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B淋巴细胞抗原互补决定区序列分析的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 104-105页

作者：李宁丽张冬青周光炎上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

近年来，人们对 B细胞的免疫应答的本质，生发中心的形成，细胞克隆的发生和发育，抗原细胞细胞相互作用，以及不同的 B细胞亚群的调节，在分子水平上加又以重新认识。

关键词：抗原互补决定区序列分析克隆性增生 B淋巴细胞

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IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第2期39卷 47-53页

作者：林源赵蕾王建敏李本强张英王建华朱建国西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 上海交通大学农业与生物学院上海市动物生物技术重点实验室上海200240 Raybiotech Inc.3607 Parkuay Lare Suite 200Norcross GAUSA 30092

【目的】筛选能表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单链抗体(scFv)的原核阳性克隆,并分析scFv抗原结合位点的氨基酸变化。【方法】采用RT-PCR,从IBV疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。利用重... 详细信息

【目的】筛选能表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单链抗体(scFv)的原核阳性克隆,并分析scFv抗原结合位点的氨基酸变化。【方法】采用RT-PCR,从IBV疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。利用重组链延伸反应(SOE-PCR),将linker与VH和VL基因相连构建鸡scFv基因,并将其克隆到原核表达载体pOPE101-XP中,构建重组质粒并转入大肠杆菌表达,间接ELISA筛选原核表达的抗IBVscFv的阳性克隆,对其测序后进行Clustal.W多序列比较,分析scFv骨架区(FR)和互补决定区(CDR)氨基酸序列差异。【结果】筛选到表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80;将它们的氨基酸序列与鸡胚系Gemline进行多序列比较,结果显示,ZL.10、ZL.80在CDR中易变异氨基酸占各区氨基酸的比率均在40%以上,其中VH的CDR3达90%,VL的CDR3达60%。此外,ZL.10、ZL.80在VH的CDR3区分别增加5个和7个氨基酸。FR氨基酸变异率较少,且大多均在12%以下,而FR4未发生突变。【结论】通过体外筛选原核表达产物的方法,获得了表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80,其VH、VL氨基酸序列中的变异主要发生在各自的CDR,二者VH的CDR3氨基酸序列差异很大,提示这2个scFv阳性克隆针对的是IBV不同的抗原位点。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒单链抗体筛选抗原互补决定区序列分析

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H7N9禽流感患者恢复期T细胞受体库特征研究

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中国呼吸与危重监护杂志 2016年第5期15卷 429-436页

作者：侯东妮何福生王明帮陈翠翠王葆青周文浩宋元林复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032 深圳华大基因股份有限公司广东深圳518083 复旦大学附属儿科医院上海201102

目的建立H7N9禽流感患者恢复期T细胞受体库,寻找H7N9特异性T细胞受体变化。方法收集2013年3月至5月确诊的8例人感染禽流感H7N9患者恢复期血液以及10例健康人血液,分离基因组DNA,采用Ⅲumina He Seq2000测序平台对T细胞受体库β链(TRB)... 详细信息

目的建立H7N9禽流感患者恢复期T细胞受体库,寻找H7N9特异性T细胞受体变化。方法收集2013年3月至5月确诊的8例人感染禽流感H7N9患者恢复期血液以及10例健康人血液,分离基因组DNA,采用Ⅲumina He Seq2000测序平台对T细胞受体库β链(TRB)抗原互补决定区3进行高通量测序,分析TRB库的多样性等特征。结果与正常组比较,H7N9患者某些TRBV基因使用频率如TRBV30、TRBV27存在显著差异。使用主成分分析降维后,发现恢复期患者TRBV-TRBJ基因配对模式与正常人有显著差别,可用于区分H7N9患者和正常人群。患者—患者、正常人—正常人之间的共享序列数量和频率明显大于患者-正常人,且患者间TRB库具有较高相似度。多样性指数在患者组明显低于正常人群,显示在感染恢复期其免疫功能仍处于相对低下状态。同时H7N9患者中超高表达克隆明显增多,且序列间存在较高相似性。结论 H7N9恢复期患者T细胞受体库有H7N9特征性变化,这些特征将为疾病的诊断和治疗性T细胞的研究提供重要信息。

关键词：高通量测序免疫组库抗原互补决定区生物信息学禽流感病毒

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乳腺癌患者CD4＋ CD25＋CD127dim/-调节性T细胞受体β链CDR3谱型漂移特征

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中华实验外科杂志 2014年第9期31卷 2069-2069页

作者：任宇杨伟明姚新生刘勤骆礼波苏晓玥贺新媛石磊陈梦婷霍金龙遵义医学院附属医院甲乳外科 563003 贵州省免疫学研究室教育创新基地

白细胞介素（IL）-7受体α链（IL-7Rα） CD127是CD4＋ CD25＋ Tregs细胞重要的鉴定指标[1].T细胞受体（TCR）是T细胞发挥免疫作用的关键环节,它能够识别抗原.T细胞在发育过程中形成抗原互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3）,＂CDR3区＂最具... 详细信息

白细胞介素（IL）-7受体α链（IL-7Rα） CD127是CD4＋ CD25＋ Tregs细胞重要的鉴定指标[1].T细胞受体（TCR）是T细胞发挥免疫作用的关键环节,它能够识别抗原.T细胞在发育过程中形成抗原互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3）,＂CDR3区＂最具有多样性.不同的T细胞具有不同的CDR3序列和长度,测定CDR3序列可以反映T细胞功能[2].我们利用毛细吸管电泳技术在筛选出单/寡克隆性增生的TCR β链的T细胞受体β链区域（TRBV）家族并进行测序.

关键词：调节性T细胞受体β链 CD4+ CDR3谱型乳腺癌患者 CDR3序列抗原互补决定区漂移

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抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

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第四军医大学学报 2005年第9期26卷 815-815页

作者：付建芳黄威权夏永娟杨安钢

目的：克隆并分析抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体(mAb)VH及VL基因．方法：从分泌抗溶藻弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株(AL1)中提取总RNA．利用RT-PCR技术，克隆抗溶藻弧菌独特型mAb VH和VL基因，并将其重组人PMD18-T vector中进行测序分析．... 详细信息

目的：克隆并分析抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体(mAb)VH及VL基因．方法：从分泌抗溶藻弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株(AL1)中提取总RNA．利用RT-PCR技术，克隆抗溶藻弧菌独特型mAb VH和VL基因，并将其重组人PMD18-T vector中进行测序分析．结果：VH基因序列全长为369bp，编码123个氨基酸；VL基因序列全长为339bp，编码113个氨基酸．通过国际联机检索及Kabat库分析，二者均符合小鼠IgG V区基因的特征，含有4个框架区(FR)，3个抗原互补决定区((2DR)及两个抗体特征性的半胱氨酸残基．结论：抗溶藻弧菌独特型mAb的VH和VL基因的克隆成功，为抗溶藻弧菌独特型mAb基因工程疫苗的构建奠定了基础．

关键词：溶藻弧菌单克隆抗体独特型可变区基因序列分析 RT-PCR技术抗原互补决定区杂交瘤细胞株 VH基因序列基因工程疫苗 mAb 总RNA 测序分析联机检索 V区基因半胱氨酸氨基酸 VL 重组人 IgG 特征性全长编码

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