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化脓隐秘杆菌溶血素和铁结合蛋白的抗体应答分析

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中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1326-1330页

作者：刘德珍沈克飞付利芝徐登峰张素辉重庆市荣昌区人民医院重庆402460 重庆市畜牧科学院重庆402460

目的对化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)溶血素(pyolysin,PLO)和铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)的抗体应答情况进行分析。方法采用腹腔注射途径建立化脓隐秘杆菌小鼠感染模型,观察不同剂量细菌对小鼠的致死性和注射部位形成... 详细信息

目的对化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)溶血素(pyolysin,PLO)和铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)的抗体应答情况进行分析。方法采用腹腔注射途径建立化脓隐秘杆菌小鼠感染模型,观察不同剂量细菌对小鼠的致死性和注射部位形成的组织病变。制备化脓隐秘杆菌灭活抗原,采用肌肉注射途径免疫45只雌性昆明小鼠和10只山羊,每只小鼠0.2 mL,每只山羊1 mL,均进行3次免疫,每次间隔2周,第3次免疫后2周采血分离血清。采用ELISA法测定感染小鼠、健康圈养羔羊、化脓隐秘杆菌灭活抗原免疫小鼠和山羊血清中抗PLO和IBP的IgG抗体水平。结果注射部位出现化脓和皮肤坏死的小鼠血清中能检出高水平的抗PLO和IBP抗体;无组织病变小鼠血清中仅能检测到低水平的抗IBP抗体;连续注射无组织病变剂量细菌的小鼠血清能检出抗PLO和IBP抗体。圈养羔羊血清抗PLO抗体阳性率高,而抗体水平低。免疫小鼠和山羊血清中均能检出抗IBP抗体,但部分动物检测不出抗PLO抗体。结论IBP是化脓隐秘杆菌感染和灭活疫苗免疫诱导抗体应答的主要抗原之一,PLO抗体水平具有反映感染所造成的组织损伤与灭活疫苗免疫效果的潜力。

关键词：化脓隐秘杆菌感染免疫溶血素铁结合蛋白抗体应答

新型冠状病毒及其关键突变株的抗体应答的研究

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新型冠状病毒及其关键突变株的抗体应答的研究

作者：岳帅中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

2019年末,新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2)引起了一场席卷全球的疫情——新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease2019,COVID-19)。现如今,我们尚不清楚新冠患者抗体反应强度与疾病严重程度之间的关系;此外,尽管新冠疫苗及特异性中和抗体最近已经大量问世,但受关注变异株(variants of concern,VOCs)的出现使得新冠疫情的形势变得更加严峻。随着多代VOCs的相继出现,其大幅增强的传染性及高致病性对人类健康威胁日趋加剧。这些SARS-Co V-2 VOCs包括B.1.1.7株(英国,Alpha),B.1.351株(南非,Beta),P.1株(巴西,Gamma),B.1.617株(印度,Delta)以及现正在大流行的B.1.1.529株(南非,Omicron)。首先,为了研究抗体反应强度与疾病严重程度的关系,我们纳入了59名感染期(2020年初)呈现不同临床分型的新冠肺炎康复患者,并发现其血清内中和抗体反应强度与疾病严重程度成正相关:重症患者其体内有大量的中和性抗体(neutralizing antibody,NAb);相反,轻症和无症状感染者体内几乎无有效NAb存在;不同临床分型的患者其体内真正有效的中和性抗体亚型也是不同的。接着,我们探讨了上述感染新冠肺炎的康复者对于SARS-Co V-2 VOCs的抗体应答,发现其特异性中和抗体对SARS-Co V-2 VOC的结合及中和能力显著下降,但对SARS-Co V-2非VOC突变株仍有较强的中和效果。最后,我们进一步探讨了前期工作中克隆筛选出的针对SARS-Co V-2野生株的中和单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)是否仍对SARS-Co V-2 VOCs具有中和作用。结果提示:32D4号单克隆抗体对SARS-Co V-2 VOCs的中和能力下降到原来的1/3,而35B5号单克隆抗体对各类VOC仍然保持着显著的中和效果,尤其是新近流行的Omicron(IC=0.0499μg/ml)。综上所述,这些结果提示轻症和无症状感染者因不能产生中和性抗体应答而仍有必要接种新冠疫苗;同时,SARS-Co V-2野生株感染康复者仍有感染SARS-Co V-2 VOC的风险,我们亟需更有力的手段(包括针对SARS-Co V-2 VOC的疫苗及中和性抗体)去控制变异株的蔓延。

