检索结果-南通市图书馆

作者：郝耀港河北科技大学

学位级别：硕士

本研究围绕番茄生产上日益严重的灰叶斑病和颈腐根腐病,开展主要抗病基因分子标记的研究。以已知抗病基因型的番茄种质资源为实验材料,参考与Sm基因紧密连锁的RFLP标记序列设计特异引物,对PCR扩增产物进行序列分析寻找酶切位点,创建了... 详细信息

本研究围绕番茄生产上日益严重的灰叶斑病和颈腐根腐病,开展主要抗病基因分子标记的研究。以已知抗病基因型的番茄种质资源为实验材料,参考与Sm基因紧密连锁的RFLP标记序列设计特异引物,对PCR扩增产物进行序列分析寻找酶切位点,创建了一个新的与抗病基因Sm紧密连锁的CAPS标记“T280”;参考相关文献设计特异性引物进行PCR扩增,筛选获得了一个与抗病基因Frl紧密连锁的SCAR标记“SCAR”。在此基础上,建立了两个同时检测两种抗病基因的双重PCR技术体系,并将上述分子标记及双重PCR技术应用于抗病种质资源的鉴定与筛选。(1)创建了1个与灰叶斑病抗病基因Sm紧密连锁的共显性CAPS标记,命名为T280。引物序列为T280 F(5’-TAG ATG ATG GTC AAG CTG TAG ATA TAA GG-3’)和T280 R(5’-TTC TGC AGA AGG CAT TGC AGG GCC AA-3’)。PCR扩增所有材料均得到1条片段大小为655 bp特异条带,Mme I酶切后抗病纯合型材料仍保留1条655 bp大小特异条带,感病纯合型材料产生2条片段大小为206 bp和449 bp特异条带,抗病杂合型材料产生3条片段大小为206 bp、449 bp和655 bp特异条带。验证结果表明该标记稳定可靠,可用于分子标记辅助育种。(2)筛选获得了1个与颈腐根腐病抗病基因Frl紧密连锁的分子标记,即SCAR。引物序列为SCARF(5’-TCG GTC CAA ATT CAC TTC AA-3’)和SCARR(5’-ACT CCT CCA CTT GCA TAC CC-3’)。PCR扩增结果显示抗病纯合材料得到1条290 bp大小特异条带,感病纯合材料得到1条340 bp大小特异条带,抗病杂合材料得到2条片段大小为290 bp和340 bp特异条带,是一个共显性SCAR标记。(3)在单一基因分子标记基础上,通过优化引物比例、退火温度和DNA模板量等反应体系和条件,建立了同时检测抗病基因Sm和Frl双重PCR技术体系及同时检测抗病基因Mi和Frl双重PCR技术体系。双重PCR扩增结果表现出单引物扩增结果的叠加,酶切结果与单一PCR酶切结果相同。建立的双重PCR技术体系,可以同时检测灰叶斑病和颈腐根腐病、或者根结线虫病和颈腐根腐病两种抗病基因,大大降低检测成本,显著提高检测效率。(4)利用创建的抗病基因分子标记对98种番茄种质材料抗病基因型进行了初步鉴定,筛选出抗灰叶斑病纯合基因型材料25种、抗颈腐根腐病纯合基因型材料54种。利用同时检测两种抗病基因的双重PCR技术体系,进一步筛选获得14种兼抗灰叶斑病和颈腐根腐病的抗病纯合基因型材料、24种兼抗根结线虫病和颈腐根腐病的抗病纯合基因型材料以及7种兼抗灰叶斑病、根结线虫病和颈腐根腐病三种病害的抗病纯合基因型材料。建立的灰叶斑病和颈腐根腐病抗病基因分子标记,以及同时检测两种抗病基因的双重PCR技术体系,为今后番茄抗病育种工作提供了技术支撑。筛选获得的抗病种质资源材料为进一步培育多抗、优质的番茄新品种奠定了坚实的物质基础。

关键词：番茄灰叶斑病颈腐根腐病分子标记多重PCR 抗病种质筛选

白及属植物抗锈病和根腐病种质筛选及园林应用

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白及属植物抗锈病和根腐病种质筛选及园林应用

作者：马晓雅桂林理工大学

学位级别：硕士

白及(Bletilla striata)是集多用途于一身的兰科(Orchidaceae)多年生草本植物,花色丰富、姿态秀丽,具有很高的观赏价值,也是中国传统的中药材植物,还具有很多工业用途。近年来,白及锈病、根腐病等病害的发生,严重影响其在园林中的观赏效... 详细信息

