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痰样结核杆菌抗原85b mRNA检测在肺结核疗效评价中的应用

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热带医学杂志 2015年第8期15卷 1017-1019,1030页

作者：武学成唐曙明深圳市龙华新区慢性病防治中心检验科广东深圳518110 深圳市人民医院检验科广东深圳518020

目的探讨痰样结核杆菌抗原85b m RNA检测在结核疗效评价中应用。方法比较痰涂片抗酸染色、MTb-IS6110 DNA、改良罗氏培养和MTb-抗原85b m RNA在检测治疗0、2、4、8、12周的结核患者痰液结核杆菌阳性率。结果治疗0周、2周和12周时四种方... 详细信息

目的探讨痰样结核杆菌抗原85b m RNA检测在结核疗效评价中应用。方法比较痰涂片抗酸染色、MTb-IS6110 DNA、改良罗氏培养和MTb-抗原85b m RNA在检测治疗0、2、4、8、12周的结核患者痰液结核杆菌阳性率。结果治疗0周、2周和12周时四种方法检测差异无统计学意义;治疗4周、8周时四种方法阳性率总体差异有统计学意义(χ2=23.167,Pb-IS6110 DNA和改良罗氏培养差异有统计学意义(χ2=17.03,Pb-IS6110 DNA和MTb-抗原85b m RNA之间差异无统计学意义(χ2=2.865,P>0.05;χ2=3.262,P>0.05)。治疗4周时改良罗氏培养和MTb-抗原85b m RNA差异没有统计学意义(χ2=6.377,P>0.05),而治疗8周时差异有统计学意义(χ2=4.97,Pb-IS6110 DNA检测灵敏度最高,可作为初筛,MTb-抗原85b m RNA real-RT-PCR和改良罗氏培养两者一致性较好,且灵敏度和特异性更高,可作为结核病人治疗监测。

关键词：结核杆菌抗原85b mRNA IS6110 DNA

老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素及IFN-γ、sIL-2R、Ag85b水平变化

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中华医院感染学杂志 2024年第9期34卷 1336-1339页

作者：吴秋静史可云胡杰陈芸谢婧徐晓娟宜兴市人民医院老年医学科江苏无锡214200

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并结核分枝杆菌感染的危险因素及对γ-干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、抗原85b(Ag85b)水平的影响。方法选取2018年8月-2023年5月宜兴市人民医院收治的104例老年COPD合并结核分... 详细信息

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并结核分枝杆菌感染的危险因素及对γ-干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、抗原85b(Ag85b)水平的影响。方法选取2018年8月-2023年5月宜兴市人民医院收治的104例老年COPD合并结核分枝杆菌感染患者为研究组,随机选取同期104例单纯COPD患者为对照组,分析老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素,检测两组患者血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85b表达水平。结果多因素Logistic回归分析结果显示,年龄大、吸烟史、粉尘暴露史、吸入糖皮质激素、营养不良均是老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素(OR=1.992、2.092、2.162、1.964、2.132;P85b水平均高于对照组(P85b水平升高,且随结核病变程度加重而上升。

关键词：慢性阻塞性肺疾病结核分枝杆菌 γ-干扰素可溶性白细胞介素-2受体抗原85b

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Ag85b调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

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中国病理生理杂志 2015年第9期31卷 1680-1687页

作者：钱江吴健安弘房祥峰李东风杨士芳孟锦绣高兴林南方医科大学研究生院广东广州510515 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所呼吸内科广东广州510080 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所医学研究中心广东广州510080

目的：研究抗原85b（Ag85b）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85b抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CS... 详细信息

目的：研究抗原85b（Ag85b）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85b抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57bL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85b或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85b或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85b处理组、TSLP处理组和Ag85b＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85b处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85b和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85b处理组和Ag85b＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85b可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85b可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。

关键词：抗原85b 胸腺基质淋巴细胞生成素髓样树突状细胞胸腺基质淋巴细胞生成素受体 OX40L

Ag85b慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

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中国病理生理杂志 2014年第11期30卷 2015-2020页

作者：房祥峰钱江孟锦绣李东风吴健南方医科大学研究生学院广东广州510515 广东省人民医院广东省医学科学院呼吸内科广东广州510080 广东省人民医院广东省医学科学院医学研究中心广东广州510080

目的:研究结核分枝杆菌抗原85b(Ag85b)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHbEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85b抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85b基因重组质粒转入293T... 详细信息

目的:研究结核分枝杆菌抗原85b(Ag85b)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHbEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85b抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85b基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85b和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85b(Ag85b慢病毒)。用鉴定后的Ag85b慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率。利用Lipofectamine? 2000使Ag85b慢病毒感染体外培养NHbEC,设立空病毒感染和空白对照组。Real-time PCR和Western blotting检测Ag85b、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建Ag85b慢病毒感染NHbEC体系,Ag85b慢病毒感染NHbEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×1011TU/L,感染效率达到90%以上。Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85b慢病毒成功感染NHbEC,可见相应Ag85b mRNA和蛋白表达。与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85b慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P85b慢病毒感染NHbEC可以抑制NHbEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85b可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症。

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体慢病毒载体抗原85b 人支气管上皮细胞

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结核杆菌Ag85b的表达纯化

复旦学报（自然科学版） 2002年第1期41卷 113-116页

作者：智刚王宝林季朝能朱琪泉王洪海复旦大学生命科学学院上海200433

为构建抗结核病新型疫苗 ,以结核杆菌标准毒力株H37RvDNA为模板 ,用PCR法克隆抗原 85b的编码基因 .将该基因重组到表达型质粒pQE30中 ,表达的His6Tag Ag85b融合蛋白分子质量约 32ku .用亲和层析一步法纯化的重组蛋白纯度好、得率高。

