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苏铁叶的生药学鉴定及抗肿瘤活性部位筛选

时珍国医国药 2017年第8期28卷 1910-1912页

作者：王绍辉马四补颜昱程哲康张亚琛刘同祥中央民族大学中国少数民族传统医学研究院北京100080 贵阳中医学院贵州贵阳550002

目的研究苏铁叶的生药学特征及筛选其抗肿瘤活性部位。方法采用原植物形态鉴别、性状鉴别、显微鉴别和薄层色谱鉴别的方法对苏铁叶生药学特征进行鉴定,通过CCK-8法检测苏铁叶二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的不同浓度对人肺腺... 详细信息

目的研究苏铁叶的生药学特征及筛选其抗肿瘤活性部位。方法采用原植物形态鉴别、性状鉴别、显微鉴别和薄层色谱鉴别的方法对苏铁叶生药学特征进行鉴定,通过CCK-8法检测苏铁叶二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的不同浓度对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。结果确定了苏铁叶原植物形态、性状、显微和薄层色谱的主要鉴别特征,发现了苏铁叶二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的不同浓度均能不同程度地抑制人肺腺癌细胞A549细胞的增殖。结论苏铁叶的主要鉴别特征可为苏铁叶的生药鉴定、质量标准的制定提供依据,苏铁叶二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位对人肺腺癌细胞A549具有明显的体外抑制作用,其抑制作用与药物浓度先呈正相关后呈负相关,这为后期对苏铁叶的进一步研究提供理论基础。

关键词：苏铁叶生药学性状鉴别显微鉴别抗肿瘤活性部位

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野菊花体外抗肿瘤活性部位的研究

野菊花体外抗肿瘤活性部位的研究

作者：全文婕南华大学

学位级别：硕士

摘要:目的:确定野菊花的体外抗肿瘤活性部位与体外抗肿瘤活性成分,初步探讨其抗肿瘤作用机制,为进一步开发利用野菊花提供实验数据。方法:1.以70%乙醇为溶剂,65℃条件下加热回流提取野菊花总提物(chrysanthemum indicum extract,CIE),... 详细信息

摘要:目的:确定野菊花的体外抗肿瘤活性部位与体外抗肿瘤活性成分,初步探讨其抗肿瘤作用机制,为进一步开发利用野菊花提供实验数据。方法:1.以70%乙醇为溶剂,65℃条件下加热回流提取野菊花总提物(chrysanthemum indicum extract,CIE),依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对CIE进行萃取,得到野菊花石油醚部位提取物(Petroleum ether extract,PEE)、乙酸乙酯部位提取物(Ethyl acetate extract,EAE)、正丁醇部位提取物(N-butyl alcohol extract,NAE),称重计算产率,同时采用一系列特征显色试验对不同极性部位的化学成分类型进行初步的理化鉴定。2.使用倒置显微镜观察法、CCK-8法检测CIE、PEE、EAE和NAE对人肺癌细胞A549、人慢性骨髓性白血病细胞K562、人乳腺癌细胞MCF-7和人肝癌细胞Hep G2细胞形态和增殖的影响,Hoechst染色法、划痕实验法和Transwell小室法评价PEE、EAE、NAE对MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。3.根据野菊花抗肿瘤活性筛选结果,使用硅胶柱层析法结合薄层色谱法对PEE和EAE所含化学成分进行进一步分离,同时以MCF-7细胞增殖抑制活性为指标,筛选活性最强的分段产物。结果:1.从1 kg野菊花中提取得到CIE共392.2 g,产率为39.22%;用一系列有机溶剂萃取得到PEE共56.1 g,产率为5.61%,EAE共39.3 g,产率为3.93%,NAE共33.8 g,产率为3.38%。采用一系列特征显色试验对不同极性部位成分的化合物类型进行初步理化鉴定,其结果表明PEE在FeCl(水溶液)反应、Dragendorff反应、Wager反应、Mayer反应、Molish反应、Liebermann-Burchard反应、Salkowski反应中呈现明显阳性;EAE在PAULY反应、FeCl(醇溶液)反应、盐酸-镁粉反应、FeCl(水溶液)反应、Molish反应、Liebermann-Burchard反应和Salkowski反应中呈现明显阳性。2.浓度超过150μg/mL的CIE、PEE、EAE和NAE对A549、K562和MCF-7细胞密度与形态影响明显,且在150-250μg/mL范围内对细胞增殖抑制作用呈量效相关性,PEE对MCF-7增殖抑制效果最显著;EAE对MCF-7的诱导凋亡作用、抑制迁移和侵袭作用较好。3.从PEE中分离得到了9个组分群P1-P9,从EAE中分离得到了6个组分群E1-E6,其中组分E1对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用最为明显。结论:1.野菊花提取物具有抗肿瘤活性,且对乳腺癌细胞MCF-7具有良好的体外抗肿瘤效果;2.野菊花抗肿瘤活性部位为石油醚极性部位和乙酸乙酯极性部位,其抗肿瘤作用机制可能与诱导肿瘤细胞的凋亡和抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭有关;3.野菊花抗肿瘤活性最强的成分存在于EAE中以石油醚∶乙酸乙酯(70∶30)洗脱下的组分内。

