA片段。从***,***中克隆了SDHB全长,分别为944bp、947bp。同时从***中分离到了一个大小为582bp的SDHB片段。琥珀酸脱氢酶基因的克隆,为进一步研究桃褐腐病菌对SDHIs抗药性分子机理打下了坚实的基础。

关键词：桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因克隆 SDHI杀菌剂抗药性分子机理

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桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因SDHC,SDHD克隆与分析

桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因SDHC,SDHD克隆与分析

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：陈淑宁向书芹沈锦张娜罗朝喜华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室

桃褐腐病是由子囊菌链核盘菌（Monilinia spp.）引起的严重为害桃生产的重要病害,在生产上主要为害桃树的花、枝梢及果实,其中以果实受害最重,在采前及采后均能造成严重经济损失。目前防治桃褐腐病主要依赖杀菌剂的使用,新型杀菌剂琥珀... 详细信息

桃褐腐病是由子囊菌链核盘菌（Monilinia spp.）引起的严重为害桃生产的重要病害,在生产上主要为害桃树的花、枝梢及果实,其中以果实受害最重,在采前及采后均能造成严重经济损失。目前防治桃褐腐病主要依赖杀菌剂的使用,新型杀菌剂琥珀酸脱氢酶抑制剂（SDHIs）的靶标即为琥珀酸脱氢酶（SDH）。靶标基因的克隆在研究抗药性分子机理过程中是必不可少的前期基础。目前,SDH基因已经在灰霉菌及链格孢菌等植物病原真菌中成功克隆。该基因有4个亚基因,分别为SDHA、SDHB、SDHC及SDHD基因。本项目已完成对我国桃褐腐病菌3个种的亚基因SDHC、SDHD全长基因的克隆。结果表明,***的SDHC基因全长737bp,其中包括54bp内含子,位于cDNA 447位碱基;***和***的SDHC基因全长均为656bp,其中包括53bp内含子,均位于eDNA 445位碱基。***和***和***的SDHD基因序列全长均为684bp,其中包括54bp内含子,均位于cDNA424位碱基。

关键词：桃褐腐病菌琥珀酸脱氢酶基因克隆 SDHI杀菌剂抗药性分子机理

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