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南京农业大学学报 1997年第1期20卷 68-72页

作者：孙智锋杜念兴徐为燕南京农业大学动物医学院

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一... 详细信息

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定簇，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体抗原识别位点 ELISA

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糖化酶单抗的研制及其抗原识别位点的分析

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中国畜牧兽医 2012年第11期39卷 39-42页

作者：张丹姜威李双喜汪惠泽冯云飞刘云迎李东明何祥来王捍东扬州大学兽医学院江苏省普通高校重点学科内科实验室江苏扬州225009 江苏省常州市出入境检验检疫局江苏常州213022 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链... 详细信息

为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链。Western blotting分析结果表明,12株抗体均可特异性结合糖化酶。其中6株单抗(McAb-2H4F9、6H9D8、8F2F11、8F2E9、1A8G6、1C4D5)细胞株采用体内诱生法制备的腹水效价均1∶1×104以上。采用抗体叠加试验对这6株抗糖化酶单抗的抗原识别位点进行检测,反应增殖结果表明,6株单抗分别针对4类不同抗原位点,McAb-6H9D8和McAb-8F2F11针对第Ⅰ种抗原决定簇;McAb-1A8G6和McAb-1C4D5针对第Ⅱ种抗原决定簇;McAb-8F2E9针对第Ⅲ种抗原决定簇;McAb-2H4F9针对第Ⅳ种抗原决定簇。制备的抗体针对不同的抗原表位,为双抗夹心ELISA方法的建立提供前提。

关键词：淀粉糖化酶单克隆抗体抗原识别位点

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O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原识别位点的初步分析

O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原识别位点的初步分...

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：鲁会军韩松郑敏王凯贾雷立葛淑敏金扩世金宁一军事医学科学院11所

制备针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体,并对其抗原识别位点进行初步分析。应用大肠杆菌表达的O型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫。BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选阳性克隆。获得了ⅠC8、ⅡF9和ⅢF... 详细信息

制备针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体,并对其抗原识别位点进行初步分析。应用大肠杆菌表达的O型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫。BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选阳性克隆。获得了ⅠC8、ⅡF9和ⅢF9三株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA测定,单抗效价范围是:细胞培养上清1:320-1:640,腹水为1:4×105-1:2×106;经ELISA法测定,三种单克隆抗体均与表达抗原反应;在western-blotting试验中,三种单克隆抗体均与大肠杆菌表达的VP1蛋白反应。单抗的亚类鉴定结果表明,ⅠC8分泌的抗体为IgG2b亚类,ⅡF9和ⅢF9分泌的抗体为IgG1亚类。抗原识别位点分析表明,三种单抗识别的抗原位点不尽相同,其中ⅠC8与另外两种单抗识别的抗原位点不同,而ⅡF9和ⅢF9的识别位点相近,且ⅢF9的识别位点在ⅡF9的识别位点之内。

关键词： FMDV O型 VP1蛋白单克隆抗体抗原识别位点

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O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原识别位点的初步分析

O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原识别位点的初步分...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：鲁会军韩松郑敏王凯贾雷立葛淑敏金扩世金宁一军事医学科学院11所

制备针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体,并对其抗原识别位点进行初步分析。应用大肠杆菌表达的O型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选阳性克隆。获得了ⅠC8、ⅡF9和ⅢF9... 详细信息

制备针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体,并对其抗原识别位点进行初步分析。应用大肠杆菌表达的O型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选阳性克隆。获得了ⅠC8、ⅡF9和ⅢF9三株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA测定,单抗效价范围是:细胞培养上清1∶320—1∶640,腹水为1∶4×105—1∶2×106;经ELISA法测定,三种单克隆抗体均与表达抗原反应;在western-blotting试验中,三种单克隆抗体均与大肠杆菌表达的VP1蛋白反应。单抗的亚类鉴定结果表明,ⅠC8分泌的抗体为IgG2b亚类,ⅡF9和ⅢF9分泌的抗体为IgG1亚类。抗原识别位点分析表明,三种单抗识别的抗原位点不尽相同,其中ⅠC8与另外两种单抗识别的抗原位点不同,而ⅡF9和ⅢF9的识别位点相近,且ⅢF9的识别位点在ⅡF9的识别位点之内。

关键词： FMDV O型 VP1蛋白单克隆抗体抗原识别位点

来源： cnki会议评论

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兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 145-149页

