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抗氧化反应元件调控的EGFP在HepG2细胞中的表达

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现代肿瘤医学 2013年第5期21卷 984-987页

作者：徐海荣汪步海武文娟戴尔峋刘丽琴焦寒凝张西志扬州大学临床医学院放疗中心江苏扬州225001

目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系。方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并... 详细信息

目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系。方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养。结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带。DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确。转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系。结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达。为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础。

关键词：抗氧化反应元件增强绿色荧光蛋白 Ⅱ相酶基因重组

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中国康复理论与实践 2020年第3期26卷 330-333页

作者：苏玲玲郑碧娥何进娣范建中尹瑞雪南方医科大学南方医院康复医学科广东广州市510515

多发性硬化(MS)是一种慢性炎症性疾病,主要是由T淋巴细胞引起,可使中枢神经系统产生氧化应激反应,导致脱髓鞘等病理改变。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)抗氧化应激通路是体内最重要... 详细信息

多发性硬化(MS)是一种慢性炎症性疾病,主要是由T淋巴细胞引起,可使中枢神经系统产生氧化应激反应,导致脱髓鞘等病理改变。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)抗氧化应激通路是体内最重要的内源性抗氧化应激通路,激活该通路可启动下游解毒酶、抗氧化蛋白,参与清除氧自由基,维持细胞内氧化还原系统平衡,从而对神经退行性疾病起保护作用。通过药物或各种康复治疗手段激活该Keap1-Nrf2/ARE通路,减轻MS疾病进展的作用及未来MS治疗靶点是目前研究热点。

关键词：多发性硬化氧化应激 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 核因子E2相关因子2 抗氧化反应元件信号通路综述

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新中医 2022年第21期54卷 1-6页

作者：李瑛梁舒蔡世宏台州市中心医院(台州学院附属医院) 浙江台州318000

目的:基于核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件信号通路探讨姜黄素减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤的效果。方法:将60只清洁级Wistar老龄大鼠分成3组。对照组、模型组每天腹腔注射0.9%氯化钠(3 mL/kg),姜黄素组每天腹腔注射姜黄素... 详细信息

目的:基于核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件信号通路探讨姜黄素减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤的效果。方法:将60只清洁级Wistar老龄大鼠分成3组。对照组、模型组每天腹腔注射0.9%氯化钠(3 mL/kg),姜黄素组每天腹腔注射姜黄素,持续7 d。模型组、姜黄素组大鼠于第7天注射相应药物60 min后建立肺缺血再灌注模型;随后获取肺组织,测定肺/体质量比值及肺损伤评分,并测定肺组织中Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA、蛋白表达水平及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:与对照组比较,模型组肺/体质量比值、肺损伤评分、肺组织Nrf2 mRNA、蛋白表达水平及MDA、IL-6、NO、TNF-α、IL-2表达水平升高(P抗氧化途径,使炎症因子与氧化应激产物水平下降,以此对老龄大鼠肺缺血再灌注损伤起保护作用。

关键词：肺缺血再灌注损伤姜黄素核转录因子E2相关因子2 抗氧化反应元件动物实验老龄大鼠

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基于抗氧化反应元件的转基因细胞模型的建立

生物医学工程学杂志 2010年第3期27卷 631-635页

作者：徐海荣卜平李湘鸣扬州大学医学院中西医结合研究所扬州225001

建立基于抗氧化反应元件(ARE)调控的GFP报告基因细胞模型。首先用PCR法扩增TK基本启动子克隆到pEGFP-N1上,构建pTK-GFP/Neo报告载体,再将人工合成的4个ARE重复序列依次插入到pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游,构建成ARE调控的真核报告载体... 详细信息