关键词： SARS-CoV-2 COVID-19 抗体应答中和性抗体受关注突变株单克隆抗体

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 DNA与改良痘苗病毒组合疫苗诱导小鼠抗体应答

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第2期23卷 93-96页

作者：李淑梅李珣薛采芳缪军雷俊川刘忠湘王宪锋第四军医大学病原生物学教研室西安710032 西藏军区总医院拉萨850003

目的探索DNA与改良痘苗病毒(MVA)组合免疫对增强恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)抗体应答的作用。方法以人工合成MSP1全基因为基础分别构建DNA免疫质粒VR1020/190和重组MVA,单用VR1020/190或与表达质粒GM-CSF共同对小鼠进行初始免疫后... 详细信息

目的探索DNA与改良痘苗病毒(MVA)组合免疫对增强恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)抗体应答的作用。方法以人工合成MSP1全基因为基础分别构建DNA免疫质粒VR1020/190和重组MVA,单用VR1020/190或与表达质粒GM-CSF共同对小鼠进行初始免疫后,用重组病毒追加强化,采用DNA/MVA组合方案免疫BALB/c小鼠,ELISA测定血清IgG及其亚类水平,经腹腔接种转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19进行攻击。结果DNA免疫能有效诱导小鼠产生抗MSP1-190抗体,其终点稀释度为1∶2500,GM-CSF质粒共免疫组抗体的终点稀释度为1∶11150,抗体亚类的测定表明GM-CSF质粒显著促进了IgG1类抗体应答,MVA追加可使单独免疫组和共免疫组抗体分别增加53和10倍;两实验组产生了水平相近的抗19000抗体(1∶32000),其含量占血清中MSP1总IgG的1/4-1/3。经转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19攻击后小鼠的存活时间并没有明显延长(P>0.05)。结论采用合成MSP1全基因进行DNA/MVA组合免疫可诱导小鼠产生显著的抗体应答,抗体的详细特性和保护作用正在进一步研究中。

关键词：恶性疟原虫裂殖子表面蛋白抗体应答痘苗病毒疫苗诱导组合改良 BALB/c小鼠 ELISA测定 DNA免疫伯氏疟原虫 MSP1 血清IgG MVA CSF 免疫组人工合成表达质粒重组病毒 IgG1 抗体亚类总IgG 存活时间 MSPI 保护作用

亮氨酸氨肽酶在日本血吸虫感染中的抗体应答特征

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第2期23卷 163-167页

作者：张霞高雅楠侯敏陈琳季旻珺吴观陵南京医科大学病原生物学系南京210029

目的以亮氨酸氨肽酶(LAP)作为检测抗原,观察日本血吸虫感染后不同时期动物血清中相应抗体的动态变化特征。方法应用免疫印迹试验(Western blot)鉴定日本血吸虫LAP(SjLAP)重组蛋白的表达,并利用His镍柱纯化目的蛋白。采用酶联免疫吸附试... 详细信息

目的以亮氨酸氨肽酶(LAP)作为检测抗原,观察日本血吸虫感染后不同时期动物血清中相应抗体的动态变化特征。方法应用免疫印迹试验(Western blot)鉴定日本血吸虫LAP(SjLAP)重组蛋白的表达,并利用His镍柱纯化目的蛋白。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染前、后不同时期小鼠及猪血清中LAP诱导抗体产生的变化特征。结果重组蛋白SjLAP可与anti-His单克隆抗体反应,并可被日本血吸虫感染后小鼠血清所识别。获得高浓度重组蛋白SjLAP,以该蛋白为抗原,采用ELISA法检测发现感染后4周猪血清和感染后6周小鼠血清抗体水平达到高峰;且随着虫卵大量出现,抗体水平均显著下降(P均<0.01)。结论 SjLAP在感染早期的高表达可能对日本血吸虫病早期诊断具有一定的参考价值。

关键词：日本血吸虫亮氨酸氨肽酶抗体应答小鼠

新生儿5μg和10μg重组酵母乙型肝炎疫苗初免后抗体免疫应答比较

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中华流行病学杂志 2012年第3期33卷 305-308页

