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领悟免疫学:对克隆选择学说和独特型网络学说的再思考

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中国免疫学杂志 2017年第3期33卷 445-449,452页

作者：陈培富张以芳云南农业大学动物科学技术学院昆明650201

1引言免疫学是生命科学领域中系统性、趣味性和实用性均非常强的前沿学科。阐明人及动物获得性免疫应答的发生机制并对其进行人工干预和应用,一直是免疫学家孜孜不倦的工作重点。

关键词：独特型网络克隆选择学说获得性免疫应答免疫学教学抗原特异性抗体基因免疫耐受自身免疫病抗独特型抗体血型抗体

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区域集群下板材订单配置模型及算法研究

运筹与管理 2020年第12期29卷 38-42,50页

作者：孙卫红吕文新中国计量大学机电工程学院浙江杭州310018

针对集群企业板材资源滞留、无法共享、加工旺季材料短缺等问题,依据区域板材特性和区域企业集群地理相关优势,建立以减少需求方板材订单采购费用最小化为目标的板材订单分配模型,采用以粒子群、免疫算法相结合的混合调度算法。计算过程... 详细信息

针对集群企业板材资源滞留、无法共享、加工旺季材料短缺等问题,依据区域板材特性和区域企业集群地理相关优势,建立以减少需求方板材订单采购费用最小化为目标的板材订单分配模型,采用以粒子群、免疫算法相结合的混合调度算法。计算过程中,将订单分配对应企业编号作为免疫系统的抗体基因,通过比较适应度函数解与订单预算成本的关系,将抗体群区分为支配解与非支配解,提高算法对抗原的免疫能力和最优解的选择概率。最后以板材订单分配实例进行试验仿真,分别采用PSO算法与IA-PSO算法进行试验对比,对平台上6家订单发布企业寻找合适地理位置相近和价格相对低廉的供应商。试验结果表明,IA-PSO算法能够有效地解决区域集群内板材订单的匹配问题,并且在寻找价格更低和位置更合适的供应商上更有优势。

关键词：区域企业集群板材资源抗体基因免疫算法订单匹配

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植物抗体工程的研究

生物学通报 2004年第2期39卷 25-26页

作者：彭昌文济宁师范专科学校生物系山东济宁272025

阐述了近年在植物基因工程方面研究的情况。

关键词：植物抗体抗体基因基因表达植物基因工程

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转基因蚊子可抗登革热 001

转基因蚊子可抗登革热

来源于H5N1禽流感患者的广谱抗血凝素蛋白抗体筛选及其功能研究

中国科学报

作者：沙森

本报讯据《科学》杂志报道，如今，通过给蚊子注射一种病毒抗体，研究人员首次在实验室中培育出不传播任何形式登革热的昆虫。理论上，这些蚊子可以被释放到野外，从而抑制登革热病毒传播。传统的登革热控制策略，如清除滋生蚊子的积... 详细信息

本报讯据《科学》杂志报道，如今，通过给蚊子注射一种病毒抗体，研究人员首次在实验室中培育出不传播任何形式登革热的昆虫。理论上，这些蚊子可以被释放到野外，从而抑制登革热病毒传播。传统的登革热控制策略，如清除滋生蚊子的积水、喷洒杀虫剂以及使用蚊帐，都未能战

关键词：登革热病毒抗体基因转基因

来源： cnki报纸评论

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来源于H5N1禽流感患者的广谱抗血凝素蛋白抗体筛选及其功能研究

作者：孙颖中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,自20世纪初流感大流行暴发以来,几乎每年都有流感疫情的发生。近年来,除了引发季节性流感的H1N1、H3N2和B型流感病毒之外,一些跨越种属屏障的、新发禽流感病毒(包括H5N1、H5N6、H6N2、H9N2、H7N... 详细信息