建立基于抗氧化反应元件(ARE)调控的GFP报告基因细胞模型。首先用PCR法扩增TK基本启动子克隆到pEGFP-N1上,构建pTK-GFP/Neo报告载体,再将人工合成的4个ARE重复序列依次插入到pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游,构建成ARE调控的真核报告载体p4ARE-TK-GFP/Neo,将该载体用脂质体转染法转染人HepG2肝癌细胞,经G418筛选,获得阳性克隆。扩增后经Ⅱ相代谢酶诱导物PDTC和tBHQ实验验证。结果表明:细胞发光度与诱导物有明显剂量效应关系,成功建立了基于抗氧化反应元件的转基因细胞模型。

关键词：抗氧化反应元件绿色荧光蛋白 TK启动子细胞模型

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基于抗氧化反应元件的药物筛选模型的建立

中国药理学通报 2006年第12期22卷 1525-1528页

作者：谢玲黄海潇张浩熊国林邢爽华平从玉文罗庆良军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性... 详细信息

目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性作用的黄酮类化合物。方法构建重组报告基因表达载体pARE-TAL-SEAP与对照载体分别转染HEK-293细胞,检测上述黄酮类化合物作用后对SEAP的活性和抗氧化作用的影响。结果在加入25μmol.L-1H2O2进行氧化损伤的HEK-293细胞中,加入100μmol.L-1的4种化合物进行比较时金雀异黄素的抗氧化作用最强,金雀异黄素诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.3倍;加入25μmol.L-14种化合物的抗氧化作用时茨非醇的抗氧化作用最强,茨非醇诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.5倍。结论利用此模型可以检测H2O2的氧化应激反应并可筛选到抗氧化活性强的黄酮类化合物。

关键词：抗氧化反应元件报告基因药物筛选模型黄酮类化合物

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中国乡村医药 2018年第4期25卷 12-13页

作者：姜黎周珂晶陈其军宁波市鄞州区第二医院眼科 315100 宁波市鄞州区第二医院肾内科 315100

目的探讨激活核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)通路对尿毒症患者角膜内皮细胞功能的影响。方法 2011年1月至2012年6月该院收治的尿毒症患者60例为尿毒症组,选取同期健康体检人员60名为对照组,对比两组角膜内皮细胞形态学指... 详细信息

目的探讨激活核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)通路对尿毒症患者角膜内皮细胞功能的影响。方法 2011年1月至2012年6月该院收治的尿毒症患者60例为尿毒症组,选取同期健康体检人员60名为对照组,对比两组角膜内皮细胞形态学指标,分析激活N r f 2-A R E通路前后患者角膜内皮细胞形态学指标变化。结果激活前尿毒症组患者角膜内皮细胞密度(CD)、六角形细胞的百分数(6A%)及中央角膜厚度(CCF)均明显高于对照组,平均细胞面积(AVE)及细胞面积变异系数(CV)明显低于对照组;激活Nrf2-ARE通路后患者的CD、6A%及CCF明显低于激活前,AVE及CV明显高于激活前,均缩小了与对照组的差距。结论尿毒症患者角膜内皮细胞形态学存在显著变化,激活Nrf2-ARE通路可改善患者角膜内皮细胞功能。

关键词：尿毒症核因子E2相关因子抗氧化反应元件角膜内皮细胞功能

远端缺血预处理对老龄大鼠70％肝切除后核因子E2相关因子2／抗氧化反应元件信号通路的影响

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中华实验外科杂志 2018年第9期35卷 1773-1773页

作者：王猛陈良李斌袁建毛高泉根沈根海苏州市吴江区第一人民医院肝胆外科 215200

我们通过建立大鼠70％肝切除模型，探讨远端缺血预处理对老龄大鼠肝切除后组织损伤的作用及其对核因子E2相关因子2／抗氧化反应元件（Nrf2／ARE）信号通路的影响。一、材料与方法1．实验动物及分组：清洁级雄性SD大鼠（15～16月龄），2... 详细信息