白及(Bletilla striata)是集多用途于一身的兰科(Orchidaceae)多年生草本植物,花色丰富、姿态秀丽,具有很高的观赏价值,也是中国传统的中药材植物,还具有很多工业用途。近年来,白及锈病、根腐病等病害的发生,严重影响其在园林中的观赏效果,也危害了药材产量和品质。为了筛选出抗病性强及观赏性强的优良种质,也为园林应用及规模化种植提供科学依据。本研究基于白及属27份资源,对锈病和根腐病病原菌进行分离和鉴定,并对其进行资源抗病性评价和种质筛选;最后对白及属植物开展了园林应用综合评价,分析其园林应用前景。主要研究结果如下:(1)通过对白及属锈病和根腐病进行病原菌分离、形态学和分子生物学鉴定,明确了根腐病病原菌为附球菌属高粱附球菌(Epicoccum sorghinum),锈病病原菌为白及鞘锈菌(Coleosporium bletilla)。(2)对白及属植物进行抗锈病和根腐病种质资源评价与筛选。对27份白及属植物进行锈病田间抗性评价,发现来自云南红河的白及能够完全免疫,筛选出贵州遵义白及等5份高抗种源;对17份白及属植物进行根腐病室内抗性评价,筛选出广西恭城白花白及等3份高抗种源。综合得出,来自湖北宜昌的白及和广西恭城的白花白及对锈病和根腐病均表现为高抗。(3)白及属植物园林应用综合评价及园林应用潜力分析。运用层次分析法对27份白及属植物进行综合评价,筛选出湖北宜昌白及等11份观赏性优良且适应性良好的种源。再结合白及属抗病性评价结果,来自湖北宜昌的白及综合表现最佳,其次是来自广西恭城的白花白及。最后根据白及属植物栽培特性、抗病性和观赏价值,分析了白及属不同场景下的应用形式,如园林花境、社区公园、景观绿化带、庭院等。

关键词：白及属病原鉴定抗病种质筛选锈病根腐病园林应用评价

小麦条绣病新抗源筛选和四川盆地条绣菌冬繁区小麦品种抗条绣性评价

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小麦条绣病新抗源筛选和四川盆地条绣菌冬繁区小麦品种抗条绣性评...

作者：张培禹西北农林科技大学

学位级别：硕士

小麦条锈病是危害我国小麦生产的主要病害，其在中国具有大区流行和周年循环的特点。实践证明，应用抗病品种是防控条锈病的最有效手段。所以，为抗病育种工作储备充足的抗源材料与了解当前中国小麦条锈菌重点流行区域小麦栽培品种抗条... 详细信息

小麦条锈病是危害我国小麦生产的主要病害，其在中国具有大区流行和周年循环的特点。实践证明，应用抗病品种是防控条锈病的最有效手段。所以，为抗病育种工作储备充足的抗源材料与了解当前中国小麦条锈菌重点流行区域小麦栽培品种抗条锈病性，均对我国的条锈病防治工作具有重要意义。建立高效抗源筛选和评价体系，寻找新抗源是当前小麦抗条锈病育种工作中亟待解决的问题。针对1980份尚未大量应用于我国小麦生产的地方品种和国外种质，在杨凌人工混合小种圃和天水自然诱发圃中连续三年进行成株期抗病性筛选，利用苗期分小种抗谱鉴定，同时以已知抗条锈病基因Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18和Yr26的分子标记对进行Yr基因筛查，综合分析、评价抗源的抗病性及其可能携带的抗病基因。筛选出8份具有全生育期抗性和42份具成株期抗性的小麦条锈病抗源。结合抗病表现和已知Yr基因分子检测分析表明：50份抗病材料中有6份材料可能带有Yr9;2份材料可能带有Yr10;21份材料可能带有Yr18;未发现携带Yr5、Yr15和Yr26基因的抗源;其中，2个全生育期抗源品冬34和青春39以及13个具有成株期广谱抗性的新抗源，可能携带未发掘的抗条锈病新基因。研究建立了小麦条锈病抗源筛选和评价体系，分别筛选出多个可能携带抗条锈病新基因的全生育期抗性材料和成株期广谱抗性抗源材料。四川盆地是中国小麦条锈菌最重要的冬繁区，明确该区域小麦品种抗条锈性水平和抗病基因分布对于全国小麦条锈病防控具有重要意义。对67份四川小麦品种，其中23份为当前主栽品种，进行了苗期分小种和成株期混合小种抗条锈病性鉴定，并综合运用分子标记、抗谱分析和系谱追踪技术对供试材料携带Yr26相关基因的情况作出分析。结果显示，供试品种中10份具全生育期抗性;22份具成株期抗性;35份表现为感病;逾六成主栽品种在试验中丧失抗性。19份品种可能携带Yr26;7份可能携带Yr26+?基因组合。有27份品种的抗性因对Yr26有毒性的致病类型的出现而下降;对于10份抗性下降的主栽品种，抗性的丧失均与Yr26相关基因的过度利用有关。研究表明四川盆地冬繁区当前小麦栽培品种在对Yr26有毒性的新致病类型出现后，抗条锈性整体水平较低，需要引起有关小麦育种单位和生产管理部门注意。

