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FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用

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中国兽医学报 2012年第8期32卷 1105-1109页

作者：段二珍周永辉张宜娜张继希张志远卢晓艳刘肖萍夏平安崔保安河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪... 详细信息

将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖性增强作用 Fc受体荧光定量RT-PCR

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鹅星状病毒感染抗体依赖性增强作用

中国兽医学报 2023年第6期43卷 1181-1186页

作者：赵光伟邵骜骏曹瑞兵曹蓝云冯昊南曹礼静谭昌藩杨晓伟魏思远张天奇李军崔晓焓张立武重庆三杰众鑫生物工程有限公司重庆402460 西南大学动物医学学院重庆402460 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 重庆市荣昌区职业教育中心重庆402460 重庆市巫山县职业教育中心重庆404700 重庆合盛生物技术有限公司重庆402460

为了探究鹅星状病毒感染是否存在抗体依赖性增强作用,用中和效价为1∶94、1∶141和1∶282共3种不同抗体滴度(低、中、高效价)的鹅星状病毒卵黄抗体分别进行雏鹅保护试验和鹅胚中和试验,同时设空白对照和攻毒对照。结果显示,雏鹅保护试... 详细信息

为了探究鹅星状病毒感染是否存在抗体依赖性增强作用,用中和效价为1∶94、1∶141和1∶282共3种不同抗体滴度(低、中、高效价)的鹅星状病毒卵黄抗体分别进行雏鹅保护试验和鹅胚中和试验,同时设空白对照和攻毒对照。结果显示,雏鹅保护试验中抗体效价1∶94组鹅均发病,病死率90%(9/10),1∶141效价组鹅的发病率为30%(3/10),病死率20%(2/10),1∶282效价组鹅无发病及死亡;攻毒对照组鹅100%发病,病死率80%(8/10);1∶94抗体组动物发病时间和死亡时间均早于攻毒对照组;荧光定量PCR检测结果显示1∶94和1∶141抗体效价组Ct值均小于攻毒对照组。鹅胚中和试验结果显示,3个抗体处理组鹅胚病死率分别为100%,20%和0,攻毒和阴性对照组分别为100%和0,1∶94效价组鹅胚死亡时间显著早于攻毒对照组;荧光定量检测结果显示1∶94效价组平均Ct值显著小于1∶141效价组和攻毒对照组。结果说明低中和效价的鹅星状病毒卵黄抗体能增强鹅星状病毒在雏鹅和鹅胚体内的复制能力,发病率和病死率增加,证实鹅星状病毒感染存在抗体依赖性增强作用,其结果可为临床鹅星状病毒病的防控提供理论依据。

关键词：鹅星状病毒雏鹅试验鹅胚中和试验抗体依赖性增强作用

PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究

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PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究

