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聚乙二醇修饰猪血红蛋白的抗原性研究

中国药学杂志 2008年第2期43卷 91-94,160页

作者：李军倪燕秀张继娟吴梧桐海南大学海口570228 江苏省农业科学院南京210014 中国药科大学南京210009

目的研究血液代用品聚乙二醇修饰猪血红蛋白(PEG-pHb)的抗原性。方法通过计算机模拟,比较天然人、兔和猪血红蛋白之间氨基酸序列、空间构象和抗原表位的差异。将PEG-pHb按兔血量的10%输入兔耳缘静脉,免疫多次,制备抗体;将pHb与PEG-pHb... 详细信息

目的研究血液代用品聚乙二醇修饰猪血红蛋白(PEG-pHb)的抗原性。方法通过计算机模拟,比较天然人、兔和猪血红蛋白之间氨基酸序列、空间构象和抗原表位的差异。将PEG-pHb按兔血量的10%输入兔耳缘静脉,免疫多次,制备抗体;将pHb与PEG-pHb分别与免疫佐剂混合,按常规方法免疫家兔,制备抗体。用免疫印迹法与ELISA法检测抗原与抗体之间的交叉反应。结果天然猪血红蛋白与人血红蛋白的分子构象几乎一致,二者有高度相似的抗原性;PEG-pHb溶液反复大量输入家兔体内未检测出抗体。结论PEG-pHb可有效地降低pHb的抗原性。

关键词：血液代用品聚乙二醇修饰猪血红蛋白抗原性免疫印迹酶联免疫吸附测定

刚地弓形虫棒状体蛋白17基因的克隆、表达及抗原性分析(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第1期30卷 27-31页

作者：王海龙殷丽天孟晓丽申金雁刘红丽殷国荣山西医科大学寄生虫学教研室太原030001 山西医科大学生理学系太原030001

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株棒状体蛋白17(TgROP17)基因,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP17基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075203.1)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)... 详细信息

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株棒状体蛋白17(TgROP17)基因,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP17基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075203.1)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6P-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17转化至*** Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。分别以兔抗弓形虫血清和抗谷胱甘肽S转移酶(GST)标签抗体为一抗,采用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其抗原性。结果 RT-PCR扩增产物约为1850 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(M_r)约96 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。结论获得刚地弓形虫重组ROP17蛋白,且具有抗原性。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白17 原核表达抗原性

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超高压对大豆球蛋白抗原性及结构的影响

食品科学 2018年第17期39卷 92-97页

作者：赵益菲布冠好陈复生河南工业大学粮油食品学院河南郑州450001

以脱脂大豆粉为原料,利用碱溶酸沉法分离提取大豆球蛋白,采用间接竞争酶联免疫吸附法测定不同压力、加压时间及不同质量浓度下大豆球蛋白的抗原性变化,并对超高压后产物的免疫原性及结构特性进行分析。结果表明:超高压能显著影响大豆球... 详细信息

以脱脂大豆粉为原料,利用碱溶酸沉法分离提取大豆球蛋白,采用间接竞争酶联免疫吸附法测定不同压力、加压时间及不同质量浓度下大豆球蛋白的抗原性变化,并对超高压后产物的免疫原性及结构特性进行分析。结果表明:超高压能显著影响大豆球蛋白的抗原性;免疫印迹结果显示超高压处理后大豆球蛋白的免疫原性有一定程度的降低,但不能完全消除;傅里叶变换红外光谱结果表明超高压处理之后样品蛋白中α-螺旋和β-折叠的含量减少,β-转角和无规卷曲含量增加;非还原性电泳与荧光光谱结果表明,大豆球蛋白的空间结构解聚,疏水性氨基酸残基暴露在蛋白质表面,蛋白质的三、四级空间结构被破坏;蛋白质空间结构的改变可能会引起抗原表位的掩盖,从而使其抗原性降低。

关键词：大豆球蛋白超高压抗原性结构

重组卵形疟原虫裂殖子表面蛋白1 N端的抗原性及免疫原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第6期39卷 746-752页

作者：于嘉利刘蕾杨博楚瑞林孙毅凡刘耀宝程洋江南大学无锡医学院病原感染与免疫研究室无锡214000 江阴市第三人民医院无锡214000 上海市疾病预防控制中心上海200336 江苏省血吸虫病防治研究所无锡214000

目的表达卵形疟原虫柯氏亚种(Plasmodium ovale curtisi)和沃氏亚种(*** wallikeri)裂殖子表面蛋白1(merozoite surface protein 1,MSP1)N端重组蛋白,并进行抗原性及免疫原性分析,以探究其作为卵形疟候选疫苗的潜力。方法PCR扩增卵形疟... 详细信息

