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蛋白质与抗体微阵列及其在生物医学研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 491-494页

作者：虞伟孙永康顾宁武建国东南大学南京军区南京总医院

随着人类基因组测序的顺利完成及其他相关领域如机械制造、微电子加工技术及生物信息学方面所取得的进展 ,以蛋白质为研究对象的蛋白质组学愈显重要 ,高通量的蛋白质与抗体阵列芯片分析技术正日益为人们关注 .对蛋白质分析策略及以阵列... 详细信息

随着人类基因组测序的顺利完成及其他相关领域如机械制造、微电子加工技术及生物信息学方面所取得的进展 ,以蛋白质为研究对象的蛋白质组学愈显重要 ,高通量的蛋白质与抗体阵列芯片分析技术正日益为人们关注 .对蛋白质分析策略及以阵列为基础的蛋白质芯片分析原理、相关的制备方法与检测技术及其在生物学研究、医学与实验诊断应用方面进行了阐述。

关键词：蛋白质抗体微阵列生物医学研究应用

抗体微阵列构建过程中抗体定位固定技术研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 684-686页

作者：闫静辉吴萌程华陈英珠张小兵李亚璞李春生河北省生物研究所细胞生化研究室河北石家庄050081

抗体微阵列是蛋白组学研究的一个重要技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。抗体微阵列制备技术中存在许多关键问题,其中,将抗体高通量、牢固地固定在微阵列基质上,且保证抗体不失去活性,成为问题的关键。在DNA微阵列基础上,根据抗... 详细信息

抗体微阵列是蛋白组学研究的一个重要技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。抗体微阵列制备技术中存在许多关键问题,其中,将抗体高通量、牢固地固定在微阵列基质上,且保证抗体不失去活性,成为问题的关键。在DNA微阵列基础上,根据抗体结构的特点,研究人员设计了多种抗体固定化方法。本文中介绍了近年来抗体微阵列制备技术中抗体定位固定(site-specific immobilization)技术的研究发展情况。

关键词：定位固定抗体微阵列抗体固定

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构建抗体微阵列过程中抗体固定的策略

生物医学工程学杂志 2006年第4期23卷 907-910页

作者：张露刘必成东南大学附属中大医院肾科肾脏病研究所南京210009

抗体微阵列作为蛋白组学研究的一个技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。由于抗体结构的特殊性,将抗体固定于固相载体表面已成为构建抗体微阵列构成中的关键步骤。本文就近年来用于构建抗体微阵列的几种抗体固定的方式及其优缺点进... 详细信息

抗体微阵列作为蛋白组学研究的一个技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。由于抗体结构的特殊性,将抗体固定于固相载体表面已成为构建抗体微阵列构成中的关键步骤。本文就近年来用于构建抗体微阵列的几种抗体固定的方式及其优缺点进行综述。

关键词：抗体微阵列抗体固定

菲律宾蛤仔过敏原可视化抗体微阵列玻片的检测方法

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水产学报 2010年第3期34卷 422-427页

作者：李小燕李振兴林洪 SAMEE Haider 张轶群中国海洋大学水产品安全性实验室 Food and Marine Research Center PCSIR Laboratories ComplexOff University Road

采用辣根过氧化物酶(HRP)与3,3′,5,5′—四甲基联苯胺(TMB)—H2O2作为信号示踪系统,建立了一种可视化抗体微阵列检测菲律宾蛤仔过敏原的方法。对孵育时间、抗体浓度等免疫条件进行了优化。采用改良双抗体夹心法,将菲律宾蛤仔过敏原的... 详细信息

采用辣根过氧化物酶(HRP)与3,3′,5,5′—四甲基联苯胺(TMB)—H2O2作为信号示踪系统,建立了一种可视化抗体微阵列检测菲律宾蛤仔过敏原的方法。对孵育时间、抗体浓度等免疫条件进行了优化。采用改良双抗体夹心法,将菲律宾蛤仔过敏原的兔多克隆抗体固定于琼脂糖三维芯片上,依次加入待检样品、菲律宾蛤仔鼠多克隆抗体和HRP-羊抗鼠IgG,孵育后加TMB显色,肉眼观察后,用平板扫描仪获取扫描图象,采用GenePixPro6.0软件分析灰度值。试验结果表明,该方法最低可检出10ng/mL的菲律宾蛤仔过敏原,片内平均变异系数(CV)为5.99%,片间为10.3%;香肠及蟹棒中3个不同浓度的加标回收率为73.54%～95.44%;4℃存放4个月内抗体微阵列玻片活性保持稳定。该方法不需要大型精密仪器,结果直观可见,可以发展为对多种过敏原进行同时检测,具有良好的实用和推广价值。