作者：刘怀然秦海斌刘家森单安山曲连东东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为建立兔出血症病毒（RHDV）的检测方法及为变异株监测做储备，用蔗糖密度梯度离心法纯化的RHDV免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞进行融合，以昆虫细胞一杆状病毒表达的重组VP60蛋白建立的间接ELISA法筛选抗RHDV单克隆抗体杂交... 详细信息

为建立兔出血症病毒（RHDV）的检测方法及为变异株监测做储备，用蔗糖密度梯度离心法纯化的RHDV免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞进行融合，以昆虫细胞一杆状病毒表达的重组VP60蛋白建立的间接ELISA法筛选抗RHDV单克隆抗体杂交瘤细胞，并对其主要生物学特性进行了鉴定。结果表明，筛选出6株单抗，它们分属于IgG1（AD4，AG10，DE2）、IgG2b（BC9，BE8）和IgM（BH3）亚类；这6株单抗杂交瘤细胞的平均染色体数为87～89条，将其冻存6个月后复苏，在体外传20代的过程中分泌的抗体效价变化不大，具有很好的稳定性；Western-blot及免疫荧光分析表明，单抗DE2、AG10识别线性表位，其余4株单抗识别构象型表位；竞争ELISA试验表明，这6株单抗可识别5种抗原表位。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体抗原识别位点

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基于叠加ELISA方法检测新西兰兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点

基于叠加ELISA方法检测新西兰兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：陶鸽如汪运舟刘贤勇索勋中国农业大学动物医学院

近年来,随着家兔实验动物学价值的日益突出和疫病防控的深入推进,对其拮抗疾病的免疫学检测具有重要意义。单克隆抗体(mAb)以其高度特异性,广泛用于临床医学的疾病诊断。而利用识别同一抗原不同抗原表位的抗体对进行的免疫学检测方法,... 详细信息

近年来,随着家兔实验动物学价值的日益突出和疫病防控的深入推进,对其拮抗疾病的免疫学检测具有重要意义。单克隆抗体(mAb)以其高度特异性,广泛用于临床医学的疾病诊断。而利用识别同一抗原不同抗原表位的抗体对进行的免疫学检测方法,还具有灵敏度高等特点。叠加ELISA可在一次试验中分析多个单克隆抗体对抗原位点的特异性,而无需将抗体进行标记偶联。本研究基于叠加ELISA方法,对获得的家兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点进行检测,以期获得识别不同抗原表位的单克隆抗体,为后续家兔免疫学研究提检测工具。本研究成功制备了7株家兔IFN-γ单克隆抗体(No.1、8、9、11、23、25、26),选取1号单克隆抗体作为基准,寻找与其识别不同抗原结合位点的单克隆抗体。第一步,以0.5μg/ml家兔IFN-γ重组蛋白包板,将所有单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清由1:50开始倍比稀释,以寻找抗原抗体最佳反应浓度——即OD 450呈现线性关系的抗体稀释倍数。第二步,将0.5μg/ml家兔IFN-γ重组蛋白包板,每孔加入单个或两个不同组合的单克隆抗体,其稀释度均为上述呈线性关系的范围内,且加入的两个单克隆抗体量相等。第三步,将ELISA测定的单个单克隆抗体与组合单克隆抗体的OD450以下述公式计算叠加系数:。在最佳抗原抗体稀释倍数,若两个mAb结合到不同的抗原决定簇时,,;当两个mAb所识别的是相同的抗原位点时,则,。考虑轻微的技术误差,当时即认为这两个单克隆抗体识别不同的抗原位点。实验结果证明:1,所用的单克隆抗体上清在稀释1:400至1:3200时,抗原抗体为最适配比;2、No.1与No.8所识别的是相同的抗原位点,与No.9、No.11、No.23、No.25、No.26识别的是不同的抗原位点。本研究利用叠加ELISA方法检测了7株家兔IFN-γ单克隆抗体对IFN-γ重组蛋白的抗原识别位点,并发现五株与No.1单克隆抗体结合不同抗原表位的单克隆。为了更好地应用于临床样品的检验,对上述单克隆抗体识别天然抗原的能力还有待检验。获得的IFN-γ单克隆抗体抗体对将很好的应用于家兔IFN-γ的分泌水平的检测方法,例如夹心ELISA、ELISpot、流式CBA等,为揭示家兔拮抗疾病的免疫应答与建立提供有力的工具。

关键词：家兔 IFN-γ 抗原识别位点叠加ELISA

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