目的表达卵形疟原虫柯氏亚种(Plasmodium ovale curtisi)和沃氏亚种(*** wallikeri)裂殖子表面蛋白1(merozoite surface protein 1,MSP1)N端重组蛋白,并进行抗原性及免疫原性分析,以探究其作为卵形疟候选疫苗的潜力。方法PCR扩增卵形疟原虫基因组DNA Pomsp1 N端基因。将纯化后的Pocmsp1 N端、Powmsp1 N端分别与pET30a、pET32a载体连接,并转化至DH5α感受态细胞中,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切验证且测序无误后,转入大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中。0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后纯化蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测蛋白表达情况。15只BALB/c小鼠随机分为r Poc MSP1 N端组、r Pow MSP1 N端组和阴性对照组,每组5只,分别腹腔注射50μg与弗氏完全佐剂混合的r Poc MSP1和r Pow MSP1 N端蛋白和等量的PBS,初次免疫后第21天和第42天使用弗氏不完全佐剂加强免疫,初次免疫后第0、7、28和49天采集小鼠尾静脉血,制备血清。ELISA、Western blotting检测小鼠血清中特异性IgG、分析抗体滴度及抗体亲和指数,评估纯化后的r Poc MSP1和r Pow MSP1 N端蛋白的免疫原性。Western blotting检测r Poc MSP1和r Pow MSP1 N端蛋白的交叉反应,并用蛋白芯片分析重组蛋白在卵形疟原虫感染者血清中的抗原反应性。采用GraphPad Prism 5.0软件和Microsoft Excel 2016软件进行统计学分析,组间差异比较采用成组t检验。结果PCR扩增结果显示,Pocmsp1 N端和Powmsp1 N端片段大小均为1068 bp,与预期大小一致。PCR产物经克隆、诱导并纯化后,所获r Poc MSP1和r Pow MSP1 N端蛋白浓度分别为0.5 mg/ml和1.0 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,r Poc MSP1和r Pow MSP1 N端的相对分子质量(Mr)分别约为46000和59000,Western blotting结果证实蛋白成功表达。免疫组小鼠血清均可特异性识别相应抗原。ELISA结果显示,在免疫后第7天检测到特异性IgG抗体,纯化的r Poc MSP1 N端蛋白和r Pow MSP1 N端蛋白均与IgG发生特异性反应,与阴性对照组相比差异均有统计学意义(t=5.824、25.98,P原性,可诱导小鼠产生体液免疫应答,与卵形疟原虫感染者血清抗体反应上具有良好的抗原性。

关键词：卵形疟原虫裂殖子表面蛋白1 免疫原性抗原性

隐匿性HBV感染患者HBVS基因N-糖基化突变对HBsAg抗原性影响的分析

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解放军医学杂志 2018年第5期43卷 386-391页

作者：刘妍张凯陈容娟李奇许智慧思兰兰蔺淑梅徐东平解放军302医院临床研究管理中心/全军传染病研究所北京100039 西安交通大学第一附属医院感染科西安710061

目的分析隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV S基因主要亲水区(MHR)N-糖基化突变的抗原性,探讨N-糖基化突变与OBI发生机制的关系及临床意义。方法选取2例OBI患者血清中检出的4种NXT/S形式突变,其中sQ129N为已知经典的N-糖基化突变,其余3种为本... 详细信息

目的分析隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV S基因主要亲水区(MHR)N-糖基化突变的抗原性,探讨N-糖基化突变与OBI发生机制的关系及临床意义。方法选取2例OBI患者血清中检出的4种NXT/S形式突变,其中sQ129N为已知经典的N-糖基化突变,其余3种为本课题组新发现的突变,采用前期构建成功的野生型及突变型S基因重组质粒转染HepG2和Huh7细胞,验证3种新型突变形式,并分析4种突变对HBsAg抗原性的影响及这些突变地6种HBsAg检测试剂的反应性。结果 Western blotting结果证实3种新型突变均为N-糖基化突变。激光共聚焦结果显示,与野生株相比,4种突变株HBsAg/His标签的荧光强度比值分别降低了76.3%、53.4%、67.1%和52.7%,双抗体夹心法得出结果类似。用6种HBsAg临床试剂进行的检测结果显示,与野生株相比,3种新型突变株对6种HBsAg试剂的反应性均明显降低(P抗原性降低最为明显,导致测试的6种试剂中4种无法检测到该突变蛋白。结论 HBV S基因MHR区N-糖基化突变抗原性降低是引起患者OBI表现的主要原因之一,目前临床常用的HBsAg检测试剂对突变抗原的检测敏感性仍需要进一步提高。

关键词：乙型肝炎病毒 S基因突变 N-糖基化抗原性

人免疫缺陷病毒Ⅰ型外膜糖蛋白gp^(120)和gp^(160)在重组痘苗病毒中的表达及其抗原性研究

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中国医学科学院学报 1997年第2期19卷 120-126页

作者：陈元鼎 RodolfoGarcia FranciscoBaralle 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650107 InternationalCenterforGeneticEngineeringandBotechnology TriesteItaly

