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三聚氰胺单克隆抗体不同纯化方法的比较

药物生物技术 2022年第1期29卷 23-27页

作者：李研封青孙晶莹冯杨萌孙丽君陕西省人民医院陕西西安710068 西安交通大学医学院第三附属医院陕西西安710068

为了建立更适用于三聚氰胺单克隆抗体的纯化方法,分别采用了硫酸铵两次沉淀法、正辛酸-硫酸铵沉淀法、凝胶过滤层析法、亲和层析法、阴离子交换层析法对三聚氰胺单克隆抗体进行纯化。对纯化后的三聚氰胺单克隆抗体的纯度、浓度、效价进... 详细信息

为了建立更适用于三聚氰胺单克隆抗体的纯化方法,分别采用了硫酸铵两次沉淀法、正辛酸-硫酸铵沉淀法、凝胶过滤层析法、亲和层析法、阴离子交换层析法对三聚氰胺单克隆抗体进行纯化。对纯化后的三聚氰胺单克隆抗体的纯度、浓度、效价进行鉴定,对比不同纯化方法之间的差异。结果证明亲和层析法对于三聚氰胺单克隆抗体纯化最为适宜。由于亲和层析法纯化纯度高,快速便捷,对三聚氰胺单克隆抗体损伤小,最为推荐。研究者也可结合自身条件,参考文中数据结果,根据实验需要自行选择适合自身的纯化方法。

关键词：抗体纯化硫酸铵沉淀法正辛酸-硫酸铵沉淀法凝胶过滤层析法亲和层析法离子交换层析法

CTLA4单克隆抗体纯化工艺优化及药物效应评估

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CTLA4单克隆抗体纯化工艺优化及药物效应评估

作者：张山洪扬州大学

学位级别：硕士

作为治疗肿瘤疾病的一种新型方式,单克隆抗体药物在肿瘤治疗领域发挥着越来越重要的作用。抗体药物发挥高效价需要满足一定的质量要求,通过蛋白纯化工艺深层过滤、亲和层析、离子层析等方法可以有效去除蛋白样品中的杂质。为了能有效地... 详细信息

作为治疗肿瘤疾病的一种新型方式,单克隆抗体药物在肿瘤治疗领域发挥着越来越重要的作用。抗体药物发挥高效价需要满足一定的质量要求,通过蛋白纯化工艺深层过滤、亲和层析、离子层析等方法可以有效去除蛋白样品中的杂质。为了能有效地生产出高纯度的抗体药物,本研究对抗体纯化工艺开展了优化实验并成功进行了规模化放大生产。1、CTLA4单克隆抗体纯化工艺优化与规模放大生产本研究通过对蛋白纯化深层过滤、亲和层析、阳离子层析、阴离子层析等工艺步骤进行研究,筛选合适的工艺参数。最终确定Merck厂家的D0SP和X0SP膜包组合对发酵液进行深层过滤。亲和层析填料确定为Merck厂家的Eshmuno A,上样载量范围小于等于40 g/L,洗脱液pH控制在3.6±0.1。低pH病毒灭活工艺选择pH3.5～3.7条件灭活1～1.5 h。阳离子层析填料选择Cytiva厂家的Capto MMC Impres,确定淋洗条件为9%B相,洗脱条件为29%B相,上样载量范围45～55g/L,淋洗体积5～10CV。阴离子层析填料选用Merck厂家的Eshmuno Q填料,载量范围为60～100 g/L,上样电导范围为5～10 mS/cm,pH条件为7.8±0.1。除病毒过滤选择Pall公司的预过滤膜包N P6LPRTP1(0.7 m2)和过滤膜包NP5LUPRMP1S(0.5 m2)。超滤工艺最终选择2块1.14 m2的膜包进行浓缩换液。综合中试200 L放大生产实验数据和检测数据分析,此工艺具备可放大性,放大后产品质量与工艺开发阶段产品质量具有一致性。2、CTLA4单克隆抗体药物效应评价药代动力学结果表明恒河猴静脉注射给予0.3、1、3 mg/kg的CTLA4抗体注射液后,各组雌雄动物之间主要药代动力学参数无明显差异(P>0.05),暴露量随剂量的增加而增加,C0、AUClast和AUCINFbs的增长与剂量的增长成比例。临床前体内药效试验结果表明在hCTLA4小鼠移植MC38结肠癌模型的抗肿瘤实验中,所有受试动物在给药期间活动和进食状态良好,体重均有一定程度增加,动物对各受试品耐受良好。在实验终点,G1 Anti-KLH hIgG1(1mg/kg)组平均肿瘤体积为 1116±106 mm3,G2 Ipi(1 mg/kg)组平均肿瘤体积为 255±88 mm3,TGITV为 86.3%,G3 CTLA4 抗体(0.1 mg/kg)组的平均肿瘤体积是 736±203 mm3,TGITV为 38.1%,G4 CTLA4 抗体(0.3 mg/k g)和G5CTLA4抗体(1 mg/kg)组的平均肿瘤体积分别为47±12mm3和33±15 mm3。TGITV分别为107.1%和108.5%。结果表明CTLA4抗体在0.3 mg/kg和1 mg/kg的剂量水平下可以显著抑制肿瘤生长(P<0.001),且抑制肿瘤作用显著优于1 mg/kg的Ipi(P<0.05)。肿瘤重量的抑制率与肿瘤体积抑制率结果基本一致。所有受试样品在发挥作用时未对动物产生明显毒副作用,安全性较好,为开展Ⅰ期临床试验进行药效有效性对比研究提供指导。

