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微生物学报 2023年第10期63卷 3967-3986页

作者：龚高芬窦峥嵘周国军丁佳洁申晓春陈晓洁姜北王开玲云南省滇西抗病原植物资源筛选重点实验室(培育) 云南大理671000 大理大学药物研究所云南大理671000

滇西北高寒地区分布着丰富的黄芪属植物资源,该属植物“根际效应”明显,其根际微生物极具抗菌药用资源研究价值。【目的】认知滇西北高寒特境中甸黄芪根际微生物的物种多样性,探究其可培养菌株次生代谢产物的化学多样性及抗菌、抗生物... 详细信息

滇西北高寒地区分布着丰富的黄芪属植物资源,该属植物“根际效应”明显,其根际微生物极具抗菌药用资源研究价值。【目的】认知滇西北高寒特境中甸黄芪根际微生物的物种多样性,探究其可培养菌株次生代谢产物的化学多样性及抗菌、抗生物膜活性。【方法】采用宏基因组和微生物纯培养方法对中甸黄芪植物根际微生物进行物种多样性分析,同时采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)、超高效液相色谱-质谱联用法(ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)结合“微量肉汤稀释法”“孔板法”等多级联合筛选策略综合评估可培养菌株的抗菌活性药源研究价值。【结果】对中甸黄芪根际土壤样本的微生物分类操作单元(operational taxonomic units,OTU)进行分类注释,得到22门54纲105目187科316属856种微生物,其中优势菌群为慢生根瘤菌属。纯培养共获得27属54种95株可培养菌株,包括20属33种54株细菌和7属21种41株真菌,优势属分别为芽孢杆菌属和青霉属。其中,1株细菌Pseudomonas tolaasii ZTB4和3株真菌Aspergillus tabacinus ZNF17、Lecanicillium aphanocladii ZNF15、Umbelopsis nana ZTF31的次生代谢产物具有广谱抗菌活性。同时,菌株ZTB4和ZNF17的次生代谢产物也显示出优秀的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜活性,并已验证这2株菌株的主要活性成分分别为环脂肽类与黄酮类。【结论】中甸黄芪植物根际微生物物种多样性较为丰富,其可培养菌株次生代谢产物有较好的化学多样性和抗菌、抗生物膜活性。研究结果为我国特境特色微生物药用资源的开发利用提供理论依据。

关键词：高寒特殊生境中甸黄芪根际微生物抗生物膜活性托拉斯假单胞菌烟草曲霉

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50种中药甲醇提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌及抗生物膜活性的评价

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药物评价研究 2023年第1期46卷 64-71页

作者：傅钰瑛陈小萌 Srinivasan Ramanathan 李珍刘柱林向民福建船政交通职业学院安全与环境学院福建福州350007 福建农林大学生命科学学院福建省农业生态过程与安全监控重点实验室福建福州350002 漳州卫生职业技术学院福建漳州363000 海南大学生命与药物学院分子生物实验室海南海口570228

目的评价50种中药甲醇提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌效果以及抗生物膜生成活性。方法采取甲醇浸提的方法制备中药甲醇提取物,计算提取率;利用多功能酶标仪检测600 nm处的吸光度(A600)值测定各提取物(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 m... 详细信息

目的评价50种中药甲醇提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌效果以及抗生物膜生成活性。方法采取甲醇浸提的方法制备中药甲醇提取物,计算提取率;利用多功能酶标仪检测600 nm处的吸光度(A600)值测定各提取物(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg·mL^(-1))作用16 h对嗜水气单胞菌的抑菌率;结晶紫染色法结合多功能酶标仪测定各提取物的抗生物膜活性。结果苏木、白芍、侧柏叶等32种中药甲醇提取物对嗜水气单胞菌抑菌效果明显,其中苏木甲醇提取物的抑菌效果最显著,最大抑菌率达95.56%,起效质量浓度为0.1 mg·mL^(-1);石菖蒲、大青叶、广藿香等20种中药甲醇提取物明显抑制嗜水气单胞菌生物被膜的生成,其中白芍的最大抑制率达96.78%。结论夏枯草、野菊花、大青叶、赤芍、石菖蒲、地肤子、连翘、苏木、肉桂、女贞子、白芍、甘草、肉豆蔻、鸡血藤、乌药、莪术、侧柏叶17种中药对嗜水气单胞菌同时具有抑菌和抑制生物膜生长活性。

