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两种测定化合物对真菌菌丝生长抑制活性方法的比较

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天然产物研究与开发 2009年第4期21卷 577-580页

作者：刘浩张娜阴春晖王蓟花马占鸿周立刚中国农业大学农学与生物技术学院北京100193

采用带毒平板法和液体培养法测定两种植物抗菌化合物血根碱和白屈菜红碱对植物病原真菌水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporium f. sp. lycopersici)和棉花枯萎病菌(*** ***)的抑制活性。论文对两种测定... 详细信息

采用带毒平板法和液体培养法测定两种植物抗菌化合物血根碱和白屈菜红碱对植物病原真菌水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporium f. sp. lycopersici)和棉花枯萎病菌(*** ***)的抑制活性。论文对两种测定方法进行了比较和讨论,结果发现:和带毒平板法相比,采用液体培养法获得的化合物半抑制浓度要低。

关键词：抗真菌化合物带毒平板法液体培养法植物病原真菌菌丝生长

烯丙胺和苄胺类抗真菌药物比较分子力场分析(CoMFA)的研究

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药学学报 1998年第3期33卷 188-193页

作者：季海涛张万年周有骏吕加国朱驹李科陈卫平刘宁第二军医大学药学院

本实验采用“活性类似物法”搜寻到烯丙胺和苄胺类抗真菌化合物的药效构象。其与药物萘替芬、特比萘芬的晶体构象相同。以此构象构建各化合物，采用ｒｍｓｆｉｔ规则叠合各分子，进行ＣｏＭＦＡ研究，得到预测能力很强的抗６种常见致病... 详细信息

本实验采用“活性类似物法”搜寻到烯丙胺和苄胺类抗真菌化合物的药效构象。其与药物萘替芬、特比萘芬的晶体构象相同。以此构象构建各化合物，采用ｒｍｓｆｉｔ规则叠合各分子，进行ＣｏＭＦＡ研究，得到预测能力很强的抗６种常见致病真菌的３ＤＱＳＡＲ模型。并用８个本实验室设计合成的新化合物和５个文献报道的化合物对模型预测能力进行验证。最后结合２ＤＱＳＡＲ方程首次提出了烯丙胺、苄胺类抗真菌化合物与受体蛋白相互作用模式图。

关键词：烯丙胺类抗真菌化合物苄胺类比较分子力场

真菌细胞壁抑制剂H6794-A的结构鉴定和抗菌活性的研究

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中国抗生素杂志 2007年第2期32卷 77-80页

作者：叶丽娟朱辉田敏黄晓莉中国医药集团四川抗菌素工业研究所成都610051

链霉菌H6794的发酵产物对真菌细胞壁合成具有抑制作用,采用活性追踪的方法分离到活性化合物H6794-A。通过化学及波谱学分析确定为由7个氨基酸和1个长支链酰胺内酯构成的环脂肽,与neopeptin B同质。H6794-A对番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌... 详细信息

链霉菌H6794的发酵产物对真菌细胞壁合成具有抑制作用,采用活性追踪的方法分离到活性化合物H6794-A。通过化学及波谱学分析确定为由7个氨基酸和1个长支链酰胺内酯构成的环脂肽,与neopeptin B同质。H6794-A对番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌有明显的抑制作用。

关键词：抗真菌化合物真菌细胞壁抑制剂 Neopeptin B

烯丙胺类抗真菌药物比较分子力场分析(CoMFA)的研究

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药学学报 1997年第8期32卷 593-595页

作者：季海涛张万年周有骏吕加国李科朱驹刘宁第二军医大学药学院

本实验采用“活性类似物法”确定了烯丙胺类抗真菌化合物的药效构象，采用比较分子力场分析法（ＣｏＭＦＡ）拟合了４８个烯丙胺类抗真菌化合物对６种常见致病真菌的３ＤＱＳＡＲ方程，并比较了２种不同叠合规则对模型的影响，最后，... 详细信息