人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）是严重威胁人类健康的病原体，其主要抗原是病毒外膜糖蛋白gp160（gp120＋gp41）。本文报道运用遗传工程技术，在噬菌体T7启动子或痘苗病毒启动子P7．5控制下，在重组痘苗病毒系统中构建和表达HIV－1gp120和... 详细信息

人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）是严重威胁人类健康的病原体，其主要抗原是病毒外膜糖蛋白gp160（gp120＋gp41）。本文报道运用遗传工程技术，在噬菌体T7启动子或痘苗病毒启动子P7．5控制下，在重组痘苗病毒系统中构建和表达HIV－1gp120和gp160。进一步研究表明，在此系统中表达的重组HIV－1gp120和gp160以糖蛋白形式存在，保留着病毒在自然状况下的抗原表位构象，可同病毒特异性中和单克隆抗体反应，可作为重要的候选重组疫苗蛋白。

关键词：抗原性重组痘苗病毒艾滋病毒糖蛋白

SARS-CoV核衣壳蛋白抗原性鉴定和基因免疫研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第8期24卷 591-594页

作者：柯金山赵平张景熙秦照玲于嘉屏戚中田第二军医大学附属长征医院实验诊断科上海200003 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院呼吸科

目的　了解SARS冠状病毒 (SARS CoV)核衣壳蛋白 (N蛋白 )的抗原性及其基因疫苗的免疫原性。方法　用大肠杆菌表达SARS CoV的N蛋白 ,用SARS患者恢复期血清对其进行抗原性鉴定。再构建N蛋白基因疫苗 ,肌肉注射接种小鼠 ,检测小鼠血清中的... 详细信息

目的　了解SARS冠状病毒 (SARS CoV)核衣壳蛋白 (N蛋白 )的抗原性及其基因疫苗的免疫原性。方法　用大肠杆菌表达SARS CoV的N蛋白 ,用SARS患者恢复期血清对其进行抗原性鉴定。再构建N蛋白基因疫苗 ,肌肉注射接种小鼠 ,检测小鼠血清中的抗N蛋白IgG抗体、脾细胞增殖和迟发型超敏反应。结果　大肠杆菌重组表达的SARS CoVN蛋白具有强抗原性 ,其基因疫苗能在小鼠有效诱导N蛋白特异性抗体和CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞免疫应答。结论　SARS CoV的N蛋白可作为重要的SARS血清学诊断抗原 ,并对于SARS的特异性预防和治疗有潜在的应用价值。

关键词： SARS-CoV核衣壳蛋白抗原性基因免疫基因疫苗 SARS冠状病毒

恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域的克隆表达和抗原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第5期32卷 357-360页

作者：仰梦佳王素蓉诸葛洪祥陈军虎苏州大学基础医学与生命科学学院苏州215123 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的克隆、表达恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2(PF10_0355)的DBL2结构域,并分析其抗原性。方法 PCR扩增实验室培养的恶性疟原虫标准株3D7的基因组DNA,采用无缝克隆技术快速连接目的片段和质粒载... 详细信息

目的克隆、表达恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2(PF10_0355)的DBL2结构域,并分析其抗原性。方法 PCR扩增实验室培养的恶性疟原虫标准株3D7的基因组DNA,采用无缝克隆技术快速连接目的片段和质粒载体,构建重组表达质粒p ET28a-DBL2,转化至大肠埃希菌BL2l(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并经亲和层析获得纯化的重组蛋白r DBL2。分别以恶性疟患者血清、健康者血清、恶性疟患者混合血清和健康者混合血清作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白的抗原性。结果 PCR扩增恶性疟原虫疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2的DBL2基因,获得长约950 bp片段,与理论值相符。菌落PCR鉴定和测序结果均显示,重组质粒p ET28a-DBL2构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,经IPTG诱导并经亲和层析纯化后获得相对分子质量(Mr)约为34 000的包涵体蛋白。Western blotting分析结果显示,重组蛋白r DBL2可被恶性疟患者血清识别,而与健康者血清无特异反应。结论克隆和表达了恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域,重组蛋白r DBL2有良好的抗原性。

关键词：恶性疟原虫裂殖子原核表达抗原性

几种因素在L-天冬酰胺酶化学修饰中对酶活力及抗原性的影响

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药学学报 1990年第10期25卷 732-738页

作者：曹淑桂田洁赵秋宇丁忠田王树歧程玉华吉林大学酶工程实验室长春130023

为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖... 详细信息

为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖酐、单甲氧基聚乙二醇优于小分子乙酸酐,底物保护修饰优于直接修饰;活化PEG,优于活化PEG_1。在底物保护下的PEG,修饰酶其抗原性完全解除的同时,酶活力保持在30%以上。

关键词：化学修饰抗原性 L-天冬酰胺酶