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利用比较基因组学方法对猪BACDNA序列分析来研究抑肌素基因的调控

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中国科学（C辑） 2004年第4期34卷 364-375页

作者：于政权李岩孟庆勇袁晶赵志辉李慰颜炳学于舒洋胡晓湘樊宝良李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094 北京华大基因研究中心北京100101

抑肌素(GDF8, MSTN)是调控骨骼肌发育的TGF-b超家族的一员. 作为负调节因子, 抑肌素通过控制肌纤维的大小和数量来调控骨骼肌的发育. 为了更深入研究它的表达和调控模式, 我们利用比较基因组学方法对一个大约170 kb的猪BAC序列与人和... 详细信息

抑肌素(GDF8, MSTN)是调控骨骼肌发育的TGF-b超家族的一员. 作为负调节因子, 抑肌素通过控制肌纤维的大小和数量来调控骨骼肌的发育. 为了更深入研究它的表达和调控模式, 我们利用比较基因组学方法对一个大约170 kb的猪BAC序列与人和小鼠的相应序列进行了分析, 这段基因组序列的特点是富含分散型重复而G+C含量较低. 抑肌素基因的同源性在猪、人和小鼠3种生物之间非常高, 正如所希望的, 在人与猪之间的同源性高于它们与小鼠的同源性. 一个有意思的特征是在抑肌素启动子CCAAT盒下游有两个TA盒, 进一步分析表明TA盒1负责在人、猪中转录, 而TA盒2在小鼠中起作用; 另一个的特征是在猪抑肌素3′UTR有两个polyA信号序列(AATAAA). 进而, 我们在进化保守区域分析到许多潜在的转录因子结合位点, 它们可能与抑肌素的调控有关. 许多潜在的转录调控因子在肌肉的发育中起重要作用, 暗示着抑肌素与这些因子的复杂相互作用可能是正常肌肉发育所必需的(文中所提到的序列已提交到GenBank, 序号为: AY208121).

关键词：抑肌素基因比较基因组学转录因子肌肉发育基因调控疾病治疗

绵羊和山羊抑肌素基因的基因组结构和序列分析

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自然科学进展 2003年第1期13卷 87-89页

作者：潘求真陈慧勇连正兴李宁吴常信中国农业大学动物科技学院北京100094

提取文登奶山羊和多赛特绵羊的基因组DNA,依据绵羊、奶牛、猪的抑肌素基因外显子区序列同源性设计并合成PCR引物进行扩增,将所获得的DNA片段克隆进行序列测定,绵羊和山羊内含子Ⅰ的序列同源性为98.2％,内含子Ⅱ的序列同源性为98％,内含... 详细信息

提取文登奶山羊和多赛特绵羊的基因组DNA,依据绵羊、奶牛、猪的抑肌素基因外显子区序列同源性设计并合成PCR引物进行扩增,将所获得的DNA片段克隆进行序列测定,绵羊和山羊内含子Ⅰ的序列同源性为98.2％,内含子Ⅱ的序列同源性为98％,内含子Ⅱ中的重复序列明显多于内含子Ⅰ。DNA序列的聚类分析结果与生物进化过程吻合,说明内含子Ⅱ的复杂程度高于内含子Ⅰ,且进化保守性很强,所测定的序列已在GenBank登录。

关键词：绵羊山羊抑肌素基因基因组结构序列分析内含子外显子生长转化因子 PCR方法

母体日粮蛋白水平对仔猪抑肌素基因表达量及肌纤维直径的影响

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粮食与饲料工业 2014年第7期 50-52页

作者：王立辛李立山辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121001

试验选择15头荷包后备母猪,采用实时荧光定量PCR技术,研究妊娠期母体不同蛋白水平日粮对仔猪抑肌素基因表达量及肌纤维直径的影响。结果表明:母体日粮蛋白水平对仔猪抑肌素基因的表达量影响虽不显著(P>0.05),但低蛋白水平有促进仔猪抑... 详细信息

试验选择15头荷包后备母猪,采用实时荧光定量PCR技术,研究妊娠期母体不同蛋白水平日粮对仔猪抑肌素基因表达量及肌纤维直径的影响。结果表明:母体日粮蛋白水平对仔猪抑肌素基因的表达量影响虽不显著(P>0.05),但低蛋白水平有促进仔猪抑肌素基因表达的趋势;母体日粮蛋白水平对仔猪肌纤维直径具有显著的影响(P肌纤维直径;抑肌素基因表达量与肌纤维直径呈显著负相关(P<0.05)。

关键词：母猪母体蛋白水平肌纤维直径抑肌素基因基因表达量

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不同品种猪抑肌素基因启动区的RFLP分析

畜牧与兽医 2002年第10期34卷 1-2页

作者：杨秀芹刘娣李景芬东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030

瘦肉率是猪育种中重要的目标性状之一 ,其大小与骨骼肌的量密切相关。猪抑肌素基因是与瘦肉率有关的基因之一 ,本研究以大白、长白、杜洛克、民猪、三江白猪和军牧Ⅰ号为研究对象 ,采用限制性酶切片段生长度多态性 (RFLP)分子标记法对... 详细信息