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,自20世纪初流感大流行暴发以来,几乎每年都有流感疫情的发生。近年来,除了引发季节性流感的H1N1、H3N2和B型流感病毒之外,一些跨越种属屏障的、新发禽流感病毒(包括H5N1、H5N6、H6N2、H9N2、H7N9和H10N8等)直接感染人,对人类健康造成了巨大威胁,因此,寻找有效的流感治疗措施十分重要。血凝素(Hemagglutinin,HA)是流感病毒表面重要的糖蛋白,也是诱导机体产生抗流感免疫的重要抗原,可以诱导机体产生保护性体液免疫。流感病毒感染或者流感疫苗接种所诱导产生的HA抗体主要针对HA头部,可以阻断病毒与唾液酸受体的结合,对机体起到保护作用,但此类抗体常常具有毒株特异性,不能有效抵抗新发或突发流感病毒的感染。近年来,研究者发现大量可以对不同型或亚型流感病毒产生交叉保护作用的抗HA广谱中和抗体。这类抗体主要靶向HA茎部的保守区域,也有少数靶向头部受体结合区以及其他保守区域,从而有效应对由HA抗原的高度变异所导致的免疫逃逸,对流感的防治具有重大意义。为筛选获得广谱抗HA抗体,本研究体外培养H5N1患者外周血B细胞,通过HA结合筛选、H5N1假病毒中和筛选及分子克隆技术,获得了功能性B细胞的抗体基因。随后利用293T细胞表达系统体外表达抗体,使用ELISA及假病毒中和试验筛选潜在的广谱抗体,并进一步鉴定了抗体功能,分析了抗体基因及功能域特点。本课题共筛选4例H5N1患者的6份PBMC标本,主要发现如下:1.成功培养3例H5N1患者不同时间点的4份外周血标本内的B淋巴细胞,发现4份标本中均存在能够分泌H5反应性IgG的B淋巴细胞,部分交叉结合H5和H7。2.从采集时间最早的2#样本(感染后12天)筛选获得124孔H5反应性B细胞,占培养总数的5.78%,其中,23孔可与H7交叉反应(占培养总数的1.07%),7孔对GX-H5N1假病毒的中和百分率在80%以上(占培养总数的0.33%),提示抗H5或H5/H7交叉反应性B淋巴细胞已存在于机体内,病毒感染后可被激活进入外周循环。3.3#和4#样本分别采集于感染后21天和18天,H5反应性B细胞各占1.3%和3.17%,6#样本采集于感染后357天,H5反应性B细胞占培养总数的0.63%,而H5/H7交叉反应性B细胞占H5-B细胞的80%。提示外周血中H5反应性细胞比率随愈后时间增加明显降低。H5反应性或H5/H7反应性B淋巴细胞可参与外周循环,感染后一年也能检测到。4.筛选获得44株H5反应或H5/H7反应性抗体,41株与H5和H7交叉反应,2株分别由VH1-69和VH1-2编码的广谱抗体具有体外中和效应。5.分析2#样本所得抗体基因使用频率,发现VH1-69和VH3-30基因占据主要优势。VH1-69编码的Ab2-12D5和Ab2-12G8识别HA茎部,与已报道的抗Group1 HA广谱中和抗体CR6261识别相似的抗原表位。两株抗体均具有VH1-69抗体特征性的识别HA茎部的IFY区域。Ab2-12D5可识别Group1不同亚型HA,对2009pdm H1N1,H5N1和H5N6具有广谱中和作用;而Ab2-12G8不具有中和活性,但可与Group1和Group2HA交叉反应,识别谱更广。两株抗体均可在体外诱导产生抗体依赖的细胞毒效应(ADCC)作用。6.从3#样本中获得VH1-2编码的广谱抗HA抗体:Ab3-32G7.1。该抗体可有效结合Group1不同亚型HA,并能够中和2009pdm H1N1,H5N1和H5N6毒株。7.2#样本中编码交叉反应性抗体的VH3-30基因CDR区变异程度不同,对H5、H7的亲和力不同。CDR3中的111位的长疏水区MIVGAVL,LCDR3的99位D可能参与对HA茎部helixA的作用,从而影响对H5及H7的结合。结论:1.广谱反应性抗HA抗体也能在H5N1患者体内发现,可识别HA茎部表位,具有中和活性或ADCC效应。2.H5N1病毒感染人可快速诱导机体产生广谱保护性抗体,这很有可能是机体记忆性B细胞被激活的结果。

