检索结果-南通市图书馆

同方期刊数据库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

抗抑制素α纳米抗体的载体构建及功能鉴定

抗抑制素α纳米抗体的载体构建及功能鉴定

作者：贾昊天石河子大学

学位级别：硕士

目的:抑制素被认为是绵羊卵泡发育的负调控蛋白之一,本研究针对新疆地区哈萨克羊繁殖力低、乏情周期长等问题,以本实验室保存的抑制素α亚基基因(INHα)靶向抑制素特异性纳米抗体肽段为基础材料,在构建原核表达载体的基础上,利用Elisa... 详细信息

目的:抑制素被认为是绵羊卵泡发育的负调控蛋白之一,本研究针对新疆地区哈萨克羊繁殖力低、乏情周期长等问题,以本实验室保存的抑制素α亚基基因(INHα)靶向抑制素特异性纳米抗体肽段为基础材料,在构建原核表达载体的基础上,利用Elisa等分子生物技术验证其与抑制蛋白的亲和性。进一步通过动物免疫实验初步评价该肽段对绵羊发情季节内源性抑制素的免疫效果,并系统分析由此引起的促卵泡素等相关激素的变化情况。方法:本实验(1)对本课题组前期从噬菌体文库中筛选出的一株对抑制素αELISA显示阳性的噬菌体载体菌株Nb4进行基因克隆,并确定其片段大小以及模板片段的突变情况;进一步设计带酶切位点的特异性引物,利用常规分子生物技术构建Nb4基因靶向原核表达载体pET 32a-Nb4并对其进行双酶切电泳鉴定及测序分析。(2)对构建好的Nb4基因原核表达载体及INHα基因原核表达载体在大肠杆菌表达系统中进行表达形式及最佳诱导时间的鉴定并进行蛋白纯化,进一步利用Western blot、Elisa等技术检测蛋白大小以及Nb4抗体与抑制素蛋白的亲和性;(3)随机挑选52只发情时间相近并处于间情期的成年阿勒泰羊随机分为4组,依次作为抑制素α重组蛋白+佐剂免疫组(A组),抑制素α重组蛋白免疫组(B组),抗抑制素α纳米抗体重组蛋白免疫组(C组),生理盐水组(D组),十天后再进行一次加强免疫。分别于免疫前和免疫后三天对其进行颈静脉采血,使用绵羊生殖激素ELISA测定试剂盒测定分析绵羊血清中六种相关生殖激素的含量,并分析六种激素在绵羊血液中的变化情况。结果:(1)pET 32a-Nb4原核表达菌株测序结果正确且无突变情况,成功构建了Nb4基因原核表达载体;(2)Nb4基因原核菌株在37℃、170r/min、IPTG浓度为1 mg/m L条件下的最佳诱导时间为3 h,以包涵体的形式表达,且Nb4基因原核表达蛋白和抑制素α基因原核表达蛋白纯化后SDS-PAGE电泳显示成功诱导表达Nb4和抑制素α,且纯化后蛋白无杂带;Elisa结果显示原核表达的抗抑制素α纳米抗体与抑制素α蛋白的结合活性在纳克范围内;(3)SPSS25.0统计学分析显示免疫后A组INHA含量和C组INHA、PROG含量与D组相比存在显著性差异(P0.05)。结论:抑制素α蛋白免疫和抗抑制素α纳米抗体蛋白免疫均对绵羊血液中抑制素的合成有抑制作用,且抗抑制素α纳米抗体免疫对抑制素的抑制效果强于抑制素α蛋白主动免疫效果。

关键词：抑制素α 纳米抗体原核表达生殖激素排卵率

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

抑制素α在雄性大鼠不同组织的表达分析

解剖学杂志 2011年第3期34卷 298-301,338页

作者：刘燕熊承良黄翔胡廉官黄涛华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430000

目的：了解抑制素α（inhibin α）在雄性大鼠各种组织中的定位及表达情况。方法：成年SD雄性大鼠，水合氯醛麻醉后取睾丸、附睾、肾、。肾上腺及肝组织，采用免疫组织化学、免疫印迹法和荧光定量PCR方法检测抑制素α在大鼠各组织中的... 详细信息

