检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=抗人A型红细胞单克隆抗体"

共 2 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

引用

作者：孟文霞河北医科大学

学位级别：硕士

目的：制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体，建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等，本实验是用人A型红细胞作指示剂，用间接凝集反应测定p24抗原，方法简便、快速，无污染，比较... 详细信息

目的：制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体，建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等，本实验是用人A型红细胞作指示剂，用间接凝集反应测定p24抗原，方法简便、快速，无污染，比较敏感。方法：基因工程p24抗原免疫小鼠4次，历时2个月，取脾细胞与骨髓瘤细胞株Sp2／0，用PEG融合，HAT选择培养和间接ELISA筛选分泌抗p24抗体阳性的杂交瘤细胞，三次克隆化后得稳定分泌抗p24抗体的杂交瘤细胞株。选其中一株2-E，与本室保存的抗人A型红细胞杂交瘤株S，作为再杂交的备用细胞株，分别用不同浓度的8-氮鸟嘌呤(8-Ag)和5-溴-脱氧尿嘧啶对两株细胞进行驯化培养，使分别成为次黄嘌岭鸟嘌吟磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷株2-E-A和胸苷激酶(TK)缺陷株S-B，并测定其Ig类别。取驯化好并处于对数生长期的2-E-A和S-B细胞，再常规融合和筛选，三次克隆化后得稳定分泌双特异性抗体的杂交-杂交瘤细胞株6株。选其中一株3-H做杂交-杂交瘤细胞染色体计数，同时计数两母株2-E-A和S-B的染色体数：制备腹水型和上清型抗体，用三种方法同时检测其中的双特异性抗体、单特异性抗人红细胞抗体和抗p24抗体，即红细胞固相吸附法测双特异中文摘要性抗体，红细胞凝集试验测单特异性抗人A型红细胞抗体，间接ELISA法测抗p24抗体;用腹水型抗体做耐热性及耐冻融实验。耐热性实验为56”C 30分钟，37C保存 l——7天，及4℃保存7无。耐冻融实验为取腹水于上0℃ 冻实后室温下自然融化，反复6次后测效价。由于杂交－杂交瘤株呵同时产主抗p24和红细胞的双特异性抗体、抗t p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体，所以对杂交瘤培养上清和腹水型抗体进行纯化，以获得较纯双持异性抗体。方法是先用硫酸绥盐析，再过亲和层析柱，即 3 3％饱和硫酸按沉淀后，透祈过夜，上 p24抗原做配体的滨化氰活化的Sepharose 4B柱，流洗掉杂蛋白和抗人红细胞单特异性抗体后，再洗脱并收集双特异性抗体。用双特异性抗体致敏人A型红细胞做指示剂，以抗p24单特异件单克隆抗体9A7做交联剂，建立间接血凝检测p24 抗原的新方法，并初步应用于检测系列稀释的p24抗原以确定测定的敏感性。结果：获得5株产抗p24单克隆抗体的稳定杂交瘤c 选择其中的2工。细胞株作为再杂交的备用细胞，其腹水型抗体的ELISA效价为1：160万。用于再杂交的另一细胞株为本室保存的分泌抗人a型红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株S;，其血凝效价为l：16000。测定2＊4及SZ单克隆抗体的 Ig类别，分别为 IgGZa 不 IgG3。用 20。g／ml Skg驯化 2－E4，得 HGPRT缺陷株 2上4人。用 20。g．／m1 5－BrdU驯化S。，得TK缺陷株S。－B。2－E4＊和 S。＊在HAT 液中培养，均于一周内死亡。取2上厂人和 S厂士常规融合筛选后，经亚克隆化3次，获得6株杂交－杂交瘤稳定株。 2 千文摘要选其中的3十;做染色体计数，为132土15条，同时计数两母株的染色体数，2上。为 84土 9条，S。为 89士 9条J十;的腹水型和上清型双特异性抗体的效价分别为1：16000 和 1：64，同时测定腹水型抗体抗p24抗体活性及抗人A 型红细胞凝集抗体活性，效价分别为 1：800和 1：16000。证明3十;细胞株不是只分泌双特异性抗体。将此混合抗体盐析后过p24亲和层祈柱，流洗出的杂蛋白亘接血凝试验阳性，再洗脱出的p24特异性蛋白有两个峰，第一个峰双特异性抗体及抗p24抗体测定均阳性，第一个峰仅抗 p24抗体阳性，双特异性抗体阴性，两峰血凝试验均为阴性。证明第一个峰是纯化的双特异性抗体。这样，分离出双特异性抗体，并证实杂交－杂交瘤除分泌抗p24和人红细胞的双特异性抗体外，还分泌抗p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体。取杂交－杂交瘤株3叫;的腹水鉴定双特异性抗体的耐热性和耐冻融性，结果56℃作用30分钟效价下降一个稀释度;37℃放置2大后效价下

关键词：抗HIV p24单克隆抗体抗人a型红细胞单克隆抗体杂交-杂交瘤双特异性抗体HIV p24抗原的检测红细胞间接凝集

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

抗HIVp24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

抗HIVp24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

引用

中国免疫学会第四届学术大会

作者：杨丽娟王润田王蕙芬河北医科大学基础所免疫室

目的:制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体,建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等,本实验是用人A型红细胞作指示剂,用间接凝集反应测定p24抗原,方法简便、快速,无污染,比较敏感。方... 详细信息