作者：段二珍河南农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)引起的一种病毒性传染病,该病的主要特征是造成仔猪呼吸障碍和母猪流产。PRRSV是单股正链RNA病毒,易变异,可引起猪的持续性感染和免疫抑制,具有抗体依赖性增强作用,因此研究PRRSV的感染差异性及抗体依赖性增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE)等感染机制对PRRS的防治具有重要意义。本试验通过用PRRSV疫苗样株(Hn-3/06)和变异株(Hn-1/06)分别感染试验猪,采用已建立的Real-time PCR方法检测不同时间段感染猪体内PRRSV的复制拷贝数,用ELISA方法检测不同时间段感染猪体内特异性ELISA抗体水平和IFN-α的表达量,用中和试验检测不同时间段感染猪体内中和抗体水平,研究了PRRSV疫苗样株和变异株的感染差异性。试验结果显示,两个毒株在猪体内的增殖规律基本一致,其中感染变异株比感染疫苗样株的猪体内病毒含量高,说明变异株比疫苗样株的感染复制能力稍强;两毒株诱导机体产生ELISA抗体和中和抗体的时间较晚,水平较低,其中感染疫苗样株比感染变异株的猪体内ELISA抗体水平稍高,两毒株均不能诱导机体产生可检测的IFN-α,表明两毒株感染猪机体后均能引起免疫抑制,其中变异株的体液免疫抑制能力比疫苗株强。再次攻毒试验结果显示,PRRSV感染能阻断同源毒株的复制,缩短异源毒株的病毒血症持续时间至7d左右,说明PRRSV感染能刺激机体产生一定的免疫保护力,但同源免疫保护力高于异源免疫保护力。以上试验结果推测,在PRRSV抗感染过程中,体液免疫并不起重要作用。本试验通过检测同源型病毒抗体复合物、异源型病毒抗体复合物和与PRRSV非相关的免疫复合物对PRRSV的增殖状况的影响,研究了体外PRRSV的抗体依赖性增强作用;通过用灭活苗免疫隐性带毒猪,研究了体内PRRSV的抗体依赖性增强作用。试验结果说明PRRSV在体外和体内均存在抗体依赖性增强作用,这为进一步揭示PRRSV的ADE效应机制提供了理论依据。本试验通过研究感染性和非感染性免疫复合物对PRRSV感染封闭后的猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)的影响,发现用鼠抗FcγRIIB阳性血清封闭PAM细胞后PRRSV感染PAM细胞的能力均增强。表明选择性封闭PAM细胞的FcγRIIB增强PRRSV的抗体依赖性增强作用,非感染性免疫复合物经FcγRIIB增强PRRSV的感染。本研究对于揭示PRRSV的感染分子机理和ADE作用机制具有重要意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR 免疫复合物抗体依赖性增强作用 Fc受体

鸭坦布苏病毒抗体依赖性增强作用相关抗原的鉴定

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鸭坦布苏病毒抗体依赖性增强作用相关抗原的鉴定

作者：杨颖南京农业大学

学位级别：硕士

坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染鸭引发的坦布苏病毒病在2010年爆发于我国东部水禽养殖地区,患病鸭出现采食量下降、产蛋率降低、精神沉郁、共济失调、腹泻和瘫痪等症状,严重的甚至引起死亡,对我国水禽养殖业造成重大的经济损失。... 详细信息

坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染鸭引发的坦布苏病毒病在2010年爆发于我国东部水禽养殖地区,患病鸭出现采食量下降、产蛋率降低、精神沉郁、共济失调、腹泻和瘫痪等症状,严重的甚至引起死亡,对我国水禽养殖业造成重大的经济损失。该病毒属于黄病毒科黄病毒属。黄病毒属中部分病毒被认为在感染时具有抗体依赖性增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE),如登革病毒、西尼罗病毒、日本乙型脑炎病毒等。ADE作用是指某些病毒在感染时,机体产生的针对该病毒的抗体并未发挥清除病原体和抑制感染的作用,反而帮助病毒进入靶细胞,并增强病毒的增殖和感染能力。ADE的存在不仅会引起疾病二次感染时病情加剧,还严重阻碍疫苗的研发。有研究人员在建立TMUV小鼠感染模型时发现TMUV在小鼠上存在ADE现象。本研究旨在确定TMUV在感染鸭时是否具有ADE现象,并鉴定TMUV ADE相关抗原,为进一步研究ADE发生机制,改进疫苗设计,降低ADE效应,有效防控家禽坦布苏病毒病提供理论依据。本研究首先确定TMUV在感染鸭时是否有ADE作用。制备TMUV灭活疫苗免疫健康鸭,获得鸭抗TMUV血清。将TMUV与鸭抗TMUV阳性血清共孵育后感染鸭,或者先注射阳性血清再感染TMUV,均可导致鸭更早出现临床症状,体重增长显著低于病毒单独感染组,血清中病毒含量高于病毒单独感染组。将TMUV与不同稀释度的抗TMUV阳性血清共孵育后感染鸭外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMCs),建立TMUV体外ADE感染模型,结果表明TMUV抗血清可促进病毒在鸭PBMCs上增殖,且阳性血清100倍稀释时ADE效应最明显。因此证实TMUV感染鸭具有ADE效应。此外,TMUV与阳性血清共孵育后感染鸭PBMCs会抑制模式识别受体MDA5和TLR3的转录水平,并且会抑制IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-10、IL-6、IL-2、IL-1β等细胞因子的转录。表明TMUV ADE感染鸭PBMCs会通过抑制模式识别受体以及部分细胞因子的转录表达,抑制细胞内抗病毒免疫反应,从而有利于病毒在细胞内的增殖。为了确定TMUV ADE相关抗原,根据TMUV的抗原结构,对prM蛋白、E蛋白及NS1蛋白这3个主要抗原蛋白进行原核表达,获得重组蛋白,免疫鸭得到相应的鸭抗重组蛋白多克隆抗体;将TMUV与抗各重组蛋白的多克隆抗体共孵育后感染健康鸭,同时设置病毒单独感染组以及空白对照组,从临床症状、体重变化及血清中病毒含量等多个方面鉴定ADE相关抗原。用病毒-血清混合物感染鸭PBMCs,检测病毒含量,比较各重组蛋白抗血清对病毒增殖的促进作用。结果表明,鸭抗prM蛋白血清可加重鸭感染TMUV的症状,促进TMUV在鸭体内以及鸭PBMCs上的增殖,具有ADE作用,故prM蛋白是TMUV ADE相关抗原。prM蛋白在病毒成熟的过程中会被furin蛋白酶识别并酶切,分成pr段与M段,未成熟病毒粒子表面含prM蛋白,成熟病毒粒子表面含M蛋白。为比较prM蛋白与M蛋白相应抗体对TMUV ADE感染的影响,对M蛋白进行基因克隆和原核表达,免疫鸭获得重组蛋白M的多克隆抗体。将TMUV与鸭抗重组蛋白prM和M血清分别共孵育,在鸭PBMCs上进行ADE感染试验,结果表明,M蛋白的抗体也可促进TMUV在鸭PBMCs上增殖,也具有ADE效应。为进一步鉴定prM蛋白与ADE相关的抗原表位,将prM蛋白分为6个截短肽段,分别进行基因扩增和构建原核表达重组质粒,表达与纯化后得到6个重组截短肽。将这6个截短肽分别命名为prM1、prM2、prM3、prM4、prM5和prM6,免疫健康鸭,获得针对各截短肽的多克隆抗体。将TMUV与鸭抗各截短肽血清共孵育,在鸭PBMCs上进行ADE感染试验,比较各截短肽抗血清的ADE效应。结果表明,prM1、prM3和prM6的相应抗体具有较明显的ADE作用,这3个截短肽为prM蛋白的ADE相关抗原表位。