关键词： CTLA4单抗抗体纯化工艺开发药代动力学药效动力学

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优化硫酸铵法纯化单克隆抗体

药物生物技术 2022年第4期29卷 358-361页

作者：李研徐翠香黄晓燕孙晶莹常乐杨晓丽靳占奎王建华陕西省人民医院感染与免疫疾病重点实验室陕西西安710068 陕西省人民医院中心实验室陕西西安710068

改进硫酸铵法纯化单克隆抗体,优化硫酸铵的饱和度,让最终饱和度达45%,通过两次沉淀,使单克隆抗体的纯度进一步提升,再利用醋酸缓冲液去除杂蛋白,最终得到便于保存的单克隆抗体。优化后的硫酸铵法提取出蛋白质的纯度大大提高,且浓度和效... 详细信息

改进硫酸铵法纯化单克隆抗体,优化硫酸铵的饱和度,让最终饱和度达45%,通过两次沉淀,使单克隆抗体的纯度进一步提升,再利用醋酸缓冲液去除杂蛋白,最终得到便于保存的单克隆抗体。优化后的硫酸铵法提取出蛋白质的纯度大大提高,且浓度和效价都高于传统方法,能纯化出与亲和层析纯度相媲美的单克隆抗体。优化后的硫酸铵沉淀法简单便捷,易于操作且纯化抗体纯度高,也便于抗体保存。

关键词：单克隆抗体抗体纯化沉淀法饱和硫酸铵盐析法硫酸铵沉淀法

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嗜硫色谱纯化抗体技术的研究进展

色谱 2006年第1期24卷 88-92页

作者：刘玄宋宏新陕西科技大学生命科学与工程学院陕西咸阳712081

嗜硫色谱在高盐环境下对抗体及其他某些蛋白质产生特异性吸附,再在低盐条件下洗脱,可获得高纯度及高回收率的蛋白质产品,是一种新型蛋白质纯化技术。该文对嗜硫色谱及其在抗体纯化中的应用做了综述。

关键词：嗜硫吸附色谱抗体纯化

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使用数据驱动模型优化抗体纯化策略

Engineering 2019年第6期5卷 1077-1092+1194-1214页

作者：刘松崧 Lazaros G.Papageorgiou School of Management Harbin Institute of Technology School of Management Swansea University Centre for Process Systems Engineering Department of Chemical Engineering University College London

本工作致力于抗体片段纯化过程的多尺度优化。优化了生产过程中的色谱决策,包括色谱柱的数量及其大小,每批的循环数以及操作流速。使用基于微型实验数据的制造规模模拟数据集,建立了以负载质量、流速和柱床高度为输入的色谱通量数据驱... 详细信息

本工作致力于抗体片段纯化过程的多尺度优化。优化了生产过程中的色谱决策,包括色谱柱的数量及其大小,每批的循环数以及操作流速。使用基于微型实验数据的制造规模模拟数据集,建立了以负载质量、流速和柱床高度为输入的色谱通量数据驱动模型。与其他方法相比,分段线性回归建模方法具有简单、预测精度高的优点。提出了两种混合整数非线性规划(MINLP)模型,结合数据驱动模型,以最小化每克抗体纯化过程的总成本。然后,使用线性化技术和多参数分解将这些MINLP模型重新构造为混合整数线性规划(MILP)模型。研究了两个具有不同色谱柱尺寸替代品的工业相关案例,以证明所提出模型的适用性。

关键词：抗体纯化多尺度优化抗原结合片段混合整数规划数据驱动模型分段线性回归

儿童免疫性血小板减少症血清中抗核仁抗体纯化以及靶抗原的筛选

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基因组学与应用生物学 2019年第5期38卷 2283-2288页

作者：张攀石宇徐颖重庆医科大学附属儿童医院重庆400014 儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆400014 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014 重庆医科大学认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆400014