关键词：结核杆菌抗原85b 基因表达

结核分枝杆菌Ag85b-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力

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第四军医大学学报 2004年第18期25卷 1633-1636页

作者：师长宏范雄林柏银兰薛莹张海徐志凯第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033

目的 :研究Ag85b与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTb感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTb培养上清滤液蛋白 (culturefiltrat... 详细信息

目的 :研究Ag85b与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTb感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTb培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins,CFP)作为抗原 ,ELASA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度 .为了检测融合蛋白免疫小鼠引起的细胞免疫应答 ,最后一次免疫完成后 4wk ,取一部分免疫小鼠分离脾淋巴细胞 ,体外用抗原刺激 ,MTT法检测淋巴细胞刺激反应 ,ELISA检测悬液中IFN γ水平 .另一部分免疫的bALb/c小鼠经尾静脉感染MTb毒株H37Rv ,4wk后计数脾脏细菌负荷数 .结果 :Ag85b ESAT6蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶10 0 0 ,ESAT6 Ag85b蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶5 0 0 0 .融合蛋白Ag85b ESAT6和ESAT6 Ag85b免疫组淋巴细胞刺增殖指数分别为 2 .4 0± 0 .17和 2 .6 0± 0 .2 5 ,而生理盐水组只有 0 .90± 0 .2 1;相对应的IFN γ含量分别为 (3.5 1± 0 .30 ) μg/L和 (4 .0 5± 0 .4 1) μg/L ,显著高与生理盐水对照组 (0 .5 0± 0 .2 5 ) μg/L ,P bCG免疫组 (5 .5 5±0 .31) μg/L .与生理盐水免疫组 (细菌负荷6 .31± 0 .13)相比较 ,融合蛋白免疫的bALb/c小鼠。

关键词：分支杆菌结核疫苗抗原85b ESAT6 重组融合蛋白质类

分泌融合蛋白Ag85b-ESAT-6重组卡介苗在小鼠体内的免疫效应

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中国病原生物学杂志 2009年第5期4卷 333-336页

作者：刘洪波蔡昌学吴少庭甘燕中山市疾病预防控制中心广东中山528403 华中科技大学同济医学院湖北武汉430030 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518020

目的研究分泌融合蛋白Ag85b-ESAT-6重组卡介苗(rbCG)在小鼠体内诱导的免疫效应。方法以2×106CFU的rbCG或bCG皮下接种bALb/c小鼠,免疫后第4、6、8周时用ELISA测定Tb-PPD特异的血清抗体滴度;分离脾淋巴细胞,以流式细胞术测定CD4+和CD8+T... 详细信息

目的研究分泌融合蛋白Ag85b-ESAT-6重组卡介苗(rbCG)在小鼠体内诱导的免疫效应。方法以2×106CFU的rbCG或bCG皮下接种bALb/c小鼠,免疫后第4、6、8周时用ELISA测定Tb-PPD特异的血清抗体滴度;分离脾淋巴细胞,以流式细胞术测定CD4+和CD8+T细胞亚群百分比;Tb-PPD刺激后以MTT法测定淋巴细胞增殖程度,ELISA检测诱生IFN-γ和IL-10水平。结果rbCG和bCG免疫组小鼠血清特异性抗体滴度分别达1∶5 120和1∶2 560,差异有统计学意义(q=3.89,P=0.034)。rbCG组的IFN-γ水平在第8周达最高(597.1 pg/ml),同期bCG组为416.7 pg/ml,差异有统计学意义(q=10.60,PbCG组IL-10水平第4周和第6周时也高于bCG组(PbCG组的淋巴细胞增殖指数都高于bCG组(PbCG组和bCG组CD4+T亚群分别占(71.1±2.6)%和(62.3±2.0)%,差异有统计学意义(q=4.16,P=0.026);CD8+T亚群分别占(35.9±1.7)%和(26.9±2.8)%,差异有统计学意义(q=4.52,P=0.019)。结论融合蛋白Ag85b-ESAT-6引入bCG增强了其抗MTb反应。

关键词：融合蛋白抗原85b ESAT-6 重组卡介苗

结核分支杆菌Ag85b基因真核表达株的构建(英文)

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中国现代医学杂志 2003年第21期13卷 5-7,10页

作者：郑越吴雪琼张俊仙张灵霞冯端浩中国人民解放军309医院结核病研究室北京100091

目的　构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85b编码基因的DNA疫苗。方法　以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板 ,PCR扩增Ag85b编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pVax1中 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行重组子筛选、鉴定。结果　以结核... 详细信息

目的　构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85b编码基因的DNA疫苗。方法　以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板 ,PCR扩增Ag85b编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pVax1中 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行重组子筛选、鉴定。结果　以结核分支杆菌PCR扩增为阳性 ,经限制性内切酶消化后可见目的条带 ,所测定序列与报道的Ag85b序列一致。结论　成功地构建了结核分支杆菌Ag85b基因真核表达株。

关键词：结核分支杆菌抗原85b DNA 疫苗

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抗结核病药物的开发

国外医学（微生物学分册） 2001年第6期24卷 37-38页

作者：谢建平王洪海

抗结核病药物的开发是目前世界各国研究的热点和难点之一.世界主要制药公司如葛蓝素、利莉,主要机构如世界银行、世界卫生组织等都高度重视抗结核病药物的开发.另外,还成立了全球抗结核病药物开发联盟.

关键词：药物开发抗结核病药脂肪酸合成抗原85b