作者：张丽张卫翟祥军李艳萍黎健颜丙玉李燕婷朱凤才黄腾李立秋龚晓红崔富强梁晓峰徐爱强山东省疾病预防控制中心济南250014 北京市疾病预防控制中心江苏省疾病预防控制中心广西壮族自治区疾病预防控制中心上海市疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心

目的比较新生儿接种5μg和10μg重组酵母乙型肝炎（乙肝）疫苗后抗-HBs血清应答状况。方法以山东、江苏、上海、广西、北京5省（自治区、直辖市）为研究现场，采用5lag重组啤酒酵母乙肝疫苗（HepB-SC）和10μg重组汉逊酵母乙肝疫苗（Hep... 详细信息

目的比较新生儿接种5μg和10μg重组酵母乙型肝炎（乙肝）疫苗后抗-HBs血清应答状况。方法以山东、江苏、上海、广西、北京5省（自治区、直辖市）为研究现场，采用5lag重组啤酒酵母乙肝疫苗（HepB-SC）和10μg重组汉逊酵母乙肝疫苗（HepB—HP），按照“0—1—6”免疫程序完成初免的7—12月龄健康婴儿。调查对象采用问卷调查并采集静脉血，应用化学发光微粒子免疫分析法（cMIA）定量检测抗-HBs。抗-HBs〈10mlU／ml者采用CMIA检测HBsAg，HBsAg阴性者采用巢式PCR方法检测HBV-DNA。比较不同HepB初免后的抗体应答率和抗体水平，采用多因素分析方法确定HepB种类对抗体阳转率和抗体水平的影响。结果共观察8947名5ggHepB-SC初免（5嵋组）和4576名10ggHepB—HP初免（10μg组）婴儿。5rtg组无应答、低应答、正常应答和高应答率分别为1．88％、15．18％、61．42％和21．52％，10gg组分别为0．15％、2．16％、29．42％和68．26％；5μg组无应答、低应答和正常应答率高于10μg组，高应答率低于10嵋组，各应答率之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。5μg组和10嵋组初免后抗一HBs几何平均浓度分别为354．81mlU／ml（95％CI：338．84～363．08mIU／m1）和1778．28mlU／ml（95％CI：1698．24～1819．70mlU／m1），差异有统计学意义（F=4517．17，P〈0．001）。多因素分析显示，排除采血月龄、性别、出生体重、早产、母亲分娩前HBsAg状态等因素影响，两种HepB初免后抗体阳性率和抗体水平的差异仍有统计学意义。结论新生儿使用10μg HepB．HP初免抗体应答优于5ggHepB—SC。

关键词：新生儿基因重组乙型肝炎疫苗免疫剂量抗体应答

重组表达的恶性疟原虫顶端膜抗原1片段诱导小鼠保护性抗体应答

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第2期21卷 80-83页

作者：李珣薛采芳刘忠湘王宪锋丁劲雷俊川甄荣芬第四军医大学病原生物学教研室西安710032

目的分析恶性疟原虫顶端膜抗原(apical membrane antigen 1,AMA1)主要结构域在诱导保护性抗体应答中的作用,为正确选择疫苗应用片段提供依据。方法 PCR扩增编码P.fAMA1相应结构域的基因序列,构建pET原核表达载体,用纯化重组蛋白免疫BAL... 详细信息

目的分析恶性疟原虫顶端膜抗原(apical membrane antigen 1,AMA1)主要结构域在诱导保护性抗体应答中的作用,为正确选择疫苗应用片段提供依据。方法 PCR扩增编码P.fAMA1相应结构域的基因序列,构建pET原核表达载体,用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA测定抗体效价,用免疫荧光和免疫印迹分析抗体的特异性,用小鼠免疫血清进行疟原虫体外生长抑制实验。结果成功表达并纯化了代表AMA1不同结构域的重组抗原片段,包括完整的胞外域片段E、结构域Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ,免疫小鼠后分别诱导出不同滴度的IgG抗体,免疫血清可特异地识别天然AMA1抗原,重组蛋白E和Ⅰ+Ⅱ免疫血清可明显抑制疟原虫的体外生长。结论 AMA1胞外结构域的完整性是构成保护性抗体表位的重要基础,保护性抗体表位主要分布在结构域Ⅰ中。