瘦肉率是猪育种中重要的目标性状之一 ,其大小与骨骼肌的量密切相关。猪抑肌素基因是与瘦肉率有关的基因之一 ,本研究以大白、长白、杜洛克、民猪、三江白猪和军牧Ⅰ号为研究对象 ,采用限制性酶切片段生长度多态性 (RFLP)分子标记法对抑肌素基因的启动区进行了酶切多态性分析。结果表明 :大白、长白、杜洛克以等位基因T为主 :三江白猪和军牧Ⅰ号全部是TT型 ;民猪

关键词：品种猪抑肌素基因启动区 RFLP分析瘦肉率

猪抑肌素基因剔除成纤维细胞系的建立及体外发育

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猪抑肌素基因剔除成纤维细胞系的建立及体外发育

作者：管艳慧东北农业大学

学位级别：硕士

猪抑肌素基因myostatin又称GDF-8(growth/differentiation factor-8),属于TGF-β超家族,是具有调控肌肉重量的一种分泌型糖蛋白因子。该基因与骨骼肌总量的调节有关,其基因编码区保守部分的突变将使得肌肉的发育失去负调控作用而导致肌... 详细信息

猪抑肌素基因myostatin又称GDF-8(growth/differentiation factor-8),属于TGF-β超家族,是具有调控肌肉重量的一种分泌型糖蛋白因子。该基因与骨骼肌总量的调节有关,其基因编码区保守部分的突变将使得肌肉的发育失去负调控作用而导致肌肉肥大。在自然界中存在Myostatin基因突变导致的比利时蓝牛和皮特蒙特牛的双肌表型,该基因的发现,为育种工作者提供了新的科研思路,为进一步提高动物产肉性能提供了有力的事实依据,为分子水平定向育种奠定了坚实的理论基础。因此育种工作者除了可以利用现有的双肌动物进行繁育外,还可以采用基因打靶技术来剔除Myostatin基因,获得转基因克隆动物,以达到改进肌肉质量和重量的目的,为家畜的高质高效生产提供新技术。目前,基因打靶技术已经成为研究基因功能的重要技术之一。它是80年代后半期基于DNA同源重组原理发展起来的一门新技术,是一种定向改变细胞或生物个体遗传信息的实验手段。通过对生物体遗传信息的定向修饰,并使修饰后的遗传信息在生物体内遗传,表达突变性状,从而达到对其基因功能的研究。本实验采用胰酶消化法和组织块法,建立大白猪的胎儿成纤维细胞系;采用脂质体转染法将构建好的打靶载体导入大白猪胎儿成纤维细胞中,并对转染条件:脂质体浓度、质粒微克数、转染时间、G418筛选浓度和维持浓度等条件进行了优化;转染后的大白猪胎儿成纤维细胞采用G418筛选,然后继续用含G418和GANC的培养液维持筛选;最后采用PCR法鉴定所得细胞株;将所获得的阳性细胞移入去核的猪卵母细胞内,构建克隆胚,进行体外发育。本研究认为,采用胰酶消化法和组织块法均可以很好的建立大白猪的胎儿成纤维细胞系;脂质体4μl,质粒2μg,转染6 h为最优转染体系;G418筛选浓度采用300μg/ml,维持浓度采用200μg/ml,GANC采用2μmol/L的体系为最优筛选体系。经PCR鉴定后,成功的得到了猪抑肌素基因剔除的成纤维细胞系;核移植后获得的重构胚在体外发育至囊胚。

关键词：猪抑肌素基因成纤维细胞基因打靶转染核移植囊胚

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抑肌素基因研究进展

畜牧兽医杂志 2000年第1期19卷 13-16页

作者：刘娣刘和平张向吉徐继艳孙贺英东北农业大学动物科技学院哈尔滨150030 黑龙江省鹤岗市动物检疫站 154100

总结了 TGF-β超家族的功能、成员和特点 ,并对其成员之一抑肌素基因(MSTN或 GDF- 8)在基因本质研究、基因生物学功能研究和基因的应用研究等方面进行了综述。阐明了该基因研究的意义和应用前景。

关键词：抑肌素基因 TGF-β超家族生物学功能应用

利木赞牛抑肌素基因Q204X及nt821突变快速检测方法

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家畜生态学报 2007年第6期28卷 38-40页

作者：徐晶赵锐峰李炳霞赵辉邱继文孙志民李德柏吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 长春肉牛发展有限公司吉林长春130117 山东省潍坊市滨海经济开发区畜牧站山东潍坊262737

抑肌素(GDF8)是骨骼肌细胞生长的重要负调控因子。抑肌素基因突变是牛"双肌"性状形成的分子遗传基础,在不同牛品种中存在着不同的抑肌素基因突变类型,在利木赞品种中,"双肌"性状主要是抑肌素基因第2外显子的Q204X型突变及第3外显子nt82... 详细信息

