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鸡毒支原体株间结构蛋白及其抗原性变异的比较研究

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畜牧兽医学报 2000年第3期31卷 255-261页

作者：苗得园陈德威张培君王栋龚玉梅陈小玲北京市农林科学院畜牧兽医研究所 100089 中国农业大学动物医学院 100094 中国兽药监察所 100081

本研究以SDS PAGE及WesternBlot技术 ,应用鸡毒支原体国外强毒株S6、标准株PG31,疫苗株F ,北京分离株BG4 4T、NB72特异性多克隆抗血清对以上五株及疫苗株V、北京分离株C的结构及其抗原性进行了比较研究。结果表明MG结构蛋白及其抗原性... 详细信息

本研究以SDS PAGE及WesternBlot技术 ,应用鸡毒支原体国外强毒株S6、标准株PG31,疫苗株F ,北京分离株BG4 4T、NB72特异性多克隆抗血清对以上五株及疫苗株V、北京分离株C的结构及其抗原性进行了比较研究。结果表明MG结构蛋白及其抗原性存在着株间的多样性和一定相似性 ,其中以F与S6、BG4 4T与PG31、NB72与C更为接近 ,可能具有同源性。SDS PAGE显示出了MG株间结构蛋白微小的特征性、可重复性的差异 ,并能将各蛋白带清晰分开 ,是一种良好的鉴定MG株及纯化和制备蛋白抗原的方法。MG V株在 80℃处理样品时 150KD处出现的蛋白带 ,可能是一种热改变蛋白。在MG培养过程中 ,培养基中的血清成分可与其发生交联而且这种交联是引起假阳性反应的重要原因。在WesternBlot中 ,F株抗血清与MG各株蛋白反应时产生的条带数目较多且明显 ,显示了其良好的抗原性。另外 ,P6 4是一种有开发前途良好的特异性抗原成分。

关键词：鸡毒支原体结构蛋白抗原性 SDS-PAGE 诊断抗原

真核细胞表达单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白B及其抗原性与免疫原性分析

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中国生物工程杂志 2010年第6期30卷 8-13页

作者：王正茂李琳管文燕李越希南京军区军事医学研究所南京210002 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京210029

为在真核细胞中表达并纯化I型单纯疱疹病毒(HSV I)包膜糖蛋白gB,并分析其抗原性和免疫原性,化学合成了包膜糖蛋白gB1胞外区基因片段,构建真核表达载体,并转染至HEK293细胞,表达的蛋白用羊抗HSV1+HSV2血清作为一抗,用ELISA检测其抗原性;... 详细信息

为在真核细胞中表达并纯化I型单纯疱疹病毒(HSV I)包膜糖蛋白gB,并分析其抗原性和免疫原性,化学合成了包膜糖蛋白gB1胞外区基因片段,构建真核表达载体,并转染至HEK293细胞,表达的蛋白用羊抗HSV1+HSV2血清作为一抗,用ELISA检测其抗原性;用纯化的gB1蛋白免疫昆明小鼠,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用ELISA和Western blot检测小鼠抗gB1多克隆抗体特异性识别重组gB1抗原的能力,评价其免疫原性。结果显示在HEK293细胞中成功表达重组gB1蛋白,ELISA证实羊抗HSV1+HSV2多抗能够识别重组gB1蛋白;重组gB1蛋白免疫小鼠7周后,小鼠血清中多克隆抗体效价达到5×103,表明在真核细胞中高效表达并纯化的重组gB1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV检测试剂和疫苗研究提供了理论基础。

关键词：单纯疱疹病毒包膜糖蛋白gB1 真核表达抗原性免疫原性

非洲猪瘟病毒p72蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 33-36页

作者：侯绍华柏丽华郭晓宇贾红姜一曈朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室北京100193

为研究真核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白p72,本研究从含ASFV p72基因全序列的重组质粒pGEX-6p-p72中扩增出1 941 bp的p72全长基因,将其插入于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFastBac HTa-p72,转化至感受态细胞DH10Ba... 详细信息

为研究真核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白p72,本研究从含ASFV p72基因全序列的重组质粒pGEX-6p-p72中扩增出1 941 bp的p72全长基因,将其插入于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFastBac HTa-p72,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-p72。再将其转染至sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。Western blot和夹心法ELISA分析表明ASFV p72基因在昆虫细胞sf9中获得了正确表达,重组p72蛋白可以被特异性抗ASFV血清、p72单克隆抗体识别,表明该蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性。为进一步研究p72蛋白的结构、功能和免疫学特性奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p72蛋白杆状病毒表达抗原性

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

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病毒学报 1998年第1期14卷 1-9页

作者：房德兴甘人宝张倩李载平段恕诚殷震中国科学院上海生物化学研究所长春农牧大学兽医研究所上海医科大学附属儿科医院

曾在一个儿童患者体内，发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株，其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ，而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡ... 详细信息

曾在一个儿童患者体内，发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株，其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ，而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ，表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明，突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点，构建了突变Ｓ基因表达质粒，在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定，结果表明，这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱，对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示，突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６?