关键词：小麦条锈病小麦种质资源四川盆地冬繁区抗病种质筛选基因检测

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白菜黄萎病抗性分子鉴定技术的研究

白菜黄萎病抗性分子鉴定技术的研究

作者：陈娟南京农业大学

学位级别：硕士

大白菜(Brassica rapa L. ssp. pekinensis)原产于中国,是我国栽培面积最大的蔬菜种类,目前已逐渐成为世界性蔬菜作物。据农业部统计,每年我国大白菜种植面积约267万公顷,占全国蔬菜总播种面积的15%左右,可见大白菜对我国蔬菜供应和农... 详细信息

大白菜(Brassica rapa L. ssp. pekinensis)原产于中国,是我国栽培面积最大的蔬菜种类,目前已逐渐成为世界性蔬菜作物。据农业部统计,每年我国大白菜种植面积约267万公顷,占全国蔬菜总播种面积的15%左右,可见大白菜对我国蔬菜供应和农民增收具有重要作用。近年来,大白菜黄萎病相继在北京、河北张家口、甘肃永登、云南通海等大白菜育种基地及规模化种植基地爆发,并迅速向周边地区扩散,大白菜黄萎病已成为这些地区最为严重的病害之一。抗病品种的种植对大白菜安全生产具有重要意义。因此,黄萎病抗病品种的选育现已成为大白菜育种的主要目标之一。前期研究的结果已初步确定大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是引起大白菜黄萎病的病原菌,为进一步明确病原菌类型,本研究利用18S rDNA I型内含子、线粒体SSU rDNA和细胞色素b基因序列对实验室保存的3个病原菌分离物进行了分子鉴定;并以4个对黄萎病具有明显抗性差异的大白菜自交系为材料,研究了接种黄萎病菌后植株病症、叶面积和叶绿素含量等的变化;采用荧光定量PCR技术,通过优化反应体系,建立了大白菜黄萎病抗性的分子诊断技术。主要研究结果如下：1.对本实验室保存的BCHW10-2、BCHW8-35和BCHWJ-15三个黄萎病株分离物的18S rDNA I型内含子、线粒体SSU rDNA和色素b基因序列进行分析,进一步确认这3个病原菌分离物属于大丽轮枝菌,长孢类型(Verticillium dahliae var. longisporum).2.对黄萎病具有明显抗性差异的4个自交系接种病原菌后,进行病害症状观察,对叶片鲜重、叶绿素和类胡萝卜含量等生理指标进行测定,发现感病植株出现明显的矮化和叶片黄化现象;与清水处理的对照植株相比,抗病和易感病品种的叶面积、叶片鲜重、叶绿素含量等都出现不同程度的下降,但感病品种下降的幅度明显大于抗病品种;利用碱性品红对接种后的叶片染色观察发现,抗病品种中,品红能够沿维管束对整个叶片进行染色;而对感病品种,品红不能沿维管束布满整个叶片,因此推测接种后感病品种维管束遭破坏程度比抗病品种严重。3.利用病原菌的rDNA-ITS序列,设计合成了能对植株器官中的病原菌进行特异性扩增的引物HW1;通过优化反应体系,利用qRT-PCR对黄萎病具有明显抗性差异的4个自交系接种后不同时期、不同器官中黄萎病菌进行定量研究。结果显示植株根、茎、叶中病原菌含量与自交系的抗病性呈负相关。从而建立了大白菜黄萎病抗性的定性、定量分子诊断技术,为黄萎病抗病育种奠定了基础。4.利用本研究建立的分子诊断技术,对本课题组的大白菜、小白菜、芜菁共254份核心育种材料进行了抗黄萎病种质资源筛选,共筛选出88份高抗(HR)、109份抗病(R)及12份中抗(M)材料。

关键词：大白菜分子鉴定 qRT-PCR检测抗病种质筛选黄萎病

油菜抗根肿病种质的创制及相关抗病基因的定位分析

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油菜抗根肿病种质的创制及相关抗病基因的定位分析

作者：梁峰豪西北农林科技大学

学位级别：硕士

根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassica Wor.)引起的土传性真菌病害。目前已经在世界60多个国家都有发生,每年对十字花科作物平均造成10%-15%的减产,致使根肿病成为制约十字花科作物生产的主要因素之一。甘蓝型油菜(Brassica na... 详细信息