关键词：中药嗜水气单胞菌体外抑菌抗菌活性抗生物膜活性苏木白芍

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肺炎克雷伯菌胞外多糖抗生物膜活性研究

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中国感染与化疗杂志 2021年第3期21卷 303-308页

作者：刘姝灵税剑马小华潘建华石国民喻容周前选龙江文易一行向延根南华大学附属长沙中心医院检验科长沙410004

目的探讨肺炎克雷伯菌胞外多糖的抗生物膜活性。方法96孔板筛选分泌具有抗表皮葡萄球菌生物膜活性物质的肺炎克雷伯菌菌株;煮沸法、酶处理法、高碘酸钠氧化法分析抗生物膜活性物质的化学性质;乙醇法粗提胞外多糖,浓硫酸-苯酚法测定肺炎... 详细信息

目的探讨肺炎克雷伯菌胞外多糖的抗生物膜活性。方法96孔板筛选分泌具有抗表皮葡萄球菌生物膜活性物质的肺炎克雷伯菌菌株;煮沸法、酶处理法、高碘酸钠氧化法分析抗生物膜活性物质的化学性质;乙醇法粗提胞外多糖,浓硫酸-苯酚法测定肺炎克雷伯菌胞外多糖含量,稀释法探索抗生物膜活性是否具有浓度依赖性;结晶紫染色法检测肺炎克雷伯菌胞外多糖的广谱抗生物膜活性。结果20株肺炎克雷伯菌临床菌株上清液对表皮葡萄球菌ATCC 35984生物膜具有不同程度的抑制,抑制率为16.1%~73.5%;上清液中抗生物膜的活性物质为多糖;生物膜抑制率为73.5%,菌株粗提多糖含量为200.1 mg/L,此菌株胞外多糖对表皮葡萄球菌生物膜的抑制作用具有浓度依赖性;该多糖对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌临床菌株生物膜具有显著抑制作用(P生物膜活性的肺炎克雷伯菌胞外多糖,该多糖抑制生物膜的效果具有浓度依赖性。

关键词：肺炎克雷伯菌胞外多糖抗生物膜活性

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Feleucin-K3抗菌肽不同位点引入α-（4-戊烯）-丙氨酸的设计改造及活性研究

Feleucin-K3抗菌肽不同位点引入α-（4-戊烯）-丙氨酸的设计改造...

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作者：闫甜甜兰州大学

学位级别：硕士

抗生素被认为是人类医学史上最伟大的成就之一,但是由于人们长期不规范使用甚至是滥用,已造成了不可逆转的细菌耐药危机,尤其是“ESKAPE”超级细菌的出现及广泛传播,使得细菌耐药问题日益严峻。当前,几乎所有的抗生素都对这些超级细菌... 详细信息