关键词：广谱保护性抗体血凝素流感病毒抗体基因

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抗原特异性B细胞筛选与重编程

抗原特异性B细胞筛选与重编程

作者：杨彦嘉广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景随着经济与社会的高速发展,世界各国联系不断加强,人类面临着公共卫生问题的挑战也日益增强。由于具有传播速度快,途径多,宿主广泛等特点,病毒、细菌、寄生虫等病原体一直是威胁着人类健康安全,例如流感病毒,肺炎球菌,血吸虫等... 详细信息

研究背景随着经济与社会的高速发展,世界各国联系不断加强,人类面临着公共卫生问题的挑战也日益增强。由于具有传播速度快,途径多,宿主广泛等特点,病毒、细菌、寄生虫等病原体一直是威胁着人类健康安全,例如流感病毒,肺炎球菌,血吸虫等。面对病原体的侵害,我们主要的预防方法和治疗措施是疫苗接种和抗体治疗。产生抗体的B细胞是疫苗接种的主要效应细胞,抗原特异性B细胞是机体对抗病原体感染关键的细胞。直接利用抗原特异性B细胞进行预防和治疗疾病是值得探索的研究。已有文献报道,抗原特异性T细胞来源的iPSCs可以分化为具有功能的抗原特异性T细胞,然后移植到病人体内进行疾病治疗。同为免疫效应细胞,我们提出将抗原特异性B细胞重编程为iPSCs,然后再分化成为抗体分泌细胞,最后再将抗体分泌细胞应用于疾病预防和治疗的研究思路,从而达到更加有效、精准的治疗效果,开发出新的疫苗和细胞治疗方案。研究目的将抗原特异性B细胞直接重编程为iPSCs,然后再利用分化、转分化或者基因编辑等技术重启抗体基因的表达,获得抗体分泌细胞。研究方法从免疫了H1N1(A/California/07/2009)疫苗的志愿者的外周血中分离PBMC,利用EBV永生化的方法培养扩增B细胞,利用有限稀释法和实验室已有的抗体筛选技术获得能够分泌抗H1N1流感病毒的抗体的特异性B细胞,再将七个重编程因子用电转染的方法导入抗原特异性B细胞,通过重编程使其成为iPSCs,然后通过q PCR、免疫荧光和体内形成畸胎瘤的方法对抗原特异性B细胞来源的iPSCs进行多能性鉴定。研究结果(1)通过有限稀释法得到了LC206-EBV-B和Y104-EBV-B两株永生化的抗原特异性B细胞单克隆,筛选到的这两株细胞均可以分泌中和H1N1的抗体。(2)将携带有7个重编程因子的episomal质粒电转入永生化的抗原特异性B细胞中,将其重编程为iPSCs,并且利用q RT-PCR,免疫荧光以及体内畸胎瘤形成实验等验证了iPSCs的多能性。(3)对于重编程得到的iPSCs,在蛋白水平以及RNA水平检测不到抗体基因的表达,但抗体基因序列仍然保留在iPSCs的基因组中,且抗体基因的序列没有发生突变,与重编程之前的抗体序列一致。(4)EBV相关基因在Y104-iPSC-C3和LC206-iPSC-C4的早代数的iPSC克隆中可以检测到,在所检测的其他克隆的不同代数的iPSCs中均检测不到。结论(1)利用EBV永生化的方法获得了分泌抗H1N1流感病毒抗体的抗原特异性B细胞;(2)永生化的抗原特异性B细胞可以被重编程为iPSCs,且抗原特异性B细胞来源的iPSCs具有与h ESCs相似的多能性,(3)抗原特异性B细胞来源的iPSCs的基因组中仍然存在有重编程之前的抗体基因,但iPSCs关闭了抗体基因的表达。(4)随着抗原特异性B细胞来源的iPSCs的传代次数的增多,其细胞中不再携带EBV相关基因。我们的实验结果为后续的将iPSCs分化成为抗体分泌细胞用于疾病的预防和治疗奠定了基础。