本实验采用“活性类似物法”确定了烯丙胺类抗真菌化合物的药效构象，采用比较分子力场分析法（ＣｏＭＦＡ）拟合了４８个烯丙胺类抗真菌化合物对６种常见致病真菌的３ＤＱＳＡＲ方程，并比较了２种不同叠合规则对模型的影响，最后，用５个新合成化合物对所拟合的抗石膏样毛癣菌、抗烟曲霉菌的ＣｏＭＦＡ模型的预测能力进行了检验。

关键词：烯丙胺抗真菌化合物药效构象叠合规则

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3，4-二羟基二苯甲酮的制备

中国医药工业杂志 2008年第9期39卷 649-650页

作者：廖洪利吴秋业臧志和宋丽曹丽萍成都医学院药学院药物化学教研室四川成都610081 第二军医大学药学院有机化学教研室上海200433

3,4-二羟基二苯甲酮(1)是一种重要的医药中间体,其结构类似物可用于合成光引发剂、紫外吸收剂及某些抗真菌化合物。1的合成报道很少,本研究参考2.4-二羟基二苯甲酮等的合成方法。

关键词： 3,4-二羟基二苯甲酮制备方法医药中间体抗真菌化合物

胶样链霉菌中脂黄霉素的基因簇克隆表达及其生物合成研究

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胶样链霉菌中脂黄霉素的基因簇克隆表达及其生物合成研究

作者：徐建国上海交通大学

学位级别：硕士

胶样链霉菌Sge12是从湖北省神农架原始森林分离的菌株,具有抗稻瘟病病原菌等抗真菌活性。围绕该菌株中抗真菌活性物质的挖掘及其生物合成,本研究进行了基因组测序与分析、抗真菌活性化合物分离纯化与结构鉴定、基因簇克隆与异源表达及... 详细信息

胶样链霉菌Sge12是从湖北省神农架原始森林分离的菌株,具有抗稻瘟病病原菌等抗真菌活性。围绕该菌株中抗真菌活性物质的挖掘及其生物合成,本研究进行了基因组测序与分析、抗真菌活性化合物分离纯化与结构鉴定、基因簇克隆与异源表达及其生物合成研究。首先,本论文对胶样链霉菌Sge12进行全基因组测序,anti SMASH预测分析发现基因组编码37个次级代谢基因簇。其中,并没有发现与已知抗真菌抗生素基因簇高度相似的基因簇,对活性化合物的鉴定及其基因簇的克隆形成挑战,但也暗示相应基因簇具有新颖性。同时,实验室前期构建了胶样链霉菌Sge12的基因组BAC文库,并用文库异源表达筛选技术获得7G7等三个具有抗真菌活性的BAC克隆。在此基础上,本论文通过末端测序和酶谱分析确定这些阳性BAC克隆之间共有69 kb重叠片段;将三个克隆转到变铅青链霉菌SBT18进行异源表达,其发酵产物具有相似的抗菌活性谱,暗示它们携带相同基因簇、可表达产生相同化合物。选取变铅青链霉菌SBT18/7G7进行大量固体发酵,根据活性追踪分离纯化化合物,化学结构解析表明活性化合物为脂黄霉素及其类似物NE-M2和NE-B1。随后,本研究通过大片段基因缺失和异源表达,将脂黄霉素基因簇定位在7G7中的21 kb片段上;再通过单基因敲除和异源表达,确定了脂黄霉素生物合成需要lxn A、lxn B、lxn C、lxn D、lxn E、lxn F、lxn G和lxn H等八个结构基因以及lxn R1和lxn R2两个正调控基因。进而通过LC-MS对各突变株进行代谢谱分析,发现lxn C缺失突变菌株积累了长链脂肪胺中间代谢产物。最后,根据基因敲除、生物信息学分析及突变株中间代谢产物的LC-MS分析结果,本研究推测了脂黄霉素的生物合成途径。综上,本研究克隆、定位并异源表达了脂黄霉素生物合成基因簇,并对其生物合成途径进行了分子遗传研究,为脂黄霉素高产菌株的构建及通过组合生物合成获得更多的抗真菌活性化合物的研究奠定基础。