关键词：坦布苏病毒抗体依赖性增强作用 ADE相关抗原 ADE相关抗原表位

猪CD16及其介导PRRSV抗体依赖性增强作用研究

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猪CD16及其介导PRRSV抗体依赖性增强作用研究

作者：谷伟红中国农业科学院

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种急性传染病,是目前严重危害世界养猪业的一种重要病毒病,给养猪业造成了巨大经济损失。为了有效的控制该病的发生,众多科学家从事疫苗的开发和研究。然而,由于动物猪体在感染PRRSV后所产生的免疫反应和疾病的发展过程受多种因素的影响,致使疫苗的免疫效果不尽人意;其中,病毒感染的抗体依赖性增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)是关键影响因素之一。ADE即指机体的抗体水平在未达到中和抗体浓度时,可协助病毒进入靶细胞,提高感染效率。目前,ADE作用已在多个科属的40多种病毒的感染中发现,如登革热病毒、人免疫缺陷病毒、西尼罗河病毒等。与PRRSV相似的是这些病毒多表现为嗜好在免疫细胞中繁殖,容易引发宿主的持续性感染。常规疫苗免疫防制这类具有ADE作用的病毒病时常常难以奏效,动物免疫后,对该病毒的易感性反而会增加。因此,有必要利用病毒模型,探讨ADE在这类病毒中的致病机制。因此,为了更有效的防控PRRS的发生,本课题即从ADE角度出发,阐释了PRRSV的致病机理。本研究发现当亚中和活性的PRRSV特异性抗体存在时,PRRSV体外感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)能力增强,即,亚中和活性的抗体可促进病毒的感染和释放。已有的报道表明,介导ADE效应的细胞表面分子有三种Fcγ受体(FcγRs),即:FcγRⅠ(CD64)、FcγRⅡ(CD32)和FcγRⅢ(CD16)。通过运用荧光定量PCR方法,本研究发现CD16在PAMs的转录水平远远高于CD32和CD64;同时,流式细胞术和Western blotting的结果也表明CD16在PAMs上高效表达。因此,本研究对猪源CD16在PRRSV的ADE效应中发挥的作用进行研究。首先,运用抗CD16的单克隆抗体特异性阻断PAMs表面的CD16,探究CD16在PRRSV的ADE效应中是否发挥作用。结果发现,CD16功能被抗体特异性阻断后,PRRSV亚中和活性的抗体引发的PRRSV的ADE效应显著降低,说明PAMs表面的CD16能够介导PRRSV的ADE。由于PAMs表面存在三种不同的FcγRs,为了特异性研究CD16,本研究在无FcγRs表达的HEK293-T细胞和COS-7细胞上特异性表达猪源CD16,进一步验证CD16介导的ADE效应。研究结果发现,PRRSV-抗体免疫复合物可特异性吸附在HEK293-T/CD16细胞和COS-7/CD16细胞,进而使得PRRSV内化进入细胞。最后,本研究还发现内化的PRRSV可以在这些细胞内发生复制,并释放出具有活性的子代病毒。此外,本研究还证明猪源CD16的高效表达需要和Fc受体γ链的协同表达。本研究对PRRSV的ADE效应提出新的机制,即首次证明CD16能介导PRRSV的ADE,为进一步揭示PRRSV的致病机制提供新理论。本研究提示当动物机体存在亚中和活性的抗体时,PRRSV可能对CD16阳性的细胞具有一定的趋化性,使得PRRSV在感染的过程中有更广泛的分布性,本研究为PRRSV疫苗的研究提供了新思路。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖性增强作用 Fcγ受体

病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制及其意义

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湖南畜牧兽医 2009年第2期 4-7页

作者：王慧明肖兵南郭乐戴强邱美珍湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 湖南省畜牧兽医研究所湖南长沙410131

抗体协助病毒进入靶细胞,提高感染率,这一现象就是抗体依赖性增强作用(Antibody-dependentenhancement,ADE)。抗体介导病毒感染的敏感性增强的例子已经被很多种不同病毒属的感染证明,有充分的理由相信在一方面保护免疫的诱导作用和另一... 详细信息

抗体协助病毒进入靶细胞,提高感染率,这一现象就是抗体依赖性增强作用(Antibody-dependentenhancement,ADE)。抗体介导病毒感染的敏感性增强的例子已经被很多种不同病毒属的感染证明,有充分的理由相信在一方面保护免疫的诱导作用和另一方面增强敏感性的诱导作用之间存在微妙的平衡。ADE作用的存在,使常规疫苗免疫来防制这类病毒病常常难以奏效。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进步,对有ADE现象病毒疫苗的研发具有十分重大的意义。

关键词：抗体依赖性增强作用作用机制疫苗

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病毒的抗体依赖性增强作用及其机制

生物学教学 2012年第5期37卷 5-7页

作者：于天飞李荣秀杨晓杰徐兴军邵淑丽吕建伟黑龙江省齐齐哈尔大学生命科学与农林学院遗传工程重点实验室 161006 上海交通大学生命科学技术学院生物制造实验室 200240