关键词：菲律宾蛤仔过敏原夹心法抗体微阵列可视化

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基于夹心免疫分析的抗体微阵列的构建

中国生物工程杂志 2008年第9期28卷 83-88页

作者：吕林莉刘必成朱颖陆祖宏东南大学肾脏病研究所东南大学附属中大医院肾科南京210009 东南大学生物电子学国家重点实验室南京210096

目的:建立一种基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法。方法:将MCP-1的捕获抗体点样于修饰后的玻片,标准抗原加样覆盖所点阵列,生物素标记抗体和链酶亲和素-cy3依次加样孵育,激光共聚焦扫描仪获取图象并进行数据分析。对捕获抗体... 详细信息

目的:建立一种基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法。方法:将MCP-1的捕获抗体点样于修饰后的玻片,标准抗原加样覆盖所点阵列,生物素标记抗体和链酶亲和素-cy3依次加样孵育,激光共聚焦扫描仪获取图象并进行数据分析。对捕获抗体浓度、封闭液种类、系统可重复性和定量检测能力、两种因子平行性检测对信号分析的影响及点样后玻片稳定性进行分析和评价。结果:随着捕获抗体浓度的升高,信号强度逐渐增加;2%BSA/PBS和5%酪蛋白可作为本系统的封闭液;所构建系统具有较好的可重复性(组内变异1.3%,组间变异8.7%)和定量分析能力(所建立的抗原浓度-相对信号强度标准曲线相关系数达0.9995);并实现了两因子的平行性分析和点样后玻片的稳定性。结论:确立了基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法,为进一步构建多因子定量检测抗体微阵列奠定了基础。

关键词：蛋白质芯片抗体微阵列免疫分析

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基于抗体微阵列的食源性病原体综合检测平台

食品工业科技 2011年第12期32卷 489-493页

作者：林荣生厦门华厦职业学院食品药品安全检测中心福建厦门361024

针对超低浓度食源性病原体样本检测的需要,将表面沉积铁氰酸镍薄膜的微叉指电极与生物活化的微珠相结合,设计并实现了通过测定电化学阻抗变化的抗体微阵列食源性病原体综合检测平台样件。提出了电化学阻抗等效电路,并通过电路模型分析表... 详细信息

针对超低浓度食源性病原体样本检测的需要,将表面沉积铁氰酸镍薄膜的微叉指电极与生物活化的微珠相结合,设计并实现了通过测定电化学阻抗变化的抗体微阵列食源性病原体综合检测平台样件。提出了电化学阻抗等效电路,并通过电路模型分析表明,生物活化的微珠、微叉指电极之间的电容、溶液的电阻均对电化学阻抗传感单元的输出特性有显著影响。以不同浓度的病原体为样本,完成了Escherichia coli O157∶H7为目标病原体的实验研究。实验结果表明,该微抗体阵列的检出极限低至1.0pg/mL,可满足超低浓度食源性病原体的检测需要。

关键词：食源性病原体抗体微阵列超低浓度电化学阻抗生物活化微珠

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噬菌体抗体微阵列的研究策略

免疫学杂志 2007年第4期23卷 466-467,469页

作者：闫静辉吴萌程华陈英珠张小兵李亚璞李春生河北省生物研究所细胞生化研究室河北石家庄050081

抗体微阵列技术是近年来发展起来的一项蛋白质组学研究技术,广泛应用于蛋白质组学研究、医学基础与临床诊断等研究领域。抗体微阵列构建过程中的关键技术为高通量抗体制备技术及抗体固定技术。噬菌体抗体微阵列技术能很好地解决抗体来... 详细信息

抗体微阵列技术是近年来发展起来的一项蛋白质组学研究技术,广泛应用于蛋白质组学研究、医学基础与临床诊断等研究领域。抗体微阵列构建过程中的关键技术为高通量抗体制备技术及抗体固定技术。噬菌体抗体微阵列技术能很好地解决抗体来源问题及抗体固定问题,是抗体微阵列的发展方向。本文简要介绍了噬菌体抗体微阵列技术的研究策略及研究进展情况。

关键词：抗体微阵列噬菌体抗体库噬菌体抗体微阵列

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食物过敏原可视化检测抗体微阵列的构建

食物过敏原可视化检测抗体微阵列的构建

作者：李小燕中国海洋大学

学位级别：硕士

随着食物过敏发病率的逐年升高,食物过敏问题日益受到人们的重视。世界粮农组织(FAO)的报告显示超过90%的食物过敏是由八大类食物过敏原引起的。目前没有有效的食物过敏治疗方法,唯一有效的方法是避免食用含有某些特定过敏原的食物。由... 详细信息