目的：了解抑制素α（inhibin α）在雄性大鼠各种组织中的定位及表达情况。方法：成年SD雄性大鼠，水合氯醛麻醉后取睾丸、附睾、肾、。肾上腺及肝组织，采用免疫组织化学、免疫印迹法和荧光定量PCR方法检测抑制素α在大鼠各组织中的定位及mRNA的表达水平。结果：抑制素α在大鼠睾丸、附睾、肾、肾上腺组织中有表达，在肝组织中未见表达。其mR—NA水平在各组织中的表达量依次为肾〉肾上腺〉睾丸〉附睾〉肝。结论：在雄性大鼠几种不同的组织比较显示抑制素α蛋白表达量与mRNA表达水平不一致。

关键词：大鼠抑制素α 免疫组织化学荧光定量PCR

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

抗抑制素α纳米抗体真核表达载体的构建

今日畜牧兽医 2023年第1期39卷 16-17页

作者：贾昊天马继福吾热力哈孜·哈孜汗石河子大学动物科技学院 832000

为探究抗抑制素α纳米抗体在动物繁殖方面的功能,本实验使用本实验室筛选出的高特异性抗抑制素α纳米抗体(Nb4)基因,对其进行真核表达载体的构建,以期能为解决普通抑制素α免疫制剂产量不足和免疫原性较差的问题,更希望为提高绵羊繁殖... 详细信息

为探究抗抑制素α纳米抗体在动物繁殖方面的功能,本实验使用本实验室筛选出的高特异性抗抑制素α纳米抗体(Nb4)基因,对其进行真核表达载体的构建,以期能为解决普通抑制素α免疫制剂产量不足和免疫原性较差的问题,更希望为提高绵羊繁殖力做出贡献。

关键词：纳米抗体抑制素α 真核表达

Sf1,Wnt和cAMP信号通路协同参与抑制素α基因转录的调控

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学：生命科学 2013年第9期43卷 730-737页

作者：季韶洋李蕾李喜霞张君郑乔松陈军高飞刘以训中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100101 中国科学院大学北京100049

抑制素仪是抑制素组成性蛋白的亚基之一．它广泛表达于睾丸、卵巢和肾上腺．敲除抑制素α亚基的雄性小鼠常具有性腺基质细胞瘤的表型，这提示，抑制素α亚基可能在性腺发育过程中发挥重要的作用．据报道，类固醇生成因子1（Sf1）能与Wnt... 详细信息

抑制素仪是抑制素组成性蛋白的亚基之一．它广泛表达于睾丸、卵巢和肾上腺．敲除抑制素α亚基的雄性小鼠常具有性腺基质细胞瘤的表型，这提示，抑制素α亚基可能在性腺发育过程中发挥重要的作用．据报道，类固醇生成因子1（Sf1）能与Wnt或cAMP信号通路协同诱导抑制素α亚基的表达，然而Sf1，Wnt和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基表达的分子机制仍然未知．本研究发现，cAMP和wnt信号通路对于协同Sf1转录调控抑制素α亚基的表达是至关重要的．抑制素α亚基启动子上的CRE位点（cAMP反应元件）的特异突变，能够完全消除Sf1和wnt信号通路的协同调控作用．本研究还发现，cAMP信号通路参与的协同调控抑制素α亚基的表达是通过CRE结合蛋白（CREB-1）介导实现的．利用CREB-1特异的shRNA敲降CREB-1的蛋白水平，能够消除cAMP信号通路参与的协同调控抑制素α亚基的表达．此外，特异的突变Sf1蛋白配体结合域（LBD区）的氨基酸残基235—238能够影响Sf1和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基的转录表达，这表明，Wnt信号通路参与了Sf1和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基转录表达的过程．