抗体依赖性增强（ADE）作用是指某些病毒在相应抗体协助下复制或感染能力显著增强的现象。使用常规疫苗免疫来防治具有ADE作用的病毒病常常难以奏效,甚至引起某些疾病病情加剧。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得... 详细信息

抗体依赖性增强（ADE）作用是指某些病毒在相应抗体协助下复制或感染能力显著增强的现象。使用常规疫苗免疫来防治具有ADE作用的病毒病常常难以奏效,甚至引起某些疾病病情加剧。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进展,对具有ADE现象病毒有效疫苗的研发具有十分重大的意义。

关键词：病毒抗体依赖性增强作用机制

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登革热疫苗研究进展与挑战

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 635-640页

作者：孙益明杨会强葛永红中国药科大学生命科学与技术学院南京210000 成都生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究室成都610023

登革热是世界范围内流行最为广泛的虫媒病毒感染性疾病之一,由登革病毒(dengue virus,DENV)感染引起。每年约有3.9亿人感染DENV,其中大约有9600万人会出现临床症状,且每20例患者中就有1例患者可能出现严重的登革热并导致休克、内脏出血... 详细信息

登革热是世界范围内流行最为广泛的虫媒病毒感染性疾病之一,由登革病毒(dengue virus,DENV)感染引起。每年约有3.9亿人感染DENV,其中大约有9600万人会出现临床症状,且每20例患者中就有1例患者可能出现严重的登革热并导致休克、内脏出血和死亡。DENV包括4种血清型(1~4),均可以引起不同程度的疾病。目前,没有特定的针对登革热的治疗药物,只有2种疫苗在一些国家获批使用:CYD-TDV和TAK-003。其中适用于9~45岁人群的疫苗CYD-TDV受到抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement,ADE)效应的影响,可能导致更严重的感染。因此,如何减缓或消除ADE的影响成为当前登革热疫苗研究的一个重要问题。除此之外,DENV非结构蛋白对免疫系统的影响也不可忽视。目前,至少有7种登革热疫苗处于不同的研发和临床试验阶段。本综述将主要介绍3种取得重大进展的候选疫苗,并总结规避ADE效应的方法和以非结构蛋白为免疫原的登革热疫苗研发进展。

关键词：登革病毒登革热疫苗抗体依赖性增强作用非结构蛋白

CD163和Sn受体胞外区功能结构域在PRRSV-ADE中的作用

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CD163和Sn受体胞外区功能结构域在PRRSV-ADE中的作用