抑肌素(GDF8)是骨骼肌细胞生长的重要负调控因子。抑肌素基因突变是牛"双肌"性状形成的分子遗传基础,在不同牛品种中存在着不同的抑肌素基因突变类型,在利木赞品种中,"双肌"性状主要是抑肌素基因第2外显子的Q204X型突变及第3外显子nt821突变。本研究报道一种新的检测该突变的简便方法。应用突变型与正常型引物在一次PCR反应中同时检测出不同的等位基因。对Q204X突变型PCR产物克隆测序分析表明,该片段确实含有一个能导致抑肌素功能缺陷的Q204X突变。

关键词：抑肌素基因 Q204X突变 nt821突变利木赞

猪肌肉生长抑制素基因5'调控区的单倍型鉴定及其与生产性能的关系

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猪肌肉生长抑制素基因5'调控区的单倍型鉴定及其与生产性能的关系

作者：徐勤迎山东农业大学

学位级别：硕士

肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN;又称growth differentiation factor-8, GDF8;以下简称抑肌素)是肌肉生长发育的特异性负调控因子。目前已在欧洲肉牛、绵羊、狗以及人上发现抑肌素基因的自然突变,这些都导致了肌肉量明显增加,体型比正... 详细信息

肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN;又称growth differentiation factor-8, GDF8;以下简称抑肌素)是肌肉生长发育的特异性负调控因子。目前已在欧洲肉牛、绵羊、狗以及人上发现抑肌素基因的自然突变,这些都导致了肌肉量明显增加,体型比正常个体肥大等表型。但是到目前为止还没有在猪上发现导致骨骼肌肥大的类似报道。本论文对猪抑肌素基因5′调控区的突变进行研究,期望找到对猪生长有利的分子标记。本文以包括521头杜洛克、432头大约克、148头长白猪、32头莱芜猪、33头大蒲莲猪和9头野猪在内的6个猪种为实验材料,同时检测了猪抑肌素基因5′调控区存在的435 G/A, 447 G/A和879 T/A三个多态性位点。发现在所检测的个体中共存在4种单倍型,我们分别把按位点区分的基因型以及按单双倍型的区分与杜洛克及大约克猪的初生重等在内的早期生长性状做了关联分析。本研究获得以下结果:1.在猪抑肌素基因5′调控区435位点,杜洛克猪是以G碱基占优势,其余猪种中则是以A碱基为优势;在447位点杜洛克猪、莱芜猪及大蒲莲猪中A碱基的比例占绝对的优势,大约克猪及长白猪则是相反;在879位点莱芜猪和大蒲莲猪中A的碱基比例占绝对的优势,杜洛克猪、大约克猪则是相反,长白猪中该位点全部为T碱基。在杜洛克猪中H2(435G-447A-879T)为优势单倍型,双倍型则是H1H2和H2H2占优势;在大约克中H1(435A-447G-879T)是优势单倍型,双倍型则是H1H1和H1H2占优势;在长白猪中只有H1和H2两种单倍型频率,双倍型则是H1H1和H1H2占优势;莱芜猪和大蒲莲猪中H3(435A-447A-879A)单倍型占绝对优势,双倍型以H3H3占绝对优势;第四种单倍型H4(435A-447A-879T)只在野猪中有发现,9头野猪中7头为H3H3双倍型,一头为H2H3双倍型,另外一头为H3H4双倍型。2.对435、447和879这三个位点分别进行哈代温伯格平衡检验,发现除大约克猪435位点处于接近非平衡状态(p=0.052),其余不同品种猪这三个位点均处于平衡状态(p>0.05)。连锁不平衡的检验结果发现大蒲莲猪和莱芜猪的435与447位点之间不处于连锁状态,其余不同品种猪的两位点之间均处于连锁状态。以这6种猪中检测到的4个单倍型构建无根系统发育树,结果显示H4单倍型与其余3种单倍型的遗传距离最近,推测H1、H2及H3单倍型都是由H4单倍型突变而来的。3.三个SNP位点与杜洛克和大约克猪生产性能的关联分析发现:在SNP435位点,AA基因型的杜洛克猪21日龄体重和0-21日龄平均日增重的最小二乘均值均高于GG型,差异接近显著(P=0.0531)。其余不同时期各项分析结果差异不显著(P>0.1)。在SNP447位点,无论在杜洛克,还是在大约克,在不同时期3种基因型间的生产性能差异不显著(P>0.1)。在SNP879位点,TA基因型的杜洛克猪21日龄体重及0-21日龄平均日增重的最小二乘均值均显著高于TT型个体(P基因型的21-70日龄平均日增重最小二乘均值显著高于TA基因型个体(P基因型的21日龄体重及0-21日龄平均日增重最小二乘均值均显著高于TA基因型个体(P抑肌素基因H1H1双倍型做为其中的一个选择指标。

关键词：猪抑肌素基因单核苷酸突变 PCR-SSCP 直接测序体重平均日增重