关键词：野菊花体外抗肿瘤活性抗肿瘤活性部位

马甲子抗肿瘤活性部位的筛选及其制剂工艺的研究

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马甲子抗肿瘤活性部位的筛选及其制剂工艺的研究

作者：武蕊娟成都中医药大学

学位级别：硕士

马甲子Paliurus ramosissimus (Lour.) Poir.系鼠李科马甲子属植物,其果实、花、茎叶及根均可入药,多用于治疗疔疮痈肿、无名肿痛、下肢溃疡及眼目赤痛,民间多用于治痈疮溃疡等。本课题组前期实验发现马甲子药材醇提物具有较明显的抗肿... 详细信息

马甲子Paliurus ramosissimus (Lour.) Poir.系鼠李科马甲子属植物,其果实、花、茎叶及根均可入药,多用于治疗疔疮痈肿、无名肿痛、下肢溃疡及眼目赤痛,民间多用于治痈疮溃疡等。本课题组前期实验发现马甲子药材醇提物具有较明显的抗肿瘤活性,故对其醇提物进行进一步的纯化分离,得到2个单体化合物分别为2α,27-二反式对羟基肉桂酰氧基-白桦脂酸和白桦脂酸。其中化合物2α,27-二反式对羟基肉桂酰氧基-白桦脂酸为新化合物,命名为马甲子素。以马甲子素和白桦脂酸的含量为指标,对马甲子中2种成分的提取工艺进行了优化研究,其间结合体外抗肿瘤试验,筛选最佳提取方式,结果表明2种成分的含量与其抗肿瘤活性密切相关,但不存在明显的量效比例关系。之后再进行单因素考察确定提取工艺后采用L(3)正交试验优化提取工艺,最终确定最佳提取工艺为15倍量80%乙醇浸泡12h渗漉提取,结果表明,此工艺稳定可行,重复性好。马甲子素属于以白桦脂酸为母核的五环三萜类化合物,故猜想其可能也具有抗肿瘤活性。以白桦脂酸为对照,测定马甲子素的体外抗肿瘤效果。结果表明马甲子素抗肿瘤效果强于白桦脂酸。对马甲子醇提物根据不同极性进行分段,确定有效成分马甲子素和白桦脂酸所在部位。对用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取得到的三个部位萃取物进行含量检测和体外抗肿瘤试验,含量检测和体外抗肿瘤活性试验可确定乙酸乙酯部位效果最佳;再以不同比例的石油醚：乙酸乙酯配制的不同极性溶剂洗脱乙酸乙酯部位得到5个组分,体外抗肿瘤活性实验结果表明1：1和1：2表现出较强的抗肿瘤活性,马甲子素和白桦脂酸在这2个部位也均有分布,故选1：1和1：2组分混合物为马甲子醇提物的抗肿瘤活性部位。以崩解时限、外观等一系列参数作为评价指标进行处方工艺筛选,制备马甲子分散片,并制定了相应的质量标准,以保证药物在临床上的安全使用。以马甲子素和白桦脂酸为指标成分,考察了不同干燥方法对2种成分含量的影响,并结合体外抗肿瘤活性试验筛选出最佳干燥方法。