关键词：抗真菌化合物脂黄霉素生物合成基因簇异源表达生物合成途径

基因组学指导解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离鉴定及抑菌机理初探

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基因组学指导解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离鉴定及抑菌机理初探

作者：刘超河北工业大学

学位级别：硕士

芽孢杆菌(Bacillus)由于能产生多种胞外生物活性物质,在医药、食品、农业及工业领域有着广泛的应用前景。实验室前期研究发现,解淀粉芽孢杆菌(***)BA-26对马铃薯致病菌具有较强拮抗作用,并且所产生的抗菌物质具有酸碱稳定性、热稳定性... 详细信息

芽孢杆菌(Bacillus)由于能产生多种胞外生物活性物质,在医药、食品、农业及工业领域有着广泛的应用前景。实验室前期研究发现,解淀粉芽孢杆菌(***)BA-26对马铃薯致病菌具有较强拮抗作用,并且所产生的抗菌物质具有酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶稳定性。本研究采用生物活性追踪法对解淀粉芽孢杆菌BA-26胞外次级代谢产物中的主要抗菌物质进行分离纯化。基于菌株基因组的次级代谢产物预测结果为指导结合质谱数据比对,揭示解淀粉芽孢杆菌BA-26胞外次级代谢产物中抗菌物质种类发现新型抗菌物质。对分离纯化到的主要抗真菌化合物进行抑菌机理等方面的研究。1.利用三代测序技术对解淀粉芽孢杆菌BA-26进行全基因组测序,测得基因组大小为4,035,062 bp,GC含量为46.41%,预测到编码基因3,927个。COG、GO、KEGG、CAZy基因注释结果显示该菌株与抗菌物质代谢相关基因活跃。anti SMASH预测到可能产生的抗菌物质有macrolactin、bacillaene、fengycin、difficidin、bacillibactin、bacilysin、rhizocticin、surfactin、butirosin。发现4个该菌株所特有的次级代谢产物合成基因簇,它们可能分别指导烯萜类、三型聚酮化合物和非核糖体途径新物质的合成。2.采用硫酸铵沉淀法、大孔树脂吸附法、高效液相色谱法对解淀粉芽孢杆菌BA-26胞外次级代谢产物中的主要抗菌物质进行分离,共纯化到11个抗真菌组分。基于菌株基因组的次级代谢产物预测结果为指导结合质谱数据比对对这些抗真菌化合物进行鉴定。它们分别是与CIturin A/CMycosubtilin/CBacillomycin F分子量相同的抗真菌化合物(分子量在1056 Da左右)和芬荠素类(fengycins)物质及其衍生物(分子量在1430 Da-1520 Da之间)。3.采用显微镜直接观察、台盼蓝染色、DAPI染色法揭示抗菌物质对真菌细胞不同部位作用,发现抗真菌伊枯草素(iturins)类物质能强烈抑制灰葡萄孢菌分生孢子萌发,抑制率达100%;芬荠素(fengycins)除抑制分生孢子萌发(抑制率达82.6%)外,还可使灰葡萄孢菌菌丝生长受阻、膨大变粗、细胞膜通透性增加并能破坏细胞核使之分散于细胞质中。利用平板对峙法测定抗菌物质组分的抑菌活性及最小抑菌浓度,测得Fengycin-a和Fengycin-b组分的抑菌活性最强,最小抑菌浓度为7.81μg/mL;Iturins类组分对灰葡萄孢菌的最小抑菌浓度为62.5μg/mL。以刃天青钠为指示剂用酶标仪测定Fengycin对灰葡萄孢菌分生孢子萌发的最小抑菌浓度,CFengycin B、CFengycin A和CFengycin A对灰葡萄孢菌分生孢子萌发的最小抑菌浓度分别为62.5μg/mL、31.25μg/mL和0.49μg/mL。

关键词：解淀粉芽孢杆菌分离纯化抗真菌化合物芬荠素灰葡萄孢菌抑菌机理