作者：冯亚琼河南农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征疫病是我国重要的传染病,猪繁殖与呼吸综合征病毒是该病的致病病毒。该病毒感染后不仅造成猪只的免疫抑制现象,还能够引发猪只的持续性感染。有研究表明FcγR介导的PRRSV-抗体感染性复合物感染巨噬细胞是引起PRRSV持... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征疫病是我国重要的传染病,猪繁殖与呼吸综合征病毒是该病的致病病毒。该病毒感染后不仅造成猪只的免疫抑制现象,还能够引发猪只的持续性感染。有研究表明FcγR介导的PRRSV-抗体感染性复合物感染巨噬细胞是引起PRRSV持续性感染的原因之一,然而该作用机制并不十分完善。我们的研究发现PRRSV-抗体感染性复合物感染巨噬细胞的过程可能和病毒受体也有关。通过研究CD163分子和Sn受体在PRRSV感染中的ADE作用,为进一步完善抗体介导的PRRSV持续感染机制,对PRRS新型疫苗的研制具有重要的指导意义。但是当前关于CD163分子和Sn受体在PRRSV入侵PAM细胞整个过程当中的分子机制以及PRRSV感染过程中ADE机制不是非常了解,PRRSV或者是PRRSV-抗体感染性复合物感染机体的过程也不清楚,也不确定CD163分子和Sn受体功能结构域发挥作用的具体位置。本试验将CD163分子胞外区的九个结构域分为四个片段,即CD163-P1(SRCR1-2),CD163-P2(SRCR3-4),CD163-P3(SRCR5-6)和CD163-P4(SRCR7-9),将Sn受体胞外区的17个结构域分为9个片段,即Sn1(1～150aa),Sn2(137～228aa),Sn3(236～406aa),Sn4(413～594aa),Sn5(599～791aa),Sn6(796～979aa),Sn7(981～1150aa),Sn8(1170～1248aa),Sn9(1441～1631aa)。用已构建好的CD163分子和Sn受体不同片段的结构域重组质粒转化进入表达菌BL21(DE3)中进行原核表达,并用不同浓度的尿素对表达的重组蛋白进行纯化。收集PAM细胞,铺于细胞培养板中,使PAM细胞贴壁,然后用CD163和Sn不同片段的不同稀释度的结构域重组蛋白与等体积的PRRSV或4倍稀释的PRRSV-IgG感染性复合物混合作用1h后,再感染PAM细胞,并设置阴性对照组,实时定量PCR方法检测PRRSV拷贝数,Graph Pad Prism 5软件对所得到的数据进行处理。本研究首先从PRRSV抗原抗体检测阴性猪的肺脏中收集PAM细胞,提取细胞总RNA,根据Sn(Gen Bank:JX070181.1)的基因序列及对Sn胞外区片段的划分,分别设计一对包含Sn6片段和Sn8片段结构域的特异性引物,再用RT-PCR方法扩增出Sn6和Sn8两个片段结构域基因,长度分别为735 bp和567 bp,并将含有结构域基因的这两个片段亚克隆到载体PET-32a质粒中,成功得到重组表达载体质粒PET-Sn6、PET-Sn8。将构建好的PET-Sn6和PET-Sn8重组质粒和实验室已经保存的PET-CD163-P1,PET-CD163-P2,PET-CD163-P3,PET-CD163-P4,PET-Sn1,PET-Sn2,PET-Sn3,PET-Sn4,PET-Sn5,PET-Sn7和PET-Sn9重组质粒转化到表达菌BL21(DE3)中,通过最佳IPTG诱导表达的时间和最适诱导表达的浓度,大量表达CD163-P1,CD163-P2,CD163-P3和CD163-P4,Sn1,Sn2,Sn3,Sn4,Sn5,Sn6,Sn7,Sn8和Sn9重组蛋白,并用不同浓度的尿素洗涤纯化重组蛋白,然后用紫外分光光度计测定蛋白浓度。为了探索CD163和Sn受体功能结构域在PRRSV感染PAM过程中发挥什么样的作用,将试验一所制备的CD163-P1,CD163-P2,CD163-P3和CD163-P4,Sn1,Sn2,Sn3,Sn4,Sn5,Sn6,Sn7,Sn8和Sn9结构域重组蛋白,分别用不加血清的1640营养液稀释为2.0mg/m L,1.0mg/m L,0.2mg/m L三个不同的浓度,再分别与等体积的200个TCID50/0.1m L PRRSV病毒充分混匀后放置于37℃培养箱作用1h,再感染PAM细胞孵育1h后,补加营养液作用48h,同时设置阴性对照组,用已建立的绝对荧光定量PCR方法检测感染细胞中PRRSV的拷贝数,并用Graph Pad Prism 5软件对所得到的数据进行处理。由试验结果可以看出,与PRRSV单纯感染PAM细胞组相比,CD163和Sn各片段不同稀释度的结构域重组蛋白与PRRSV混合作用感染48h后,PRRSV的拷贝数均明显低于对照组PRRSV的拷贝数,说明CD163和Sn各片段不同稀释度的结构域重组蛋白与PAM细胞上的CD163和Sn受体存在竞争与PRRSV结合的作用,并且重组蛋白浓度越高,竞争抑制作用越明显。在CD163各片段不同稀释度的结构域蛋白中,2.0mg/m L浓度的各片段蛋白中CD163-P1的抑制作用较明显,1.0mg/m L浓度的各片段

关键词： PRRSV 重组蛋白 PRRSV-IgG CD163 Sn 抗体依赖性增强作用