随着食物过敏发病率的逐年升高,食物过敏问题日益受到人们的重视。世界粮农组织(FAO)的报告显示超过90%的食物过敏是由八大类食物过敏原引起的。目前没有有效的食物过敏治疗方法,唯一有效的方法是避免食用含有某些特定过敏原的食物。由于极微量的过敏原即可导致严重的过敏反应,建立准确、灵敏、快速的食物过敏原检测方法对于提高食品安全的水平,保障人们的身体健康具有重要意义。由于过敏原种类繁多,能导致患者过敏的食物多种多样,如何迅速检测食品中可能含有的过敏原是广大消费者关心的问题。蛋白质微阵列技术以其高特异性,高灵敏度特别是高通量的优势引起了广大科研工作者的重视。本论文以南美白对虾(Penaeus Vannamei)、杂色蛤(Ruditapes philippinarum)、鲅鱼(Scomberomorus niphonius)、花生(Arachis hypogaea L.)为研究对象,通过对微阵列基片载体、可视化抗体微阵列的使用条件等主要因素的优化研究,建立了可视化抗体微阵列检测方法;以正交实验对可视化抗体微阵列的检测条件进行了优化,并进行了性能分析、加标实验及实际食品样品中过敏原的检测。主要结论如下：1、通过比较二维基片及三维基片对蛋白质的固定效果发现三维琼脂糖基片是可视化抗体微阵列的理想载体,最佳琼脂糖浓度为1.2%。2、通过正交实验分别确立了南美白对虾、杂色蛤、鲅鱼、花生等过敏原可视化抗体微阵列检测的最佳条件。南美白对虾可视化检测抗体微阵列的线性范围为100ng/mL-100μg/mL,检出限为100.0ng/mL;杂色蛤过敏原可视化检测抗体微阵列的线性范围为100ng/mL-100μg/mL,检出限为10.0ng/mL;鲅鱼过敏原可视化检测抗体微阵列的线性范围为1μg/mL-1mg/mL,检出限为100.0 ng/mL;花生过敏原可视化检测抗体微阵列的线性范围为：1μg/mL-1mg/mL,检测限为100.0 ng/mL.3、可视化抗体微阵列性能检测结果表明：该方法具有较好的精密度,批内变异系数抗体微阵列玻片于4℃湿盒中密闭存放120天后,活性保持稳定;较好的特异性,仅与具有高度同源性蛋白的样品有交叉反应;加标实验结果表明该方法对不同加标样品中的过敏原检测回收率介于70%-105%。4、可视化检测抗体微阵列应用于加工食品中过敏原检测的双抗体夹心ELISA验证结果表明,所建立的可视化抗体微阵列检测方法与双抗体夹心ELISA法的阳性检出符合率为77.78%,且该方法通量化程度高、无需大型精密仪器、成本低廉、操作简便、结果直观,适于加工食品中过敏原的快速筛选。目前,针对食物过敏原的免疫检测方法的研究多集中在传统的酶免疫检测方法上,对于抗体微阵列检测方法的研究较少,可视化检测抗体微阵列检测食物过敏原的研究尚未见报道。本研究基于改良双抗体夹心ELISA法的原理,首次建立了具有良好稳定性和精密度的食物过敏原可视化抗体微阵列的检测技术。这将为食物中过敏原的筛选检测提供更加有效的技术支撑,对提高食品安全性、保护过敏人群的健康具有重要的现实意义。

关键词：食物过敏原抗体微阵列可视化夹心法检测

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基于直接标记法抗体微阵列的初步构建

东南大学学报（医学版） 2009年第2期28卷 85-89页

作者：王丽梅刘必成吕林莉郑敏东南大学肾脏病研究所附属中大医院江苏南京210009

目的:初步构建基于直接标记法的抗体微阵列,并评价其应用于临床的可能性。方法:选择白蛋白作为目标蛋白,通过琼脂糖铺片、玻片活化、机器点样、点样后固定等步骤构建抗体微阵列,经封闭非特异位点、标记抗原、加样后对白蛋白进行检测,对... 详细信息

目的:初步构建基于直接标记法的抗体微阵列,并评价其应用于临床的可能性。方法:选择白蛋白作为目标蛋白,通过琼脂糖铺片、玻片活化、机器点样、点样后固定等步骤构建抗体微阵列,经封闭非特异位点、标记抗原、加样后对白蛋白进行检测,对关键步骤——抗原标记进行最佳条件摸索,通过对临床标本的检测评价其潜在应用价值。结果:应用BCA蛋白定量试剂盒测定尿液样本总蛋白浓度做出的标准曲线,其R2均大于0.99;温度为37℃时抗原标记效果最佳;标记后抗原存放1周对信号的影响无统计学意义(P抗体微阵列,并对关键的抗原标记环节进行了最佳工作条件优化,有应用于临床检测的潜力。

关键词：抗体微阵列直接标记法 BCA蛋白定量蛋白标记