我们通过建立大鼠70％肝切除模型，探讨远端缺血预处理对老龄大鼠肝切除后组织损伤的作用及其对核因子E2相关因子2／抗氧化反应元件（Nrf2／ARE）信号通路的影响。一、材料与方法1．实验动物及分组：清洁级雄性SD大鼠（15～16月龄），27只，体重200～250g。术前12h禁食不禁饮。

关键词：核因子E2相关因子2 抗氧化反应元件缺血预处理肝切除后老龄大鼠信号通路远端组织损伤

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国际麻醉学与复苏杂志 2013年第2期34卷 182-185页

作者：高之心李元海鲁显福安徽医科大学第一附属医院麻醉科合肥230026

背景随着肝脏外科手术尤其是肝脏移植手术的发展，以转录因子NF-E2相关因子2（nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2）与抗氧化反应元件（antioxidantresponseelement，ARE）抗氧化应激系统在肝脏损伤中的作用倍受关注。目的... 详细信息

背景随着肝脏外科手术尤其是肝脏移植手术的发展，以转录因子NF-E2相关因子2（nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2）与抗氧化反应元件（antioxidantresponseelement，ARE）抗氧化应激系统在肝脏损伤中的作用倍受关注。目的分析并总结Nrf2-ARE抗氧化系统在肝脏保护各方面的文献资料。内容简要介绍Nrf2，ARE的结构及其信号路径；综述了Nrf2基因缺失、Nrf2药物激活、Nrf2基因激活3类模型小鼠与野生小鼠肝脏对氧化应激的耐受性比较的结果。趋向Nrf2-ARE信号路径在肝脏中有一定的保护作用，为临床提供了新的思路。

关键词： NF—E2相关因子2 抗氧化反应元件氧化应激肝脏保护

ROS在吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用:与Nrf2-ARE信号通路的关系

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中华麻醉学杂志 2024年第1期44卷 91-96页

作者：周雯静徐鹏陈伟喻田王海英遵义医科大学附属医院麻醉科遵义563000 贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室遵义563000 遵义医科大学麻醉与器官保护教育部重点实验室遵义563000 遵义医科大学第二附属医院重症医学科遵义563000

目的评价ROS在吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路的关系。方法分离、培养成年大鼠心肌细胞,采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R... 详细信息

目的评价ROS在吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路的关系。方法分离、培养成年大鼠心肌细胞,采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、吡那地尔后处理组(P组)和活性氧清除剂N-(2-巯基丙酰基)-甘氨酸(MPG)+吡那地尔后处理组(MPG+P组)。C组持续于37℃95%O2+5%CO_(2)培养箱中持续培养105 min;缺氧复氧损伤模型制备:5%CO_(2)+1%O2+94%N2条件下缺氧45 min,复氧60 min;P组缺氧45 min,吡那地尔50μmol/L处理5 min,复氧60 min;MPG+P组缺氧45 min,MPG 2 mmol/L处理10 min,吡那地尔处理5 min,复氧60 min。于复氧末检测心肌细胞Ca^(2+)含量和Nrf2活性;观察心肌细胞超微结构,并行线粒体Flameng评分;采用Western blot法和RT-PCR法分别检测Nrf2、超氧化物歧化酶1(SOD1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素加氧酶1(HO-1)及其mRNA的表达。结果与C组比较,H/R组心肌细胞Ca^(2+)含量、Nrf2活性和Flameng评分升高,Nrf2、SOD1、NQO1和HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤加重;与H/R组比较,P组心肌细胞Ca^(2+)含量和Flameng评分降低,Nrf2活性升高,Nrf2、SOD1、NQO1和HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤减轻;与P组比较,MPG+P组心肌细胞Ca^(2+)含量和Flameng评分升高,Nrf2活性降低,Nrf2、SOD1、NQO1和HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤加重。结论ROS参与了吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的过程,与激活Nrf2-ARE信号通路有关。

关键词：活性氧吡那地尔缺血后处理肌细胞心脏低氧 NF-E2相关因子2 抗氧化反应元件