关键词：马甲子体外抗肿瘤活性马甲子素抗肿瘤活性部位马甲子分散片干燥方法

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野菊花抗肿瘤活性部位筛选研究

中南医学科学杂志 2017年第3期45卷 242-246页

作者：全文婕史晓欣熊润德张开喻翠云贺冬秀南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心

目的筛选野菊花的抗肿瘤活性部位并初步探讨其机制。方法利用形态观察、CCK-8、Hoechst染色和划痕实验评价野菊花总提取物(CIE)及其石油醚部位(PEE)、乙酸乙酯部位(EAE)、正丁醇部位提取物(NAE)对人肺癌细胞A549、人慢性骨髓性白血病细... 详细信息

目的筛选野菊花的抗肿瘤活性部位并初步探讨其机制。方法利用形态观察、CCK-8、Hoechst染色和划痕实验评价野菊花总提取物(CIE)及其石油醚部位(PEE)、乙酸乙酯部位(EAE)、正丁醇部位提取物(NAE)对人肺癌细胞A549、人慢性骨髓性白血病细胞K562、人乳腺癌细胞MCF-7和人肝癌细胞Hep G2的抗肿瘤活性。结果 CIE及PEE、EAE、NAE>150μg/m L对A549、K562和MCF-7细胞形态影响明显且CIE及PEE、EAE、NAE(150~250μg/m L)对上述三种细胞增殖抑制作用呈量效相关性,PEE对MCF-7细胞抑制效果最显著;EAE对MCF-7细胞的诱导凋亡作用和迁移抑制作用相对较好。结论野菊花具有抗肿瘤活性,抗肿瘤活性较强的部位为石油醚和乙酸乙酯部位,其抗肿瘤机制可能与抑制细胞增殖、迁移和诱导细胞凋亡有关,这为进一步研究开发野菊花提供基础。

关键词：野菊花肿瘤细胞抗肿瘤活性抗肿瘤活性部位

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石上柏活性成分及含量测定研究

石上柏活性成分及含量测定研究

作者：黄建勇福建医科大学

学位级别：硕士

众所周知，恶性肿瘤是当今严重危害人类生命健康的一类疾病。而中药在抗肿瘤方面具有临床疗效显著、不良反应低等优势，已得到国际社会的普遍认可。对抗肿瘤中草药进行研究与开发是当前研究的热点之一。石上柏（Selaginella doederleini... 详细信息

众所周知，恶性肿瘤是当今严重危害人类生命健康的一类疾病。而中药在抗肿瘤方面具有临床疗效显著、不良反应低等优势，已得到国际社会的普遍认可。对抗肿瘤中草药进行研究与开发是当前研究的热点之一。石上柏（Selaginella doederleinii Hieron）为蕨类植物门卷柏科卷柏属植物深绿卷柏的全草。临床上用于治疗咽喉肿痛、风湿痹痛、鼻咽癌、绒毛膜上皮癌、肺癌、宫颈癌及外伤出血等各种疾病。但是，目前对其抗肿瘤作用的物质基础研究报道不多，因此有必要在该方面进行深入研究。笔者对石上柏进行初步提取和分离，并研究其乙醇总提取物、不同极性有机溶剂萃取部位及萃取后剩余水部位的体外抗肿瘤活性;以体外筛选结果为导向，采用制备型液相色谱进行分离纯化活性成分，利用波谱技术鉴定其结构;并对主要活性成分进行含量测定研究;此外，以主要成分穗花杉双黄酮为指标成分，研究了石上柏提取物在大鼠血浆中的药动学行为。主要内容和结果如下：1、石上柏成分的初步提取、分离。用70%乙醇提取石上柏药材，制备乙醇总提取物，再用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯依次进行萃取，将乙醇总提取物、有机溶剂萃取部位及萃取后剩余水部位进行浓缩，得到相应部位浸膏。采用MTT法以人癌细胞评估石上柏乙醇总提取物、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取部位及萃取后剩余水部位的体外抗肿瘤活性，筛选结果为乙酸乙酯萃取部位具有较好的体外抗肿瘤活性。2、对抗肿瘤活性较好的乙酸乙酯萃取部位用制备型液相色谱进行分离纯化，成功分离得到4个化合物，利用波谱技术鉴定其结构，分别为穗花杉双黄酮（I）、罗伯斯特双黄酮（II）、2"，3"-二氢-3'，3'"-双芹菜素（III）及3'，3'"-双柚皮素（IV），其中III和IV为首次从该植物中分离得到。3、应用HPLC法建立了同时测定穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、2′′,3′′-二氢-3′,3′′′-双芹菜素及3′,3′′′-双柚皮素四个主要活性成分的含量分析方法，并成功将其应用到石上柏药材活性成分的含量分析中。4、研究采用高效液相色谱-质谱技术建立大鼠血浆中石上柏主要成分穗花杉双黄酮的含量测定方法，用于大鼠灌胃石上柏提取物后大鼠血浆中穗花杉双黄酮的药代动力学研究，本研究有利于揭示石上柏的体内过程和药效物质基础。