抗生素被认为是人类医学史上最伟大的成就之一,但是由于人们长期不规范使用甚至是滥用,已造成了不可逆转的细菌耐药危机,尤其是“ESKAPE”超级细菌的出现及广泛传播,使得细菌耐药问题日益严峻。当前,几乎所有的抗生素都对这些超级细菌失去疗效,使其成为临床细菌感染治疗中最大的一项难题,而解决这一难题最有效的突破口就是研制新型抗菌药物。抗菌肽由于其广谱的抗菌活性、独特的作用机制及低耐药倾向为人们寻找理想的抗菌药物开辟了新的领域。抗菌肽来源广泛,两栖类动物皮肤分泌物是其重要的资源宝库。Feleucin-K3抗菌肽(FLKLLKKLL-NH)是东方铃蟾皮肤分泌的一种两亲性阳离子短肽,序列构成简单并具有广谱抗菌活性,是抗菌肽药物开发的理想模板。经课题组前期研究发现,化学合成的Feleucin-K3抗菌肽对临床常见细菌的标准菌株及耐药菌株显示出良好的抗菌活性,但其具有天然抗菌肽共有的酶解稳定性差及系统毒性的缺陷。为了提高Feleucin-K3抗菌肽的成药性,课题组在前期的研究改造中,将α-(4-戊烯)-丙氨酸这一非天然氨基酸引入该肽链的第4位点,显著改善了亲本肽的抗菌活性及稳定性,并在抗菌浓度范围内降低了其溶血活性。鉴于α-(4-戊烯)-丙氨酸的引入对Feleucin-K3抗菌肽生物学活性的提升具有有效性,本课题通过氨基酸删减及替换策略,将其引入该肽链的不同位点,意图探究删减或替换原位点氨基酸残基对Feleucin-K3抗菌肽抗菌活性、毒性及稳定性的影响。通过体外活性筛选发现,经α-(4-戊烯)-丙氨酸替换所得的类似物对受试菌株(标准菌株及耐药菌株)均显示出较好的抗菌活性(MIC=4-8μg/m L),而经氨基酸删减策略合成的类似物抗菌活性显著下降。接着,本课题对替换合成的类似物进行了溶血活性及稳定性的评价,发现N-末端替换合成的类似物K65及C-末端替换合成的类似物K70具有较低的溶血活性(浓度为128μg/m L的K65和K70溶血率分别为31.6%和0.99%),并且两者在血清中的酶解抗性显著提升(与血清孵育8 h后,K65和K70的残留量分别为56.36%和40.6%)。综合抗菌及溶血活性实验结果,本课题筛选出了具有良好抗菌活性及较低溶血活性的两个类似物K65和K70,并对两者进行了诱导耐药及体内外抗生物膜活性的研究。诱导耐药实验结果显示,K65和K70类似物比对照抗生素呈现出明显降低的耐药发生率。抗生物膜活性结果表明,K65与K70在体外对细菌生物膜的形成具有显著的抑制效果;在体内小鼠背部导管生物膜感染模型中,两个类似物也显示出较强的抑制生物膜形成的能力,并且对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的抑制能力强于高浓度的对照药物阿莫西林。最后,本课题对两个类似物的抗菌机制进行了初步探索,结果显示,K65和K70类似物主要通过与细菌细胞膜相互作用,破坏细胞膜的完整性,导致内容物外泄的方式杀灭细菌。综上所述,本课题通过氨基酸删减及非天然氨基酸替换策略,将α-(4-戊烯)-丙氨酸引入Feleucin-K3抗菌肽的不同位点,设计获得一系列类似物,通过对类似物抗菌活性、溶血活性及稳定性进行评价,成功筛选出具有高效、低毒且稳定性得以提升的类似物K65和K70,且两者不易产生耐药,在体内外均显示出良好的抗生物膜活性,并对抗菌机制进行了研究。本研究为后续Feleucin-K3抗菌肽的进一步修饰改造提供了理论与实验依据,为最终研发用于治疗耐药菌感染的肽类抗菌先导化合物提供了研究基础。

关键词： Feleucin-K3抗菌肽 α-(4-戊烯)-丙氨酸抗菌活性抗生物膜活性膜渗透机制

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酶解酪蛋白酸钠负载丹参酮ⅡA纳米制剂的构建与性能研究

酶解酪蛋白酸钠负载丹参酮ⅡA纳米制剂的构建与性能研究

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作者：张家奇北京化工大学

学位级别：硕士

近年来,植物来源的生物活性化合物因优异的抗氧化、抗炎、抗癌和免疫调节活性而受到广泛关注。在这些活性化合物中,丹参酮IIA(TanshinoneⅡA,TA)因卓越的抗炎、杀菌、抗肿瘤、抗氧化、抗心脑血管疾病、抗骨质疏松等活性,成为非常具有研... 详细信息