关键词：乙型肝炎病毒表面抗原变异株抗原性

禽流感病毒M2基因在原核系统中表达及其抗原性分析

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畜牧兽医学报 2005年第7期36卷 739-743页

作者：李永清杨敬韦莉杨汉春中国农业大学动物医学院北京100094 军事医学科学院动物中心北京100071 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089

Avian influenza virus (AIV) is a highly variable pathogen. The M2 gene of AIV is a transmembrane protein. It has highly conservative antigenic epitopes and is a potential antigen for cross-protection. In this study, the recombinants containing the full-length M2 and the transmembrane segment deleted M2 were constructed respectively. When measuring the expression of the two constructs, we found that the full-length M2 failed to express in the prokaryotic expression system, whereas transmembrane segment deleted M2 was highly expressed as fusion protein in a soluble form. The fusion protein reacted with SPF chicken serum specific for AIV A/goose / Guangdong /1996(H5N1). The protein was purified by GST purification system and the purified protein was used to prepare anti-M2 serum in mice. Immunofluorescence test demonstrated the binding of the antiserum with AIV (H5N1) infected MDCK cells. The results suggest that the recombinant transmembrane segment deleted M2 could provide good antigenicity.

关键词：禽流感病毒抗原性原核系统表达基因氨基酸序列保护性免疫跨膜蛋白结构蛋白表面抗原 CTL 抗体

布鲁氏菌BP26蛋白的表达纯化及其抗原性的研究

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1085-1088页

作者：宫晓炜景涛王国治李恪梅王秉翔傅林锋兰州大学病原生物学研究所兰州730000 中国药品生物制品检定所北京100050 兰州生物制品研究所兰州730046

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别... 详细信息

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别用Western-blot,间接ELISA检测其抗原性。结果DNA测序及酶切鉴定证实PET-30a/bp26原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中高效表达,免疫印迹和间接ELISA实验证明BP26重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清产生特异性结合。结论成功获得了布鲁氏菌中序列全长为696bp,编码232个氨基酸的BP26蛋白,通过血清学反应证实,该蛋白为人和动物布鲁氏菌病临床诊断试剂盒的研发奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌 BP26重组蛋白抗原性

沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

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军事医学 2011年第8期35卷 593-595页

作者：陈超卢永峰刘慧莹宋立华左庭婷何君檀华朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007l 解放军307医院呼吸科北京100071

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定。结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1:32以上。为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础。

关键词：沙门菌属 pad蛋白原核表达抗原性

人工合成的脑心肌炎病毒VP1表位基因在大肠杆菌中的表达与抗原性测定

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南京农业大学学报 2005年第4期28卷 100-103页

作者：韩研妍姜平顾小雪李玉峰南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列(150 bp),克隆于原核表达载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌(***)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。经过GSTrap... 详细信息

在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列(150 bp),克隆于原核表达载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌(***)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。经过GSTrap FF亲和层析柱获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30 800。以该纯化蛋白免疫家兔,获得效价分别为1∶25 600和1∶1 600的抗血清。W estern-b lot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。结果表明:脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位区150 bp编码基因在***中获得正确表达,纯化后的蛋白具有抗原性。

关键词：脑心肌炎病毒 VP1蛋白抗原表位原核表达抗原性

肺炎链球菌疫苗候选蛋白质谷氨酰胺tRNA合成酶的保守性与抗原性分析

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临床检验杂志 2012年第6期30卷 442-446页

作者：闵迅黄美容黄健董杰陈特王虹钟文尹一兵重庆医科大学检验系临床检验诊断学实验室重庆400016

目的分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA syn-thetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性。方法 PCR扩增*** D39标准菌株的Gt... 详细信息

目的分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA syn-thetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性。方法 PCR扩增*** D39标准菌株的Gts基因,构建pET32a(+)-Gts原核表达质粒并测序。扩增***不同血清型的Gts基因,测序后比对分析其保守性。表达Gts重组蛋白质,并进行纯化和western blot鉴定。用Gts重组蛋白质免疫BALB/c小鼠制备抗Gts的多克隆抗体并测定其效价。western blot分析Gts在不同血清型***中的表达情况。ELISA法测定本地区不同年龄段的健康人及患者血清中抗Gts抗体的效价。结果构建了以D39血清型***为DNA模版的pET32a(+)-Gts表达质粒,其测序结果与预期相符。8株不同血清型***的Gts基因编码区大小与D39菌株一致,约为1 461 bp;经测序后序列比对,其基因一致性>99.0%。经Ni柱纯化得到纯度>95%的Gts重组蛋白质,且能与抗His tag标签抗体特异性结合。采用Gts蛋白质经腹腔免疫小鼠后,其血清抗Gts抗体滴度高达1.024×106(5.12×105,4.096×106),与对照组比较有显著差异(P原性好,在不同血清型的***中均高度保守,且诱导产生的抗体反应存在年龄依赖性,是一个良好的候选疫苗靶点。

关键词：肺炎链球菌谷氨酰胺tRNA合成酶保守性抗原性疫苗