关键词：石上柏抗肿瘤活性部位化学成分含量测定药代动力学

景天属三种植物药的鉴定、总黄酮提取纯化及抗肿瘤活性研究

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景天属三种植物药的鉴定、总黄酮提取纯化及抗肿瘤活性研究

作者：陈雨洁中南民族大学

学位级别：硕士

垂盆草（Sedum sarmentosum Migo.）、佛甲草（S. lineare Thunb.）及凹叶景天（S. emarginatum Migo.）是来源于景天科景天属的3种广泛使用的中药及民族药。其中,垂盆草的新鲜或干燥全草是该属中应用最多、使用面最广的中药,具清利湿... 详细信息

垂盆草（Sedum sarmentosum Migo.）、佛甲草（S. lineare Thunb.）及凹叶景天（S. emarginatum Migo.）是来源于景天科景天属的3种广泛使用的中药及民族药。其中,垂盆草的新鲜或干燥全草是该属中应用最多、使用面最广的中药,具清利湿热、解毒等功能,临床上用于治疗各种肝炎、湿热黄疸、小便不利、痈肿疮疡等,为垂盆草单方与复方制剂的原料药材,并已被多版中国药典收载;而同属近缘种植物药佛甲草、凹叶景天等在民间也常作为清热解毒、止血、促进伤口愈合药,广泛用于多种炎症、各种出血、烧烫伤、疮痈疔毒等的治疗。我国土家族地区还普遍将3种植物药用于多种癌症的治疗。由于3种植物药资源丰富,疗效应用广泛,值得深入研究,有一定开发推广应用的前景。三种药用植物（包括其他近缘种）外形相似,部分种之间常相互混淆。同时,产地尤其是采收期因素是否与各药材的质量存在相关性尚不清楚,它们的抗肿瘤活性也未得到有效验证,抗肿瘤有效部位不清。因此,笔者分别对景天属几种易混淆（药用）植物叶表皮特征、不同产地和采收期药材样品的总黄酮（根据文献分析为有效部位之一）含量、3种植物药总黄酮的提取与纯化方法以及它们各提取部位的抗肿瘤活性进行了比较研究,以期寻找新的区分几种易混淆种的方法,在前人研究的基础上进一步完善药材的质量控制指标,并实验验证3种植物药的抗肿瘤活性,明确有效部位。显微鉴定研究表明,景天属3种及其几种同属植物叶表皮细胞的形态特征在种内较稳定,种间差异大,可作为物种鉴别的重要依据。而气孔参数（气孔长宽比、气孔指数和气孔密度）受产地因素的影响较大,在本属几种植物分类鉴定上的价值不大。通过对景天属3种植物药不同产地、不同采收期的样品中总黄酮含量进行比较研究,发现各产地样品中总黄酮含量与其采收期存在显著相关性:垂盆草及佛甲草都在4月时总黄酮含量最高,6月时含量最低,入秋后又略有回升;而凹叶景天的总黄酮含量从4月至（9）10月持续下降。以总黄酮作为活性成分来考虑,笔者认为湖北地区所产3种植物药于盛花期采收质量较好,且鄂西所产的垂盆草、凹叶景天质量略优于鄂东所产。所建立的质量分析方法简便、快速,进一步完善了其品质鉴定方法。景天属3种植物药总黄酮的提取纯化方法研究表明,碱溶酸沉法较为简便,但所得提取物黄酮含量偏低;大孔树脂和聚酰胺联用技术可充分发挥两者优势,具有较好的富集效果,使垂盆草、佛甲草及凹叶景天总黄酮富集物中的黄酮含量分别达到了68.9%、54.0%和51.6%。利用四氮唑盐还原法（MTT法）检测景天属3种植物药垂盆草、佛甲草及凹叶景天的乙酸乙酯、正丁醇提取部位及总黄酮提取物对人肝癌细胞株HepG2、人食管癌细胞株EC109及人结肠癌细胞株SW480的体外增殖抑制作用,发现一定浓度的乙酸乙酯、正丁醇提取部位都有一定的抗肿瘤活性,但各药材总黄酮提取物的抗肿瘤活性最强。三种提取物的活性顺序为:总黄酮提取物＞乙酸乙酯部位＞正丁醇部位。因此推断黄酮类是这三种植物药的主要的抗肿瘤有效成分,这为进一步寻找新的高效安全的抗肿瘤成分奠定了基础。上述研究结果为景天属3种植物药的鉴定、品质评价与质量分析、深入研究及推广应用,以及寻找开发新的抗肿瘤药物资源提供了重要的参考和一定的实验依据。