免疫性血小板减少症为儿童常见获得性免疫性疾病,本研究前期发现有较高比例的抗核仁抗体阳性的儿童为免疫性血小板减少症患者。为筛选鉴定抗核仁抗体阳性免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体识别的靶抗原,本研究利用HEP-2细胞系建... 详细信息

免疫性血小板减少症为儿童常见获得性免疫性疾病,本研究前期发现有较高比例的抗核仁抗体阳性的儿童为免疫性血小板减少症患者。为筛选鉴定抗核仁抗体阳性免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体识别的靶抗原,本研究利用HEP-2细胞系建立了细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系,成功纯化免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体。利用蛋白免疫共沉淀和质谱分析法筛选出Ncl、Krt1、Krt2、Krt10等蛋白可能为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体结合的靶抗原。这些结果为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对免疫性血小板减少症发病机制的认识。

关键词：儿童免疫性血小板减少症抗核仁抗体抗体纯化靶抗原鉴定

金磁微粒介导的盐酸克伦特罗多克隆抗体的纯化

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第5期34卷 18-22,26页

作者：汪慧蓉朱宏莉惠文利张志锋陈超崔亚丽西北大学生物芯片研发中心暨国家微检测系统工程技术研究中心陕西西安710069 陕西西大北美基因股份有限公司陕西西安710069

以重氮化法制备盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CBL-BSA)抗原并免疫家兔制备多克隆抗体,将表面固定有BSA的金磁微粒(金磁微粒-BSA)与多克隆抗体反应,抗BSA抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离,利用ELISA法对纯化前后抗CBL及... 详细信息

以重氮化法制备盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CBL-BSA)抗原并免疫家兔制备多克隆抗体,将表面固定有BSA的金磁微粒(金磁微粒-BSA)与多克隆抗体反应,抗BSA抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离,利用ELISA法对纯化前后抗CBL及抗BSA抗体的效价进行测定,确定最佳纯化条件,得到高纯度的抗CBL抗体。结果表明,通过一步反应．可实现载体蛋白BSA在金磁微粒表面的固定化,每毫克金磁微粒固定 BSA的容量可达236 μg;在最佳纯化条件(温度4C,反应时间2h,金磁微粒表面BSA质量与抗体质量比为7:1) 下,金磁微粒-BSA可有效地去除偶联物多克隆抗体中的抗BSA抗体,而纯化前后抗CBL抗体的效价基本保持不变,分离纯化效果较好。该方法可方便、快速地去除多克隆抗体中的无关抗体,对小分子半抗原多克隆抗体的纯化具有重要意义。

关键词：盐酸克伦特罗金磁微粒亲和吸附抗体纯化

金磁微粒介导多克隆抗体纯化的最优化条件研究

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食品工业科技 2012年第3期33卷 164-166页

作者：朱鸿林胡寅沈国清姜官鑫上海交通大学农业与生物学院农业部都市农业(南方)重点开放实验室上海200240

将牛血清白蛋白(BSA)包被在自制的金磁微粒表面,以金磁微粒与抗体比例、反应时间、反应温度为主要影响因素,依据均匀设计表,对盐酸克伦特罗(CL)多克隆抗体进行纯化,并对纯化前后抗体的效价以及抗体对CL的检测灵敏度进行了研究。结果表明... 详细信息

将牛血清白蛋白(BSA)包被在自制的金磁微粒表面,以金磁微粒与抗体比例、反应时间、反应温度为主要影响因素,依据均匀设计表,对盐酸克伦特罗(CL)多克隆抗体进行纯化,并对纯化前后抗体的效价以及抗体对CL的检测灵敏度进行了研究。结果表明,金磁微粒与抗体的比例以及两者的反应时间是影响抗体纯化的主要因素;纯化后多克隆抗体中抗BSA抗体明显下降,而抗CL抗体基本保持不变;对比纯化前后CL的检测曲线,纯化后的最低检测限(LOD)和半抑制浓度(IC50)分别下降了6.90%和24.37%。

关键词：金磁微粒盐酸克伦特罗抗体纯化最优化

牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测

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动物营养学报 2018年第1期30卷 100-106页

作者：王建郝丽媛魏婧雅孙鹏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193

本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后... 详细信息

本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后,对兔进行心脏采血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。测定纯化后抗体效价,并绘制抗体抑制曲线。最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测。结果表明,本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强,抗体浓度为11.02 mg/m L,效价达到1∶128 000;采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13μg/g,液态奶中接近于0μg/g,奶粉中为5.28μg/g。总之,本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体,可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定。

关键词：乳铁蛋白多克隆抗体抗体纯化