根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassica Wor.)引起的土传性真菌病害。目前已经在世界60多个国家都有发生,每年对十字花科作物平均造成10%-15%的减产,致使根肿病成为制约十字花科作物生产的主要因素之一。甘蓝型油菜(Brassica napus L.)是世界上种植面积最广的油料作物,也是我国目前主要种植的油菜类型,具有产量高、抗病虫、抗逆性强等优点,但是甘蓝型油菜又大多不抗根肿病,造成根肿病在我国的发病面积逐年增加,成为我国油菜生产的主要病害。目前研究者认为,培育抗根肿病的品种并加以推广是解决油菜根肿病的最有效的途径,所以筛选抗根肿病种质资源、合成抗病种质、挖掘抗病基因就显得尤为重要。本研究主要从抗根肿病材料的筛选、根肿病相关抗性生理生化指标的分析、抗根肿病种质资源的创制以及相关抗病基因的定位四个方向研究。1.前期用来自四川成都的根肿菌4号生理小种,采用灌根法对40份芸薹属供试材料进行抗性鉴定,并对供试材料进行抗性显著性分析、病情指数分析、发病率与病情指数相关性分析,结果发现不同种质之间抗病性呈显著性差异;聚类分析将40份材料划分为高抗、中感、感病、高感4个抗性类型;发病率与病情指数两者之间具有显著相关性(P筛选出了10份高抗材料,包括3份白菜、1份甘蓝、3份欧洲芜菁、1份芥菜型油菜、1份萝卜、1份埃塞俄比亚芥,这为后续工作提供基础材料。2.以前期筛选的19份感病甘蓝型油菜为试验材料,将未接菌作为对照,从与抗病性相关的相对含水量、丙二醛含量、可溶性糖以及细胞膜相对透性四个生理指标进行分析。结果发现相对含水量、丙二醛含量及可溶性糖在接菌后未表现出明显差异,而植株在根肿菌胁迫下,细胞膜相对透性上升,并表现为显著性差异。所以,可以将细胞膜的相对透性做为前期筛选抗根肿病的生理辅助指标。3.以高感的甘蓝型油菜骨干亲本Xu09作为母本,以抗病的Debra(欧洲芜菁)为父本,通过远缘杂交获得了3颗杂交种子。通过形态学鉴定、SSR分子标记鉴定及抗性接种鉴定三种鉴定法对远缘杂交获得的种子进行真假杂种鉴定,结果显示所获得3颗种子均为真杂种,它们将会作为根肿病抗性育种的过渡“桥梁材料”。4.以甘蓝型油菜抗病不育系为母本与甘蓝型油菜感病恢复系作杂交,正常田间管理,成熟后获得杂种F代。对回交转育获得的F用根肿菌4号生理小种进行抗性鉴定,结果抗性分级整体为感病,抗感分离比约为2:1。对获得抗性单株,继续授以甘蓝型油菜花粉,获得BC群体,用以后续研究。5.通过搜集查找已发表的与白菜抗根肿病基因紧密连锁的10个分子标记,对前期本实验室和他人筛选的15份抗感材料进行PCR扩增,初步筛选抗性材料中抗性基因。结果显示可能含有CRa、CRb、CRc、CRk、Crr1、Crr2和Crr3基因的材料分别有15份、3份、4份、4份、6份、5份和14份。其中白菜根抗518在CRa、CRb、CRc、Crr1、Crr2和Crr3位点均能扩增出多态性条带。6.以芥菜型油菜陕北黄芥(感病)与CT19(抗病)以及产生的F代为试验材料,根据前期预测的基因,共设计24对IP引物,最终获得的5个有差异IP引物。利用其中的多态性的IP引物IP09-4对29份F群体扫描,结果发现部分抗性标记扫描结果不能与抗性鉴定结果相对应。这说明控制该群体抗根肿病的主效基因可能不在这区域内。7.对70份芥菜型油菜陕北黄芥与CT19的F群体(41份抗病、29份感病)采用简化基因组测序方法对根肿病抗性基因进行定位。根据获得的SNP/InDel标记的信息,计算不同基因型间的频率差异,预测基因所在区域。结果显示在A03染色体的29.3-40.7Mb区间存在一个显著QTL位点,该区域将会作为本研究的候选区域。

关键词：根肿病抗病种质筛选抗病种质创制抗病基因定位