关键词：垂盆草佛甲草凹叶景天叶表皮显微特征总黄酮含量测定总黄酮提取纯化抗肿瘤活性部位

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半枝莲的化学成分

中国现代中药 2009年第12期11卷 16-17,20页

作者：李宁肖海涛孟大利王金辉李铣沈阳药科大学中药学院辽宁沈阳110016

目的:对黄芩属植物半枝莲Scutellaria barbata ***全草的抗肿瘤活性部位(三氯甲烷萃取物)的化学成分进行分离、鉴定。方法:采用反复硅胶、LH-20葡聚糖凝胶等柱色谱方法进行分离纯化,并通过理化常数测定与谱学分析鉴定其化学结构。结果:... 详细信息

目的:对黄芩属植物半枝莲Scutellaria barbata ***全草的抗肿瘤活性部位(三氯甲烷萃取物)的化学成分进行分离、鉴定。方法:采用反复硅胶、LH-20葡聚糖凝胶等柱色谱方法进行分离纯化,并通过理化常数测定与谱学分析鉴定其化学结构。结果:得到7个化合物,分别鉴定为木犀草素(1),柚皮素(2)、半枝莲酸(3),2,4-二羟基苯甲酸(4),香豆酸乙酯(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7)。结论:化合物4、5为首次从半枝莲中分离得到。

关键词：半枝莲抗肿瘤活性部位化学成分

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蜈蚣藻抗肿瘤活性及其化学成分研究

中国海洋药物 2010年第6期29卷 29-33页

作者：李雅琪张朝晖潘俊芳王顺春陈伊蕾周巧云江苏大学药学院江苏镇江212013 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海201210 上海华拓医药科技发展股份有限公司上海201203

目的研究蜈蚣藻不同提取部位的体外抗肿瘤活性及其物质基础。方法蜈蚣藻经乙醇提取后,用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇依次对其进行分段萃取。采用MTT法测定各提取部位对体外培养人肺腺癌细胞系A549、肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系HeLa、... 详细信息

目的研究蜈蚣藻不同提取部位的体外抗肿瘤活性及其物质基础。方法蜈蚣藻经乙醇提取后,用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇依次对其进行分段萃取。采用MTT法测定各提取部位对体外培养人肺腺癌细胞系A549、肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系HeLa、乳腺癌细胞系MDA-MB-468和MCF-7的抑制作用;应用硅胶、反相硅胶ODS-A、Sephadex LH-20柱色谱对其活性部位进行分离纯化,并确定化合物结构。结果蜈蚣藻的石油醚萃取部位对MDA-MB-468乳腺癌细胞、HepG2肝癌细胞、A549肺癌细胞有明显抑制作用。并从该部位分离得到6个化合物,分别为十六烷酸(1)、胆甾醇(2)、大黄素(3)、24-乙酰泽泻醇A(4)、25-脱水泽泻醇A(5)和泽泻醇A(6)。6个化合物均为首次从该海藻中分离得到,其中,化合物3～6为首次从该属海藻中分离得到。结论蜈蚣藻的石油醚部位是其主要的抗肿瘤活性部位,这可能与从该部位分离得到的6个化合物相关。

关键词：蜈蚣藻抗肿瘤活性部位化学成分