近年来,植物来源的生物活性化合物因优异的抗氧化、抗炎、抗癌和免疫调节活性而受到广泛关注。在这些活性化合物中,丹参酮IIA(TanshinoneⅡA,TA)因卓越的抗炎、杀菌、抗肿瘤、抗氧化、抗心脑血管疾病、抗骨质疏松等活性,成为非常具有研究价值的活性成分。目前,TA的临床应用严重受到其理化性质的限制,TA在水中的溶解性很低,导致其口服生物利用度和绝对生物利用性极差(活性。本课题主要以酪蛋白酸钠(NaCas)及其酶解产物作为纳米蛋白载体,用于增强疏水活性物质的理化性质和生物活性,弥补TA在临床应用中的不足。通过对制备纳米颗粒的研究,希望为蛋白药物载体的创新做出一定贡献。包含的工作内容如下:1.选用目标酶对NaCas进行酶解处理,得到酶水解NaCas(Eh NaCas),优化条件为温度50℃,胰蛋白酶:NaCas=1:60(w/w),反应6 h。之后对Eh NaCas进行了SDS-PAGE、DLS分析、蛋白表面疏水性和酶解程度等表征实验,表明Eh NaCas分子量较小、亲水性较好、酶解程度较高。***通过自组装法与Eh NaCas的疏水区域结合,制备出负载TA的Eh NaCas纳米颗粒(Eh NaCas@TA),在37℃、Eh NaCas:TA=30:1(w/w)时,Eh NaCas对TA有较高的包封率。TEM、FT-IR、XRD等结果证实了TA被Eh NaCas疏水区域成功捕获;DLS,溶解性,稳定性(常温放置,高温,光照和p H)结果显示Eh NaCas@TA粒子尺寸小,溶解程度高,溶液稳定性高;抗氧化实验结果显示,Eh NaCas与TA可以表现出协同抗氧化作用。*** NaCas@TA可以影响变异链球菌(***)的生长,具有更低的MIC,MBC值;CLSM实验结果说明Eh NaCas@TA破坏了细菌细胞膜,诱导了细菌死亡。结晶紫生物膜染色,FESEM实验结果表明Eh NaCas@TA可以破坏生物膜结构,抑制生物膜形成;细菌表面疏水性,聚集性和糖酵解活性实验显示Eh NaCas@TA通过影响***生物膜组成机制来限制其形成。

关键词：酪蛋白酸钠酶水解酪蛋白酸钠丹参酮ⅡA 自组装法水溶性抗氧化活性抗生物膜活性

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具有寡聚性的新型dermaseptin家族抗菌肽的结构鉴定及抗菌机制研究

具有寡聚性的新型dermaseptin家族抗菌肽的结构鉴定及抗菌机制研究

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作者：宋昕宇温州大学

学位级别：硕士

自青霉素发现以来,细菌感染不再是一种不治之症。但随着抗生素滥用,耐药细菌逐渐出现,导致临床治疗难度加大且治疗耐药菌感染药物选择大幅减少。因此,新的抗生素候选药物的发现和临床应用迫在眉睫。抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs... 详细信息