关键词：恶性疟原虫顶端膜抗原抗体应答疫苗

抗体应答研究技术在非人灵长类感染与免疫模型中的应用

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病毒学报 2018年第3期34卷 448-456页

作者：王一文罗文新夏宁邵厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院公共卫生学院

近年来,随着单个B细胞抗体筛选技术与深度测序（Deep Sequencing）的发展,相应技术被广泛应用于人体内抗体应答研究中。但该类技术在非人灵长类（Non-Human Primates,NHPs）抗体应答研究中的应用较为有限。而NHPs由于与人类具有较为相... 详细信息

近年来,随着单个B细胞抗体筛选技术与深度测序（Deep Sequencing）的发展,相应技术被广泛应用于人体内抗体应答研究中。但该类技术在非人灵长类（Non-Human Primates,NHPs）抗体应答研究中的应用较为有限。而NHPs由于与人类具有较为相似的免疫系统,二者在感染或免疫后可以激起相似的获得性免疫应答,尤其是对NHPs产生的针对病原体感染或疫苗的NHP抗体应答谱研究,可以为人类免疫学研究、疫苗设计及生物药物临床转化提供关键信息。本文对目前常用非人灵长类抗体筛选技术的研究进展与应用实例进行了综述,以期为生物大分子药物研究者提供较为完备的参考。

关键词：非人灵长类抗体应答单个B细胞重组技术

中缅边境恶性疟原虫AMA1蛋白结构域Ⅱ的单倍体型和抗体应答相关性分析

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中国免疫学杂志 2020年第11期36卷 1307-1312页

作者：洪明阳于园超周丹曹雅明朱晓彤中国医科大学基础医学院免疫教研室沈阳110122

目的:明确中缅边境恶性疟原虫AMA1蛋白结构域Ⅱ(DⅡ)的单倍体型及抗体应答特点。方法:采集30例恶性疟原虫感染患者指尖血制成血样干滤纸片,并另外收集123例感染者血清样本;制备DⅡ重组蛋白和免疫血清;检测抗DⅡ免疫血清对裂殖子侵袭的影... 详细信息

目的:明确中缅边境恶性疟原虫AMA1蛋白结构域Ⅱ(DⅡ)的单倍体型及抗体应答特点。方法:采集30例恶性疟原虫感染患者指尖血制成血样干滤纸片,并另外收集123例感染者血清样本;制备DⅡ重组蛋白和免疫血清;检测抗DⅡ免疫血清对裂殖子侵袭的影响;PCR和测序分析DⅡ的单倍体型;ELISA检测血清中DⅡ特异性IgG抗体及其亚类。结果:抗DⅡ免疫血清呈剂量依赖性抑制裂殖子侵袭红细胞。30例流行区样本中检测出9个PfAMA1单倍型。优势单倍体型H4频率为26.7%。45.1%的患者血清中抗DⅡ的IgG抗体反应为阳性,且以调理性IgG1和IgG3抗体为主。结论:DⅡ可诱导保护性抗体应答。中缅边境地区H4为DⅡ的优势单倍体型并具有免疫原性,提示其作为候选红内期疫苗的可行性。

关键词：恶性疟原虫中缅边境 AMA1 DⅡ 抗体应答

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交感神经对抗体应答的调控

中国药理学通报 1991年第3期7卷 161-164页

作者：葛志东陈敏珠徐叔云安徽医科大学临床药理研究所合肥230032

近10余年来,神经免疫内分泌学(neuroimmunoendocrinology)的研究不断深入,已在不同水平上展开。其中对免疫器官的交感神经支配和功能,淋巴细胞的肾上腺素受体,拟肾上腺素药对抗体应答的影响研究颇多。本文从免疫药理学角度,对以上问题... 详细信息

近10余年来,神经免疫内分泌学(neuroimmunoendocrinology)的研究不断深入,已在不同水平上展开。其中对免疫器官的交感神经支配和功能,淋巴细胞的肾上腺素受体,拟肾上腺素药对抗体应答的影响研究颇多。本文从免疫药理学角度,对以上问题作一综述。

关键词：交感神经抗体应答调控免疫调节淋巴细胞肾上腺素受体