关键词：抑制素α cAMP cAMP反应元件类固醇生成因子1 β-链环蛋白

绵羊抑制素α不同免疫制剂的制备及其免疫效果评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

绵羊抑制素α不同免疫制剂的制备及其免疫效果评价

作者：丽娜·沙肯石河子大学

学位级别：硕士

目的:新疆是我国五大牧区之一,在畜牧业方面拥有较大的发展空间。哈萨克羊是新疆地方粗毛羊品种,因其生产性能优良,肉质细嫩可口而深受当地人们的青睐。然而,哈萨克羊繁殖力较低且繁殖周期长的繁殖方式,使羊肉供给量远远不能满足市场需... 详细信息

目的:新疆是我国五大牧区之一,在畜牧业方面拥有较大的发展空间。哈萨克羊是新疆地方粗毛羊品种,因其生产性能优良,肉质细嫩可口而深受当地人们的青睐。然而,哈萨克羊繁殖力较低且繁殖周期长的繁殖方式,使羊肉供给量远远不能满足市场需求。因此,探索提高哈萨克羊繁殖效率的新方法和新技术成为当下研究新疆绵羊养殖业的主要问题之一。抑制素α可通过内分泌负反馈调节途径选择性地抑制促卵泡素（FSH）的合成与分泌,从而影响动物的繁殖力。因此,本研究根据抑制素α（INHα）功能特点,运用生物信息学技术、蛋白质纯化技术、抗体纯化技术,获得免疫效价高的INHα抗原,再运用基因免疫方法将INHα主动和被动免疫哈萨克羊,进而研究INHα对哈萨克羊血液生殖激素含量的影响,为INHα在提高新疆绵羊繁殖效率研究中的作用机制提供参考数据,同时也为制备驼抗INHα抗体提供新思路。方法:（1）对INHα重组质粒原核表达菌株进行诱导表达条件的优化及鉴定,以镍柱亲和层析纯化法和尿素透析复性法收集表达蛋白,该蛋白用肠激酶酶切并对其进行二次纯化,用Western blotting鉴定蛋白的免疫原性,并对INHα蛋白进行生物信息学分析。（2）用经纯化的INHα重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗INHα多克隆抗体,并对其进行纯化,用间接ELISA方法检测抗体效价,用Western blotting验证抗体与目的蛋白结合的特异性。（3）将45只哈萨克羊随机分为三组,分别为A组（INHα多克隆抗体免疫组）、B组（INHα重组蛋白免疫组）、C组（对照组）,应用ELISA生殖激素检测试剂盒检测三组绵羊血液生殖激素含量,并对绵羊血液生化指标进行检测,最后用SPSS软件分析数据。结果:（1）INHα蛋白在37℃,终浓度为0.1mmol/L的IPTG中,诱导4h时以包涵体形式大量表达,纯化并肠激酶酶切后的INHα蛋白纯度高并具有免疫原性。生物信息学分析结果显示,INHα是含有信号肽,但无跨膜结构的一种不稳定脂溶性蛋白,在二级结构中,INHα包含的α螺旋占16.11%,β转角占3.06%,延伸链占16.94%,无规则卷曲占63.89%,INHα具有3种相似度高的三级结构模型,其中,模型二的C值得分最高并且可靠。（2）经过70天的免疫,双峰驼体内抗体效价达1:512000,该抗体可与INHα蛋白特异性结合。（3）在免疫INHα抗原前,三组间的FSH、LH、E2、INH、P4含量均处于平衡状态,各组间差异不显著（P＞0.05）。而免疫后的A组FSH含量显著高于C组（P＜0.05）,B组FSH含量高于C组,但没有达到差异显著水平（P＞0.05）。A组LH含量和B组LH含量均低于C组,但差异不显著（P＞0.05）。A组P4含量和B组P4含量均高于C组,但差异均未达到显著水平（P＞0.05）。A组的E2含量显著高于C组（P＜0.05）,B组E2含量高于C组,但差异不显著（P＞0.05）。A组的INH含量显著低于C组（P＜0.05）,B组的INH含量低于C组,但差异不显著（P＞0.05）。对绵羊血液生化指标进行检测,发现INHα蛋白和INHα多克隆抗体均没有对绵羊肝脏、心脏和肾脏功能产生副作用,该抗原具有安全性。结论:（1）成功诱导表达、并纯化出以包涵体形式存在的具有免疫原性的INHα蛋白。（2）INHα蛋白免疫使骆驼体内产生了大量抗体。（3）INHα蛋白主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素均产生一定的影响,但相比较被动免疫效果更佳,并且INHα蛋白和INHα多克隆抗体两种抗原没有对绵羊机体产生不良作用。