自青霉素发现以来,细菌感染不再是一种不治之症。但随着抗生素滥用,耐药细菌逐渐出现,导致临床治疗难度加大且治疗耐药菌感染药物选择大幅减少。因此,新的抗生素候选药物的发现和临床应用迫在眉睫。抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs,又名抗微生物肽）是一种极具潜力的抗菌活性物质,一般由基因编码、核糖体合成,主要由宿主防御系统的先天免疫产生,是先天免疫的重要效应分子。天然抗菌肽具有广谱抗菌作用,尤其是对多重耐药菌具有强效抗菌效果,同时可以调节宿主免疫系统,中和感染进一步引起的炎症反应。因此,抗菌肽已成为人们研究的热点,开发利用抗菌肽有望成为人类摆脱“耐药菌危机”的新策略。本研究利用分子克隆技术,通过与NCBI数据库的比对,获得了基因的一级结构和同源性,进一步采用质谱法确证序列的一级结构以及翻译后修饰。此外,通过计算机模拟预测肽序列的理化性质,并通过圆二色谱性及计算机模拟确定其二级结构。结果表明,我们发现了一种新的具有碳端酰胺化修饰的保守的dermaseptin家族的天然抗菌肽,命名为dermaseptin-PS2（DMS-PS2）。DMS-PS2的二级结构是典型的α-螺旋结构,带有4个阳离子净电荷,疏水性为37.4%。研究报道部分dermaseptin家族抗菌肽具有抗菌活性,因此本研究采用肉汤稀释法测定DMS-PS2的抗菌活性及抗细菌生物膜活性,并且采用新鲜鼠血共孵育评价DMS-PS2的细胞毒性。此外采用小鼠表皮感染模型进一步评价其体内抗菌活性。结果表明,虽然DMS-PS2在实验中表现出一定的溶血性,但由于其在体内具有较高的治疗指标和良好的治疗活性,DMS-PS2有可能成为下一代抗生素的先导药物。目前天然抗菌肽的作用机制有很多假说。本研究采用荧光染色和扫描电镜观察DMS-PS2的作用。经DMS-PS2处理后,细菌细胞膜完整性受损,导致细菌死亡。另外,通过动态光散射测量粒径变化、原子力显微镜和计算机软件辅助模拟来检测DMS-PS2的聚集。DMS-PS2在生理条件下可以自聚合,而球形DMS-PS2低聚物具有明显的抗菌活性。

关键词：耐药性细菌抗菌肽(AMPs) DMS-PS2 广谱抗菌活性抗生物膜活性细胞膜自聚

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基于芽孢杆菌胞外多糖的银纳米颗粒合成及其生物活性研究

基于芽孢杆菌胞外多糖的银纳米颗粒合成及其生物活性研究

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中国食品科学技术学会第二十届年会

作者：檀茜倩邢芷琪王晓晴崔方超李学鹏励建荣渤海大学食品科学与工程学院海洋研究院

本研究利用解淀粉芽孢杆菌Y11 (Bacillus amyloliquefaciens Y11)胞外多糖合成纳米银颗粒(Ag nanoparticles,AgNPs),探索了合成最佳反应条件,并对合成后银纳米颗粒(Y11 EPS-AgNPs)的理化性质和生物活性进行了研究。结果表明,***胞外多... 详细信息

本研究利用解淀粉芽孢杆菌Y11 (Bacillus amyloliquefaciens Y11)胞外多糖合成纳米银颗粒(Ag nanoparticles,AgNPs),探索了合成最佳反应条件,并对合成后银纳米颗粒(Y11 EPS-AgNPs)的理化性质和生物活性进行了研究。结果表明,***胞外多糖浓度为2.5 mg/mL,硝酸银溶液浓度为10 mM,pH12为合成的最佳条件;所合成的Y1 1 EPS-AgNPs为球形、带负电、单分散性良好,颗粒尺寸在40～50 nm之间;抑菌实验表明,其对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、不动杆菌、腐生葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌以及蜂房哈夫尼菌均具有不同程度抑制作用,对腐生葡萄球菌的抑制率最高,产生的抑菌圈直径为13.589±0.174 mm,可抑制和清除蜂房哈夫尼菌生物被膜,当浓度为50μg/mL时,抑制率最高为58.02%;抗氧化实验表明,其对羟自由基、ABTS、DPPH、以及超氧阴离子也具有不同程度的清除能力,当浓度为500μg/mL时,总还原能力为0.797。说明所合成的Y11EPS-AgNPs具有较好的抑菌性和抗氧化性。

关键词：胞外多糖银纳米颗粒解淀粉芽孢杆菌抑菌特性抗氧化活性抗生物膜活性

来源： cnki会议评论

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