关键词：抗原特异性B细胞特异性抗体重编程 iPSCs 抗体基因

诺贝尔桂冠下的科学赝品——记轰动世界科学界的巴尔的摩事件

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中国科学基金 1991年第4期 11-14页

作者：朱立煌陈受宜中国科学院遗传研究所

1986年4月一篇洋洋洒洒长达13页的科学论文在美国著名的学术刊物《细胞》上问世了,正是这篇论文引发了后来所谓的“巴尔的摩”事件。论文的题目是“在含重排Mu重链基因的转基因小鼠中内源免疫球蛋白基因表达程式的改变”。论文的学术价... 详细信息

1986年4月一篇洋洋洒洒长达13页的科学论文在美国著名的学术刊物《细胞》上问世了,正是这篇论文引发了后来所谓的“巴尔的摩”事件。论文的题目是“在含重排Mu重链基因的转基因小鼠中内源免疫球蛋白基因表达程式的改变”。论文的学术价值在于提供了一个新发现:小鼠自身的抗体基因在导入的外源抗体基因的影响下,会效法外源基因业已重排的结

关键词：巴尔的摩事件抗体基因科学界诺贝尔

人源性抗HBsAg单链Fab基因在酵母中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第2期25卷 120-120页

作者：邓宁向军俭粟宽源暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632 解放军第458医院传染病研究中心

抗乙肝表面抗原的人源性抗体(Fab)在临床上有防治乙型肝炎病毒的应用前景,如用于预防新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播和治疗性乙肝制剂等.本文将噬菌体抗体库筛选得到的人源性抗HBsAg Fab抗体基因,通过重叠PCR的方法借Linker将Fab的轻链(L... 详细信息

抗乙肝表面抗原的人源性抗体(Fab)在临床上有防治乙型肝炎病毒的应用前景,如用于预防新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播和治疗性乙肝制剂等.本文将噬菌体抗体库筛选得到的人源性抗HBsAg Fab抗体基因,通过重叠PCR的方法借Linker将Fab的轻链(L链)和重链(H链)融合构建单一的链,即单链Fab(Single chain Fab)基因,并插入到酵母表达载体pPICZαA中.将构建的表达载体质粒pPICZαA-HL线性化,通过LiCl转化法转化毕赤酵母GS115,利用ZeocinTM抗生素筛选重组酵母,并用高剂量的ZeocinTM平板来筛选多拷贝整合有融合L、H链基因的重组酵母。

关键词：抗HBsAg Fab基因单链乙型肝炎病毒抗乙肝表面抗原 Linker 酵母表达载体人源性抗体噬菌体抗体重叠PCR chain 垂直传播抗体基因治疗性新生儿库筛选

免疫多样性的遗传基础(Ⅱ)——T细胞受体及其多样性

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自然杂志 1990年第6期13卷 350-356,375页

作者：徐亦力

T细胞受体是T细胞表达于细胞膜的抗原受体(图1)。因为提取困难(膜型,量少),T细胞受体的研究远远落后于抗体。其实体为何物,曾经长期不明。1982年后,才有了突破。首先,制成抗T细胞受体的单克隆抗体,通过免疫沉淀法第一次取得了T细胞受体... 详细信息

T细胞受体是T细胞表达于细胞膜的抗原受体(图1)。因为提取困难(膜型,量少),T细胞受体的研究远远落后于抗体。其实体为何物,曾经长期不明。1982年后,才有了突破。首先,制成抗T细胞受体的单克隆抗体,通过免疫沉淀法第一次取得了T细胞受体。继而分子遗传学家利用削减法(subtraction method)得到编码T细胞受体的cDNA。

关键词：细胞受体抗原结合部位抗原受体基因重组单克隆抗体抗体基因信号序列遗传基础细胞分化超变区