关键词：抑制素α 诱导表达主动免疫被动免疫哈萨克羊生殖激素

抑制素α和β聚糖在反复植入失败患者子宫内膜中的表达研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国性科学 2021年第9期30卷 49-51页

作者：李伟伟于涛刘聪殷秀荣陈超超陈伟伟秦皇岛市妇幼保健院生殖医学科河北秦皇岛066000 潍坊医学院生命科学与技术学院山东潍坊261053 秦皇岛市妇幼保健院病理科河北秦皇岛066000 秦皇岛市妇幼保健院超声科河北秦皇岛066000

目的探讨抑制素α和β聚糖在反复植入失败(RIF)患者子宫内膜中的表达情况。方法选取2018年5月至2019年12月在秦皇岛市妇幼保健院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵质内单精子注射(ICSI)助孕治疗的30例不孕患者作为研究对象。其中由于... 详细信息

目的探讨抑制素α和β聚糖在反复植入失败(RIF)患者子宫内膜中的表达情况。方法选取2018年5月至2019年12月在秦皇岛市妇幼保健院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵质内单精子注射(ICSI)助孕治疗的30例不孕患者作为研究对象。其中由于男方因素或者输卵管因素首次进行助孕治疗后妊娠并分娩的15例患者纳入对照组,因同样因素助孕至少进行3次移植均未妊娠的15例患者纳入RIF组。采用化学发光法检测性激素水平,观察控制性促排卵指标,采用Westernblotting检测子宫内膜中抑制素α和β聚糖蛋白的表达情况。结果RIF组抑制素α和β聚糖蛋白相对表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P抑制素α预测RIF的敏感度为80.00%,特异度为93.30%,曲线下的面积(AUC)为0.904;β聚糖预测RIF的敏感度为46.70%,特异度为86.70%,AUC为0.713。结论抑制素α和β聚糖在RIF患者的子宫内膜中高表达,抑制素α对RIF有很好的预测作用。

关键词：反复植入失败子宫内膜抑制素α β聚糖

卵巢子宫内膜样腺癌组织中细胞角蛋白、CA125、抑制素α的表达及临床意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床与病理杂志 2020年第3期40卷 601-609页

作者：郭云鸿王瑞芳田晓予河南科技大学第一附属医院妇产科河南洛阳471002

目的:观察卵巢子宫内膜样腺癌组织中细胞角蛋白(CKpan)、糖类抗原125(CA125)、抑制素α(inhibinα)表达水平,探究其临床意义。方法:选取2012年1月至2015年1月河南科技大学第一附属医院收治的卵巢子宫内膜样腺癌患者73例,通过手术取其卵... 详细信息

目的:观察卵巢子宫内膜样腺癌组织中细胞角蛋白(CKpan)、糖类抗原125(CA125)、抑制素α(inhibinα)表达水平,探究其临床意义。方法:选取2012年1月至2015年1月河南科技大学第一附属医院收治的卵巢子宫内膜样腺癌患者73例,通过手术取其卵巢子宫内膜样腺癌组织。另选择73例因宫颈癌切除卵巢且无卵巢转移患者的正常卵巢组织作为对照。采用免疫组织化学染色法检测CKpan,CA125和inhibinα的表达水平,分析CKpan,CA125,inhibinα与卵巢子宫内膜样腺癌临床病理特征及预后关系。结果:正常卵巢组织、子宫内膜异位症卵巢组织、卵巢子宫内膜样腺癌组织中CKpan和CA125表达率依次升高,两两比较差异有统计学意义(P素(均P素(P<0.05)。结论:CKpan,CA125在卵巢子宫内膜样腺癌组织中高表达率高,inhibinα高表达率低,三者与卵巢子宫内膜样腺癌患者分化程度、肌层浸润、FIGO分期、淋巴结转移等临床病理参数及预后密切相关,可能参与卵巢子宫内膜样腺癌发生发展。