目的:制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体,建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等,本实验是用人A型红细胞作指示剂,用间接凝集反应测定p24抗原,方法简便、快速,无污染,比较敏感。方法:基因工程p24抗原免疫小鼠4次,历时2个月,取脾细胞与骨髓瘤细胞株Sp2/0,用PEG融合,HAT选择培养和间接ELISA筛选分泌抗p24抗体阳性的杂交瘤细胞,三次克隆化后得稳定分泌抗p24抗体的杂交瘤细胞株。选其中一株2—E,与本室保存的抗人A型红细胞杂交瘤株S,作为再杂交的备用细胞株,分别用不同浓度的8-氮鸟嘌呤(8—Ag)和5-溴-脱氧尿嘧啶对两株细胞进行驯化培养,使分别成为次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷株2-E-A和胸苷激酶(TK)缺陷株S-B,并测定其Ig类别。取驯化好并处于对数生长期的2—E-A和S-B细胞,再常规融合和筛选,三次克隆化后得稳定分泌双特异性抗体的杂交-杂交瘤细胞株6株。选其中一株3—H做杂交-杂交瘤细胞染色体计数,同时计数两母株2—E-A和S-B的染色体数;制备腹水型和上清型抗体,用三种方法同时检测其中的双特异性抗体、单特异性抗人红细胞抗体和抗p24抗体,即红细胞固相吸附法测双特异性抗体,红细胞凝集试验测单特异性抗人A型红细胞抗体,间接ELISA法测抗p24抗体;用腹水型抗体做耐热性及耐冻融实验。耐热性实验为56℃30分钟,37℃保存1—7天,及4℃保存7天。耐冻融实验为取腹水于-20℃冻实后室温下自然融化,反复6次后测效价。由于杂交-杂交瘤株可同时产生抗p24和红细胞的双特异性抗体、抗p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体,所以对杂交瘤培养上清和腹水型抗体进行纯化,以获得较纯双特异性抗体。方法是先用硫酸铵盐析,再过亲和层析柱,即33%饱和硫酸铵沉淀后,透析过夜,上p24抗原做配体的溴化氰活化的Sepharose 4B柱,流洗掉杂蛋白和抗人红细胞单特异性抗体后,再洗脱并收集双特异性抗体。用双特异性抗体致敏人A型红细胞做指示剂,以抗p24单特异性单克隆抗体9—A7做交联剂,建立间接血凝检测p24抗原的新方法,并初步应用于检测系列稀释的p24抗原以确定测定的敏感性。结果:获得5株产抗p24单克隆抗体的稳定杂交瘤。选择其中的2—E细胞株作为再杂交的备用细胞,其腹水型抗体的ELISA效价为1:160万。用于再杂交的另一细胞株为本室保存的分泌抗人a型红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株S,其血凝效价为1:16000。测定2—E及S单克隆抗体的Ig类别,分别为IgG2a和IgG3。用20μg/ml 8—Ag驯化2—E,得HGPRT缺陷株2—E-A。用20μg/ml 5—BrdU驯化S,得TK缺陷株S-B。2—E-A和S-B在HAT液中培养,均于一周内死亡。取2-E-A和S-B常规融合筛选后,经亚克隆化3次,获得6株杂交-杂交瘤稳定株。选其中的3—H做染色体计数,为132±15条,同时计数两母株的染色体数,2-E为84±9条,S为89±9条。3—H的腹水型和上清型双特异性抗体的效价分别为1:16000和1:64,同时测定腹水型抗体抗p24抗体活性及抗人A型红细胞凝集抗体活性,效价分别为1:800和1:16000。证明3—H细胞株不是只分泌双特异性抗体。将此混合抗体盐析后过p24亲和层析柱,流洗出的杂蛋白直接血凝试验阳性,再洗脱出的p24特异性蛋白有两个峰,第一个峰双特异性抗体及抗p24抗体测定均阳性,第二个峰仅抗p24抗体阳性,双特异性抗体阴性,两峰血凝试验均为阴性。证明第一个峰是纯化的双特异性抗体。这样,分离出双特异性抗体,并证实杂交-杂交瘤除分泌抗p24和人红细胞的双特异性抗体外,还分泌抗p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体。取杂交-杂交瘤株3-H的腹水鉴定双特异性抗体的耐热性和耐冻融性,结果56℃作用30分钟效价下降一个稀释度;37℃放置2天后效价下降一个稀释度至1:8000,37℃作用5天后效价降至1:4000,一直保存至7天效价再下降一个稀释度至1:2000。冻融6次放价不变。用此双特异性抗体建立了间接血凝测定HIV p24的新方法,其测HIV p24抗原的敏感性可达400pg/mL。结论:①制得分泌特异性抗HIV p24单克隆抗体杂交瘤细胞5株;②驯化出HGPRT酶缺陷的分泌抗p24单克隆抗体的杂交瘤细胞株2—E-A,及TK酶缺陷的分泌抗人a型红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株S-B;③获得6株分泌双特异性抗体的杂交-杂交瘤细胞株,其中3—H的染色体数为132±15条;④亲和层析可纯化出双特异性抗体。用此纯化的双特异性抗体建立的间接血凝测定HIV p24抗原的新方法,操作简便,敏感性为400pg/mL。

关键词：抗HIV p24单克隆抗体抗人a型红细胞单克隆抗体杂交—杂交瘤双特异性抗体 HIVp24抗原的检测红细胞间接凝集

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：