关键词：卵巢子宫内膜样腺癌细胞角蛋白糖类抗原125 抑制素α 临床意义

人抑制素α亚基单克隆抗体的初步应用Ⅰ．免疫组织化学定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

河南医学研究 1996年第2期5卷 110-112页

作者：张义国夏辉明宫亚欧殷智榕高晓东河南医科大学病理生理学教研室河南医科大学病理学教研室

本文用本室制备的人抑制素α亚基（ＩＮＨα）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），采用链霉卵白素－生物素－过氧化物酶（ＬＳＡＢ）免疫组织化学染色程序，对睾丸和卵巢中ＩＮＨα免疫性进行定位，光镜观察结果：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞、精原... 详细信息

本文用本室制备的人抑制素α亚基（ＩＮＨα）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），采用链霉卵白素－生物素－过氧化物酶（ＬＳＡＢ）免疫组织化学染色程序，对睾丸和卵巢中ＩＮＨα免疫性进行定位，光镜观察结果：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞、精原细胞、精母细胞和卵巢颗粒细胞、黄体细胞的胞浆内存在明显的人ＩＮＨαＭｃＡｂ的阳性免疫染色，Ｌｅｙｄｉｇ细胞和泡膜细胞呈弱阳性着色。其中部分阳性细胞的胞膜和（或）胞核也呈阳性反应。

关键词：抑制素α 单克隆抗体免疫组织化学

抑制素α主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2021年第2期48卷 658-667页

作者：丽娜·沙肯巴合提·博代杨华解津刚董巧燕吾热力哈孜·哈孜汗石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子834000

为了研究抑制素α(INHα)主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响,本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上,将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗抑制素α多克隆抗体,并对其进行纯化,... 详细信息

为了研究抑制素α(INHα)主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响,本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上,将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗抑制素α多克隆抗体,并对其进行纯化,检测抗体效价,验证抗体的特异性。之后选择3~5岁、发情时间相近并处于间情期的45只成年哈萨克羊随机分为3组,分别作为抑制素α多克隆抗体免疫组(A组)、抑制素α重组蛋白免疫组(B组)及对照组(C组),每隔10 d连续进行3次加强免疫,应用ELISA法检测在绵羊繁殖活动中具有重要功能的5种生殖激素:促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮素(P 4)、雌激素(E 2)、抑制素(INH),并检测血液生化指标。结果显示,IPTG的最佳诱导浓度是0.6 mmol/L,在4 h时诱导出产量较高的抑制素α包涵体蛋白,纯化后的抑制素α重组蛋白纯度较高,并具有较好的免疫原性,经进一步验证发现,制备的抑制素α抗体效价为1∶512000,该抗体可与抑制素α重组蛋白特异性结合。说明成功制备了具有免疫原性的抑制素α重组蛋白和高效价的驼抗抑制素α多克隆抗体。免疫后A组LH、P 4含量和B组FSH、LH、P 4、E 2、INH含量与C组相比差异不显著(P>0.05),而A组FSH含量和E 2含量显著高于C组(P抑制素α蛋白和抑制素α抗血清两种免疫制剂免疫后,试验动物均没有出现不良症状。说明两种抑制素α抗原均可对哈萨克羊血液生殖激素的分泌产生良好效果,相比之下抑制素α抗血清免疫效果更佳。

关键词：抑制素α 免疫哈萨克羊多克隆抗体生殖激素